本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細胞對膠質(zhì)瘤細胞趨向性的實驗研究

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【摘要】：目的：觀察神經(jīng)干細胞在體外培養(yǎng)條件下是否有向膠質(zhì)瘤細胞趨向的特性。方法：1.從胎小鼠腦組織中分離出神經(jīng)干細胞,采用神經(jīng)干細胞克隆懸浮法,選用DMEM/F12培養(yǎng)液,添加無血清培養(yǎng)添加劑B27、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)及表皮細胞生長因子(EGF)進行體外擴增培養(yǎng),機械消化的方法分離連續(xù)傳代培養(yǎng),倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),并采用免疫熒光化學(xué)法檢測神經(jīng)干細胞標(biāo)志物神經(jīng)上皮干細胞蛋白(Nestin)的表達,免疫細胞化學(xué)法檢測分化后細胞神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達；2.用Transwell細胞小室作神經(jīng)干細胞對膠質(zhì)瘤細胞趨向性實驗：實驗組取C6膠質(zhì)瘤細胞懸液,對照組取3T3成纖維細胞懸液,空白組取無血清培養(yǎng)基,各組600μ1分別加入細胞培養(yǎng)室的下室；所有培養(yǎng)室的上室加處于對數(shù)生長期的神經(jīng)干細胞懸液200μl,將Transwell細胞小室放入培養(yǎng)箱中共同培養(yǎng),光鏡下計數(shù)從上室上表面遷移至下表面的神經(jīng)干細胞數(shù)；3.預(yù)誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞對膠質(zhì)瘤細胞趨向性實驗：在神經(jīng)干細胞懸液中加入10%胎牛血清和維甲酸(0.5μg/ml)進行預(yù)誘導(dǎo)5小時作實驗組,對照組取未誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞懸液,空白組取預(yù)誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞懸液各200μ1加入細胞培養(yǎng)室的上室；實驗組和對照組下室加C6膠質(zhì)瘤細胞懸液600μ1,空白組下室加無血清培養(yǎng)基600μ1,將Transwell細胞小室放入培養(yǎng)箱中共同培養(yǎng),光鏡下計數(shù)從上室上表面遷移至下表面的神經(jīng)干細胞數(shù)。結(jié)果：1.從胎鼠腦組織分離的細胞在含有無血清培養(yǎng)添加劑B27、堿性成纖維細胞生長因子及表皮細胞生長因子的神經(jīng)干細胞培養(yǎng)液中,能形成大量懸浮的神經(jīng)干細胞球,經(jīng)免疫熒光化學(xué)法鑒定,巢蛋白抗體標(biāo)記陽性,免疫細胞化學(xué)法鑒定分化后的神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞的特異性抗原NSE及GFAP表達陽性；2.在未預(yù)誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞對膠質(zhì)瘤細胞趨向?qū)嶒炛?從上室上表面遷移至下表面的神經(jīng)干細胞數(shù)分別為221.50±34.46(實驗組),86.50±23.09(對照組)和24.00±11.15(空白組),實驗組遷移的神經(jīng)干細胞數(shù)明顯多于對照組及空白組,三者比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.預(yù)誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞對膠質(zhì)瘤細胞趨向?qū)嶒炛?從上室上表面遷移至下表面的神經(jīng)干細胞數(shù)分別為247.00±45.18(實驗組),212.50±34.46(對照組)和30.00±11.15(空白組),實驗組遷移的神經(jīng)干細胞數(shù)明顯多于對照組及空白組,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.本研究分離培養(yǎng)出了神經(jīng)干細胞,方法簡單有效。2.本研究觀察到神經(jīng)干細胞在體外有向膠質(zhì)瘤細胞趨向的特性。3.本研究觀察到預(yù)誘導(dǎo)狀態(tài)下神經(jīng)干細胞有比未誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞更強的向腦膠質(zhì)瘤細胞趨向的趨勢。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：1214802