本文關(guān)鍵詞：Eg5蛋白及其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中表達(dá)及功能研究

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【摘要】：目的:我們旨在研究驅(qū)動蛋白Eg5在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中表達(dá)及其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine(STLC)對神經(jīng)母細(xì)胞瘤不同細(xì)胞的誘導(dǎo)功能作用。方法:通過免疫熒光及western blot、流式細(xì)胞術(shù)檢測Eg5蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤(組織及細(xì)胞)中的表達(dá)水平;通過相差顯微鏡觀察STLC對細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響;采用CCK-8法檢測STLC對細(xì)胞增殖影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測STLC對細(xì)胞周期的影響;以流式細(xì)胞術(shù)及western blot檢測經(jīng)STLC誘導(dǎo)后細(xì)胞蛋白表達(dá)變化;并經(jīng)DAPI實(shí)驗(yàn)觀察STLC對細(xì)胞核形態(tài)變化的影響;最后,通過采用FISH法檢測STLC對原癌基因MYCN擴(kuò)增的影響,免疫熒光法觀察紡錘絲變化等實(shí)驗(yàn),初步研究誘導(dǎo)機(jī)制。結(jié)果:1.通過免疫熒光及western blot、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)顯示Eg5蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞株中穩(wěn)定表達(dá)。2.以Eg5蛋白靶向抑制劑對不同神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞誘導(dǎo)后,細(xì)胞胞體形態(tài)增大,突出于水平面,細(xì)胞核增大,細(xì)胞增殖抑制明顯;CCK-8細(xì)胞凋亡檢測見細(xì)胞增殖抑制明顯;流式細(xì)胞儀檢測示在STLC誘導(dǎo)后,細(xì)胞凋亡增多。細(xì)胞周期抑制于G2/M,細(xì)胞核分裂停止;western blot、流式細(xì)胞術(shù)檢測可見在STLC誘導(dǎo)之后,Eg5蛋白表達(dá)減少;DAPI實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞核增大明顯,后期出現(xiàn)核碎裂等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象;FISH檢測見MYCN基因擴(kuò)增未見明顯變化。結(jié)論:神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞中均穩(wěn)定表達(dá)Eg5蛋白,其靶向抑制劑S-Trityl-L-Cysteine(STLC)通過抑制Eg5功能,影響神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的分裂及增殖,從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)果提示Eg5有望作為神經(jīng)母細(xì)胞瘤分子治療的靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)母細(xì)胞瘤 Eg5蛋白 S-Trityl-L-Cysteine(STLC)
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 緒論10-12
• 一 驅(qū)動蛋白EG5在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)12-22
• 1.材料和試劑12-15
• 1.1 主要儀器及常用耗材12
• 1.2 實(shí)驗(yàn)主要相關(guān)試劑12-13
• 1.3 主要試劑配制方法13-14
• 1.4 所選細(xì)胞及病例資料14-15
• 2.實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 2.1 FISH法檢測細(xì)胞株MYCN基因擴(kuò)增方法15
• 2.2 組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)方法及細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 2.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞蛋白表達(dá)方法16-17
• 2.4 蛋白免疫印記（Western-blotting）17
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-21
• 3.1 細(xì)胞MYCN擴(kuò)增情況17-18
• 3.2 免疫熒光(組織)18-20
• 3.3 免疫熒光(細(xì)胞)20
• 3.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞蛋白表達(dá)20-21
• 3.5 蛋白免疫印記（細(xì)胞水平）21
• 4.小結(jié)21-22
• 二 驅(qū)動蛋白EG5靶向抑制劑S-TRITYL-L-CYSTEINE（STLC）對神經(jīng)母細(xì)胞瘤不同細(xì)胞株誘導(dǎo)研究22-32
• 1.材料和試劑22
• 2.實(shí)驗(yàn)方法介紹22-26
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及細(xì)胞形態(tài)觀察22-24
• 2.2 CCK-8法檢測細(xì)胞增值變化24
• 2.3 細(xì)胞免疫熒光觀察Eg5蛋白表達(dá)變化24-25
• 2.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡25
• 2.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期25
• 2.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞蛋白表達(dá)變化25-26
• 2.7 Western-blot檢測細(xì)胞蛋白表達(dá)變化26
• 2.8 DAPI細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)26
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-32
• 3.1 相差顯微鏡對細(xì)胞形態(tài)觀察26-28
• 3.2 CCK-8 法檢測細(xì)胞增殖變化28
• 3.3 免疫熒光觀察Eg5蛋白表達(dá)變化28-29
• 3.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡29
• 3.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期29-30
• 3.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞蛋白表達(dá)變化30
• 3.7 Western-blot檢測細(xì)胞蛋白表達(dá)變化30-31
• 3.8 DAPI細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)31-32
• 4.小結(jié)32
• 三 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞經(jīng)驅(qū)動蛋白EG5靶向抑制劑S-TRITYL-L-CYSTEINE（STLC）誘導(dǎo)機(jī)制初步研究32-37
• 1.引言32-33
• 2.實(shí)驗(yàn)方法介紹33-34
• 2.1 FISH熒光探針法檢測STLC誘導(dǎo)后MYCN基因擴(kuò)增變化33
• 2.2 細(xì)胞免疫熒光觀察 α-tubulin蛋白變化33-34
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-36
• 3.1 FISH熒光探針法檢測MYCN基因擴(kuò)增變化情況34-35
• 3.2 細(xì)胞免疫熒光檢測細(xì)胞 α-tubulin變化35-36
• 4.小結(jié)36-37
• 四 討論37-39
• 五 參考文獻(xiàn)39-42
• 六 綜述 驅(qū)動蛋白Eg5的生物學(xué)功能,調(diào)節(jié)機(jī)制及靶向抑制劑研究進(jìn)展42-56
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56-57
• 參加學(xué)術(shù)會議57
• 參與科學(xué)課題研究57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄57
• 個人榮譽(yù)57

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