發(fā)布時(shí)間：2017-09-20 02:12

  本文關(guān)鍵詞：東亞鉗蝎毒素BmP01的疼痛活性研究

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【摘要】：被蝎子蟄刺引起的劇烈疼痛是一種常見的臨床癥狀,到目前為止,沒有一種很好有效的方法來緩解這種疼痛,重要原因之一是人們對這種疼痛產(chǎn)生的誘因知之甚少。本論文中我們從東亞鉗蝎(Buthus martensii Karsch, BMK)的毒液中分離純化到一個(gè)可以引起疼痛反應(yīng)的毒素BmP01,這是一個(gè)已經(jīng)報(bào)道過能抑制幾種電壓門控型K+通道亞型的毒素。BmP01是一條由29個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的多肽,其氨基酸序列為：ATCEDCPEHCATQNARAKCDNDKCVCEPK。這29個(gè)氨基酸殘基中包含有6個(gè)半光氨基酸殘基,形成3對二硫鍵,且配對方式為Cys1-Cys4, Cys2-Cys5, Cys3-Cys6,是典型的ICK (inhibitor cystine knot)模式。實(shí)驗(yàn)表明BmP01是通過激活TRPV1通道(transient receptor potential vanilloid 1 ion channel)這個(gè)眾所周知的疼痛感受器來誘導(dǎo)疼痛反應(yīng)的。在小鼠足底注射疼痛動物模型中,當(dāng)在小鼠后爪心注入毒素BmP01后5 min內(nèi),可以誘導(dǎo)正常小鼠產(chǎn)生顯著的急性疼痛,而在TRPV1基因敲除的小鼠上沒有作用。在膜片鉗電生理實(shí)驗(yàn)中,毒素BmP01能引起正常小鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)動作電位的變化而在TRPV1基因敲除的小鼠DRG上沒有影響,這一結(jié)果表明：1)毒素BmP01是蝎子毒液中能引起疼痛的成分之一；2)毒素BmP01是通過作用于TRPV1通道誘發(fā)疼痛的。據(jù)我們所知,這是首次報(bào)道蝎毒液中能引起疼痛的多肽分子,對該分子的結(jié)構(gòu)與功能的研究將為治療蝎蟄刺之后引起的疼痛癥狀提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：東亞鉗蝎蝎毒素 BmP01 TRPV1 K~+通道 疼痛
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R646
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮略詞列表10-13
• 第一章 緒論13-26
• 1.1 東亞鉗蝎簡介13-14
• 1.2 蝎神經(jīng)毒素概述14-19
• 1.2.1 蝎毒中短鏈神經(jīng)毒素14-16
• 1.2.2 蝎毒中的長鏈多肽16-19
• 1.3 TRP通道家族19-24
• 1.3.1 TRP通道的種類19-20
• 1.3.2 TRP通道特點(diǎn)20-24
• 1.4 論文的選題意義以及研究內(nèi)容24-26
• 1.4.1 論文選題意義24-25
• 1.4.2 研究內(nèi)容25-26
• 第二章 東亞鉗蝎蝎毒素提取和分離純化26-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法26-30
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料26-27
• 2.1.2 東亞鉗蝎蝎粗毒的提取27-28
• 2.1.3 凝膠過濾層析分離蝎粗毒28-29
• 2.1.4 蝎毒分子篩層析樣品疼痛活性測定29
• 2.1.5 RP-HPLC分離純化蝎毒分子篩Ⅲ號峰29-30
• 2.1.6 RP-HPLC分離純化蝎毒SVTX-Ⅲ-1g130
• 2.1.7 蝎毒SVTX-Ⅲ-1g1-3分子量的測定30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-35
• 2.2.1 東亞鉗蝎粗毒分子篩層析結(jié)果30-32
• 2.2.2 蝎毒分子篩Ⅲ號峰分離純化結(jié)果32-33
• 2.2.3 蝎毒SVTX-Ⅲ-1g1樣品RP-HPLC分離純化結(jié)果33-34
• 2.2.4 SVTX-Ⅲ-1g1-3分子量的測定結(jié)果34-35
• 2.3 討論35-36
• 第三章 毒素BmP01序列結(jié)構(gòu)及初步活性測定36-47
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法36-42
• 3.1.1. 實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 3.1.2 毒素BmP01蛋白序列測定37
• 3.1.3 毒素BmP01核酸序列測定37-41
• 3.1.4 毒素BmP01三維結(jié)構(gòu)測定41
• 3.1.5 毒素BmP01活性測定41-42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-45
• 3.2.1 BmP01的氨基酸序列42-43
• 3.2.2 BmP01的核酸序列43-44
• 3.2.3 BmP01的三維結(jié)構(gòu)44
• 3.2.4 BmP01在DRG上的活性44-45
• 3.3 討論45-47
• 第四章 毒素BmP01的TRP通道活性研究47-57
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法47-52
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料47-48
• 4.1.2 BmP01的K~+通道和TRP通道活性48-51
• 4.1.3 BmP01的疼痛模型實(shí)驗(yàn)51-52
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-55
• 4.2.1 BmP01的K~+通道活性52-53
• 4.2.2 BmP01的TRPV1通道活性53-54
• 4.2.3 BmP01對疼痛的影響54-55
• 4.3 討論55-57
• 第五章 總結(jié)與展望57-61
• 5.1 總結(jié)57-58
• 5.2 展望58-61
• 參考文獻(xiàn)61-72
• 致謝72-73
• 附錄A：培養(yǎng)基與溶液配方73-77
• 附錄B：攻讀碩士期間已發(fā)表和待發(fā)表論文77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：885279