發(fā)布時(shí)間：2017-09-15 15:09

  本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定及向肝臟樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及向肝臟樣細(xì)胞分化的方法。 方法將脂肪組織切成小于1mm3的碎片，用膠原酶Ⅰ消化離心法獲得人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，然后以1×104/cm2的細(xì)胞濃度，接種于含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)；觀察原代細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況；取第5代細(xì)胞接種于24孔板中，每天消化3個(gè)孔，計(jì)算細(xì)胞數(shù)量，取其平均數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；取第5代細(xì)胞，胰酶消化后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)表面抗原CD13、CD73、CD34、CD45和HLA-DR；取第5代細(xì)胞接種于6孔板中，實(shí)驗(yàn)組分別用誘導(dǎo)培養(yǎng)基向成脂及成骨方向誘導(dǎo)，對(duì)照組用含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，檢測(cè)其多向分化潛能；取第5代細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶及24孔板中，實(shí)驗(yàn)組用含有ActivinA、HGF、FGF、EGF、OSM、DMSO等細(xì)胞因子的兩階段法肝臟樣細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，對(duì)照組用含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長(zhǎng)情況，于誘導(dǎo)至第13天時(shí)，采用RT-PCR法檢測(cè)肝細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)，，采用PAS染色法檢測(cè)肝臟樣細(xì)胞糖原合成情況，采用細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)肝細(xì)胞相關(guān)抗原的表達(dá)。 結(jié)果用消化離心法分離獲取的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞大小均勻，呈梭形的成纖維細(xì)胞樣，細(xì)胞增殖良好；細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定表明接種后第3天細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期，第6天后生長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期，體外能長(zhǎng)期培養(yǎng)存活，并保持不分化狀態(tài)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明細(xì)胞高表達(dá)CD13、CD73，低表達(dá)CD34、CD45及HLA-DR；并能被誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞及成骨細(xì)胞；上述結(jié)果表明成功構(gòu)建了人原代脂肪干細(xì)胞系。人脂肪干細(xì)胞經(jīng)成肝誘導(dǎo)后，細(xì)胞形態(tài)由梭形逐漸變?yōu)槎嘟切位蝾悎A形。誘導(dǎo)至第13天時(shí)，RT-PCR檢測(cè)結(jié)果提示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞高表達(dá)ALB、AFP、CY3P4肝細(xì)胞相關(guān)基因，而對(duì)照組細(xì)胞呈低表達(dá)及無(wú)表達(dá)狀態(tài)；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞PAS染色呈紅色陽(yáng)性表現(xiàn)；細(xì)胞免疫組化證實(shí)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞高表達(dá)肝細(xì)胞特異性抗體HepPar-1、AFP、CK18、CK19，與肝癌細(xì)胞表達(dá)相同，而對(duì)照組細(xì)胞則表現(xiàn)為陰性。 結(jié)論利用消化離心法在體外能分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，在體外可長(zhǎng)期存活，反復(fù)傳代，誘導(dǎo)后可分化為肝臟樣細(xì)胞，為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞做為細(xì)胞治療、生物人工肝及肝組織工程的種子細(xì)胞提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 分離 鑒定 誘導(dǎo) 肝臟樣細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.3
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 引言12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-28
• 討論28-32
• 總結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 文獻(xiàn)綜述37-45
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章45-46
• 致謝46-47

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2 ;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子與不同來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年45期

3 李志勇;郭子寬;郭志坤;;釋放膜微粒:間充質(zhì)干細(xì)胞治療的新機(jī)制[J];組織工程與重建外科雜志;2012年03期

4 王佃亮;馬萍;王烈明;雷寧;吳誠(chéng);;間充質(zhì)干細(xì)胞過(guò)濾分離器的研制[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年08期

5 廖鋒;鄭揚(yáng);耿彬;唐朝樞;;促進(jìn)移植間充質(zhì)干細(xì)胞成骨的研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年10期

6 呼瑩,王秋英,馬麗,馬冠杰,姜學(xué)英,趙春華;胰腺源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與鑒定[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

7 王勁,羅成基,郭朝華,張勇;間充質(zhì)干細(xì)胞與相關(guān)因子[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2002年05期

8 許琴,朱依純,肖雁冰,田虹;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離及培養(yǎng)[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年02期

9 馬麗,呼瑩,馬冠杰,姜學(xué)英,趙春華;小鼠真皮間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及促進(jìn)造血恢復(fù)的研究[J];中華血液學(xué)雜志;2003年06期

10 張明偉,郭子寬,劉曉丹,吳英,侯春梅,毛寧;小鼠骨骼肌源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2003年05期

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1 李艷菊;胡亮杉;郭坤元;;間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)衰老大鼠睪丸的影響[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

2 郭勇;張西正;李瑞欣;張春秋;郭春;張彥軍;閆玉仙;;力學(xué)拉伸對(duì)經(jīng)5-氮胞苷誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響[A];第九屆全國(guó)生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

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5 韓欽;劉艷寧;何東南;閆曦;曹瑩;趙春華;;分離和鑒定小腸上皮干細(xì)胞及其可塑性與間充質(zhì)干細(xì)胞的比較[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

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8 肖娜;郭錦鵬;趙秀華;金文靜;盧光t;程臘梅;;不同來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2008年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

9 陳廣華;楊婷;付t$t$;苗瞄;金正明;唐曉文;韓悅;何廣勝;仇慧英;馬驍;陳峰;薛勝利;王熒;孫愛(ài)寧;吳德沛;;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療糖皮質(zhì)激素耐藥的難治性急性移植物抗宿主病19例分析[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

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1 滿學(xué)杰;天津?yàn)I海新區(qū)建最大間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學(xué)杰;津昂賽打造間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質(zhì)干細(xì)胞研究又見(jiàn)新方法[N];健康報(bào);2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所 曹楷;間充質(zhì)干細(xì)胞：干細(xì)胞中的孫悟空[N];上�？萍紙�(bào);2014年

5 記者　陳建強(qiáng);首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)在津建成[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

6 記者　馮國(guó)梧;細(xì)胞產(chǎn)品國(guó)家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

7 實(shí)習(xí)生 劉霞;間充質(zhì)干細(xì)胞有望用于面部整形[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

8 本報(bào)記者 王新佳;我國(guó)“原始間充質(zhì)干細(xì)胞”注射液進(jìn)入臨床研究[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

9 馮國(guó)梧;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)規(guī)模化運(yùn)營(yíng)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 劉瑩清;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)泰達(dá)規(guī)模運(yùn)營(yíng)[N];北方經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2008年

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1 陳亮;胰島素樣生長(zhǎng)因子1增強(qiáng)骨形態(tài)形成蛋白9介導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及成骨作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

2 鄭宗梅;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞作為骨組織工程種子細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

3 王憲英;腦組織微環(huán)境及神經(jīng)甾體對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

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5 郭虹;胎兒多種組織間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特征及胎兒骨髓血液血管干細(xì)胞特性的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

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8 來(lái)曉瑜;一個(gè)新的人間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表面抗原的鑒定和間充質(zhì)干細(xì)胞亞群生物學(xué)特性的研究[D];浙江大學(xué);2009年

9 韓春;牙根發(fā)育期相關(guān)間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 孫念政;胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞及其對(duì)糖尿病鼠降糖作用的研究[D];山東大學(xué);2009年

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1 王敏;羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞克隆的分離和生物學(xué)特性的研究[D];華東理工大學(xué);2010年

2 蘇曉華;牛胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

3 鄧長(zhǎng)卿;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及功能研究[D];蘇州大學(xué);2011年

4 楊晨;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定[D];吉林大學(xué);2013年

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6 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)理[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

7 王黎明;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分泌蛋白表達(dá)譜研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

8 唐秋靈;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向男性生殖細(xì)胞分化的研究[D];汕頭大學(xué);2008年

9 徐小霞;人胎盤絨毛層間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的優(yōu)化及生物學(xué)特性的初步分析[D];蘇州大學(xué);2009年

10 王建軍;成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)及成骨潛能的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2009年

本文編號(hào)：857259