本文關(guān)鍵詞：阪崎克羅諾桿菌侵襲血腦屏障主要細(xì)胞特性研究

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【摘要】：阪崎克羅諾桿菌(Cronobacter sakazakii)是一種重要的食源性致病菌,能引起新生兒嚴(yán)重的菌血癥、小腸結(jié)腸炎和腦膜炎。其中,由阪崎克羅諾桿菌引起的腦膜炎是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重感染的疾病,嚴(yán)重者甚至死亡。目前,有研究證實(shí)阪崎克羅諾桿菌污染食品后,可侵入血液,經(jīng)血液傳播,通過血腦屏障侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)而引起腦膜炎,然而阪崎克羅諾桿菌如何穿過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)還沒有定論。本研究以40株前期篩選得到的阪崎克羅諾桿菌為材料,采用多位點(diǎn)序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)結(jié)合腸桿菌基因間重復(fù)序列PCR分型(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR,ERIC-PCR)方法,通過生物信息學(xué)分析,篩選出與臨床致病性有明顯相關(guān)性的代表性菌株。使用血腦屏障(Blood brain barrier,BBB)主要組成細(xì)胞人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human brain microvessel endothelial cell)和星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)作為供試細(xì)胞,通過體外侵襲、穿胞及細(xì)胞因子檢測等試驗(yàn),驗(yàn)證了阪崎克羅諾桿菌侵襲血腦屏障主要組成細(xì)胞的能力,為更好的揭示由阪崎克羅諾桿菌引發(fā)腦膜炎的部分致病機(jī)理提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)40株阪崎克羅諾桿菌MLST和ERIC-PCR分型結(jié)果顯示:MLST方法可將40株菌分為23個ST(Sequence type)型,以ST1、ST4和ST93等型別比較常見。研究檢出13個新的ST型,分別為:ST441、ST442、ST443、ST444、ST445、ST446、ST447、ST448、ST449、ST450、ST451、ST452及ST453。結(jié)合ERIC-PCR聚類分析結(jié)果,研究選取菌株35-15-1(ST4)、36-8-1(ST4)、6-16(2)(ST4)、2-9(1)(ST4)、12-12(2)(ST93)用于細(xì)胞試驗(yàn)。(2)阪崎克羅諾桿菌對HBMEC和U251細(xì)胞的侵襲和穿胞試驗(yàn)結(jié)果表明:所有供試菌株均能侵襲并穿過該兩種細(xì)胞,ST4型菌株36-8-1對2種細(xì)胞的侵襲能力均最強(qiáng),侵襲率分別為0.11%和0.0076%,與對照菌株(ATCC BAA-894)相比具有顯著性差異。ST4型菌株35-15-1穿過兩種細(xì)胞的能力最強(qiáng),6 h時,該菌株對HBMEC的穿胞率高達(dá)0.23%。采用透射電鏡法對被侵襲后的細(xì)胞和細(xì)菌的相對位置進(jìn)行觀察后,我們發(fā)現(xiàn)細(xì)菌分別存在于細(xì)胞外部、細(xì)胞膜上及細(xì)胞內(nèi)部,表明源自于嬰幼兒配方粉和米粉的阪崎克羅諾桿菌能夠穿過血腦屏障主要組成細(xì)胞。(3)ELISA法測定TNF-α和IL-1含量的試驗(yàn)表明,所有供試菌株作用于HBMEC和U251細(xì)胞時均能導(dǎo)致細(xì)胞因子TNF-α和IL-1含量增加。ST4型菌株36-8-1作用于HBMEC和U215細(xì)胞后,細(xì)胞分泌的TNF-α和IL-1含量較高,與對照菌株ATCC BAA-894相比均有顯著的差異。初步闡明阪崎克羅諾桿菌侵入血腦屏障主要細(xì)胞時,腦脊液中的TNF-α和IL-1水平會增高。(4)LDH釋放活性試驗(yàn)結(jié)果表明:隨著阪崎克羅諾桿菌侵襲細(xì)胞時間的增加,HBMEC和U251細(xì)胞LDH釋放活性也會隨之增加,兩種細(xì)胞的受損程度隨著侵襲時間的延長而增加,血腦屏障存在被嚴(yán)重破壞的可能性。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：TS201.3;R742.9

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