本文關鍵詞：Eg5蛋白及其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine在神經(jīng)母細胞瘤中表達及功能研究

  更多相關文章： 神經(jīng)母細胞瘤 Eg5蛋白 S-Trityl-L-Cysteine(STLC)

【摘要】：目的:我們旨在研究驅動蛋白Eg5在神經(jīng)母細胞瘤中表達及其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine(STLC)對神經(jīng)母細胞瘤不同細胞的誘導功能作用。方法:通過免疫熒光及western blot、流式細胞術檢測Eg5蛋白在神經(jīng)母細胞瘤(組織及細胞)中的表達水平;通過相差顯微鏡觀察STLC對細胞形態(tài)學影響;采用CCK-8法檢測STLC對細胞增殖影響;流式細胞術檢測STLC對細胞周期的影響;以流式細胞術及western blot檢測經(jīng)STLC誘導后細胞蛋白表達變化;并經(jīng)DAPI實驗觀察STLC對細胞核形態(tài)變化的影響;最后,通過采用FISH法檢測STLC對原癌基因MYCN擴增的影響,免疫熒光法觀察紡錘絲變化等實驗,初步研究誘導機制。結果:1.通過免疫熒光及western blot、流式細胞術等實驗顯示Eg5蛋白在神經(jīng)母細胞瘤組織及細胞株中穩(wěn)定表達。2.以Eg5蛋白靶向抑制劑對不同神經(jīng)母細胞瘤細胞誘導后,細胞胞體形態(tài)增大,突出于水平面,細胞核增大,細胞增殖抑制明顯;CCK-8細胞凋亡檢測見細胞增殖抑制明顯;流式細胞儀檢測示在STLC誘導后,細胞凋亡增多。細胞周期抑制于G2/M,細胞核分裂停止;western blot、流式細胞術檢測可見在STLC誘導之后,Eg5蛋白表達減少;DAPI實驗顯示細胞核增大明顯,后期出現(xiàn)核碎裂等細胞凋亡現(xiàn)象;FISH檢測見MYCN基因擴增未見明顯變化。結論:神經(jīng)母細胞瘤組織及細胞中均穩(wěn)定表達Eg5蛋白,其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine(STLC)通過抑制Eg5功能,影響神經(jīng)母細胞瘤細胞的分裂及增殖,從而促進細胞凋亡。結果提示Eg5有望作為神經(jīng)母細胞瘤分子治療的靶點。
【關鍵詞】：神經(jīng)母細胞瘤 Eg5蛋白 S-Trityl-L-Cysteine(STLC)
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 緒論10-12
• 一 驅動蛋白EG5在神經(jīng)母細胞瘤中的表達12-22
• 1.材料和試劑12-15
• 1.1 主要儀器及常用耗材12
• 1.2 實驗主要相關試劑12-13
• 1.3 主要試劑配制方法13-14
• 1.4 所選細胞及病例資料14-15
• 2.實驗方法15-17
• 2.1 FISH法檢測細胞株MYCN基因擴增方法15
• 2.2 組織免疫熒光實驗方法及細胞免疫熒光實驗方法15-16
• 2.3 流式細胞儀檢測細胞蛋白表達方法16-17
• 2.4 蛋白免疫印記（Western-blotting）17
• 3.實驗結果17-21
• 3.1 細胞MYCN擴增情況17-18
• 3.2 免疫熒光(組織)18-20
• 3.3 免疫熒光(細胞)20
• 3.4 流式細胞儀檢測細胞蛋白表達20-21
• 3.5 蛋白免疫印記（細胞水平）21
• 4.小結21-22
• 二 驅動蛋白EG5靶向抑制劑S-TRITYL-L-CYSTEINE（STLC）對神經(jīng)母細胞瘤不同細胞株誘導研究22-32
• 1.材料和試劑22
• 2.實驗方法介紹22-26
• 2.1 細胞培養(yǎng)技術及細胞形態(tài)觀察22-24
• 2.2 CCK-8法檢測細胞增值變化24
• 2.3 細胞免疫熒光觀察Eg5蛋白表達變化24-25
• 2.4 流式細胞儀檢測細胞凋亡25
• 2.5 流式細胞儀檢測細胞周期25
• 2.6 流式細胞儀檢測細胞蛋白表達變化25-26
• 2.7 Western-blot檢測細胞蛋白表達變化26
• 2.8 DAPI細胞核染色實驗26
• 3.實驗結果26-32
• 3.1 相差顯微鏡對細胞形態(tài)觀察26-28
• 3.2 CCK-8 法檢測細胞增殖變化28
• 3.3 免疫熒光觀察Eg5蛋白表達變化28-29
• 3.4 流式細胞儀檢測細胞凋亡29
• 3.5 流式細胞儀檢測細胞周期29-30
• 3.6 流式細胞儀檢測細胞蛋白表達變化30
• 3.7 Western-blot檢測細胞蛋白表達變化30-31
• 3.8 DAPI細胞核染色實驗31-32
• 4.小結32
• 三 神經(jīng)母細胞瘤細胞經(jīng)驅動蛋白EG5靶向抑制劑S-TRITYL-L-CYSTEINE（STLC）誘導機制初步研究32-37
• 1.引言32-33
• 2.實驗方法介紹33-34
• 2.1 FISH熒光探針法檢測STLC誘導后MYCN基因擴增變化33
• 2.2 細胞免疫熒光觀察 α-tubulin蛋白變化33-34
• 3.實驗結果34-36
• 3.1 FISH熒光探針法檢測MYCN基因擴增變化情況34-35
• 3.2 細胞免疫熒光檢測細胞 α-tubulin變化35-36
• 4.小結36-37
• 四 討論37-39
• 五 參考文獻39-42
• 六 綜述 驅動蛋白Eg5的生物學功能,調節(jié)機制及靶向抑制劑研究進展42-56
• 參考文獻50-56
• 致謝56-57
• 參加學術會議57
• 參與科學課題研究57
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文目錄57
• 個人榮譽57

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