本文關鍵詞：細胞外熱休克蛋白70在嚴重燒傷大鼠腸粘膜的表達變化及其對腸道T細胞免疫功能的影響

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【摘要】：目的：觀察嚴重燒傷大鼠腸粘膜組織細胞外熱休克蛋白70及IL-2表達變化情況，另外分離嚴重燒傷后大鼠腸道淋巴結CD3+T細胞，予以細胞外HSP70（eHSP70）刺激體外培養(yǎng)，以此來探討eHSP70對腸道T細胞免疫的影響。 方法：把60只健康雄性SD大鼠，隨機分成正常對照組和燒傷后3小時、6小時、12小時、24小時、48小時組，每組各10只，用控時控溫控壓蒸汽燙傷儀在每只燙傷組大鼠背部造成全身體表面積為30%的III度燒傷，于各時相點頸椎脫臼處死SD大鼠，提取腸粘膜組織，采用ELISA方法檢測eHSP70和IL-2的表達變化。采用流式細胞分選技術分選嚴重燒傷12h后雄性SD大鼠腸道淋巴結CD3+T細胞，將體外培養(yǎng)的CD3+T細胞隨機分成空白對照組和eHSP70低濃度、中濃度、高濃度刺激組共4組。其中空白對照組不加eHSP70，低、中、高濃度組分別加入終濃度為5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的eHSP70，采用流式細胞技術檢測Th1/Th2細胞比例及CD3+T細胞凋亡率；采用ELISA方法檢測IL-2和IL-10在培養(yǎng)液上清中的表達變化。 結果： （1）大鼠燒傷后各時相點腸粘膜eHSP70的表達均降低，與正常對照組(1278±327.3)比較，燒傷后3h(538±40.4)大鼠腸粘膜eHSP70表達已經(jīng)下降，燒傷后12h(314±20.5)達到最低值，約為正常對照組的1/4，在燒傷后24h(528±40.4)后表達開始逐步回升，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （2）與正常對照組(48.63±7.89)比較，各燙傷組大鼠腸粘膜IL-2的表達均降低，于燒傷后12h(25.36±8.58)達到最低值，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 （3嚴重燒傷大鼠腸粘膜eHSP70和IL-2相對表達量呈正相關r=0.920,p0.01。 （4）與空白對照組比較，eHSP70刺激組Th1的比例均增高，而Th2的比例均降低，并均以終濃度為10μg/ml的中濃度組表現(xiàn)最明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 （5）與空白對照組比照，eHSP70刺激組的CD3+T細胞總凋亡率均下降，，其中終濃度為10μg/ml的中濃度組凋亡率最低，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 （6）與空白對照組比較，eHSP70刺激組的IL-2表達均增加，其中終濃度為10μg/ml的中濃度組增加最明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；而eHSP70刺激組中IL-10與空白對照組比較表達均無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論：大鼠嚴重燒傷后腸粘膜組織eHSP70含量下降，可能參與了腸道的T細胞免疫反應。適宜濃度的eHSP70可以降低T細胞凋亡率，增強T細胞活性，促進T細胞由Th0向Th1方向分化，促進IL-2的釋放，可作為糾正或逆轉燒傷后免疫功能紊亂狀態(tài)的一個新的靶點。
【關鍵詞】：燒傷 細胞外熱休克蛋白70 T淋巴細胞 腸道免疫
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R644
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料和方法12-20
• 2.1 實驗動物的選擇12
• 2.2 實驗主要儀器和試劑12-13
• 2.2.1 實驗主要儀器12
• 2.2.2 實驗主要試劑12-13
• 2.2.3 實驗溶液配制13
• 2.3 實驗分組13-14
• 2.3.1 動物實驗分組13-14
• 2.3.2 體外實驗分組14
• 2.4 實驗樣品準備14-17
• 2.4.1 SD 大鼠燙傷模型建立14
• 2.4.2 腸粘膜組織 eHSP70、IL-2 樣本提取14
• 2.4.3 腸道及腸系膜 PP 結淋巴細胞分離14-15
• 2.4.4 CD3~+T 細胞流式細胞儀分選15-16
• 2.4.5 重組 eHSP70 刺激 CD3~+T 細胞體外培養(yǎng)16-17
• 2.5 實驗方法和步驟17-19
• 2.5.1 ELISA 法檢測腸粘膜組織eHSP70、IL-2 和細胞培養(yǎng)液中IL-2、IL-10含量17-18
• 2.5.2 流式細胞術檢測 Th1 和 Th2 細胞比例18
• 2.5.3 流式細胞術檢測 CD3~+T 細胞凋亡率18-19
• 2.6 統(tǒng)計學處理19-20
• 第3章 結果20-26
• 3.1 嚴重燒傷大鼠腸粘膜 eHSP70 的表達變化20-21
• 3.2 嚴重燒傷大鼠腸粘膜 IL-2 的表達變化21
• 3.3 嚴重燒傷大鼠腸粘膜 IL-2 和 eHSP70 相關性分析21-22
• 3.4 eHSP70 刺激后 Th1 和 Th2 細胞比例變化22-23
• 3.5 eHSP70 刺激后 CD3~+T 細胞凋亡率變化23-25
• 3.6 eHSP70 刺激后 IL-2 和 IL-10 的表達變化25-26
• 第4章 討論26-31
• 4.1 嚴重燒傷大鼠腸粘膜組織細胞外 HSP70 表達變化及其意義26-27
• 4.2 eHSP70 對嚴重燒傷大鼠 T 細胞免疫功能的影響27-31
• 4.2.1 eHSP70 對嚴重燒傷大鼠 Th1/Th2 漂移的影響27-28
• 4.2.2 eHSP70 對嚴重燒傷大鼠 T 細胞凋亡的影響28-29
• 4.2.3 eHSP70 對嚴重燒傷大鼠免疫細胞因子分泌的影響29-31
• 第5章 結論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-37
• 攻讀學位期間的研究成果37-38
• 綜述38-43
• 參考文獻41-43

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：889211