本文關(guān)鍵詞：特異激活SHH信號通路對急性腦缺血大鼠NGF、BDNF表達的影響

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)生長因子 神經(jīng)源性營養(yǎng)因子 Shh信號通路 purmorphamine

【摘要】：背景和目的 缺血性腦血管疾病的病理損傷機制極為復雜。近年來的研究發(fā)現(xiàn)了一些具有神經(jīng)保護作用的因子，在缺血性腦血管疾病的恢復過程中發(fā)揮著重要作用。其中，神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)二者屬于神經(jīng)生長因子家族，也稱神經(jīng)營養(yǎng)素(NTs)。兩者能夠促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，對于神經(jīng)系統(tǒng)中成熟神經(jīng)元的正常功能的維持也是非常必要的。 Shh信號通路在胚胎發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中扮演十分重要的角色。實驗研究證實，，腦缺血后激活Shh信號通路可以促進室下區(qū)(subventricular zone,SVZ)神經(jīng)元細胞的再生。Shh信號通路由以下幾部分組成：Shh蛋白、Ptch蛋白、Smo蛋白和鋅指轉(zhuǎn)錄因子Gli蛋白。Shh信號通路被激活以后，Shh和Ptch結(jié)合，解除Smo的抑制效應，Smo促使Gli蛋白進入細胞核，目的基因從而被誘導。下游靶基因Gli蛋白的表達將增加，因此可以將Gli蛋白作為Shh信號是否激活的標志。 本實驗通過線栓法制作永久性大腦中動脈缺血模型，通過免疫組化學法檢測缺血腦組織中NGF、BDNF的表達，觀察Purmorphamine特異激活Shh信號通路后NGF、 BDNF的變化進而論述激活Shh信號通路在腦缺血中的神經(jīng)保護作用。 材料與方法 選取SD大鼠，運用線栓法制作永久性大腦中動脈缺血模型（MCAO）。選取健康成年雄性SD大鼠110只，SPF級，體重190～250g。實驗分組如下：假手術(shù)組（A組）；缺血組（B組）；藥物干預組（C組）。其中，假手術(shù)組10只，缺血組和藥物干預組按照時間點的不同可分為5個亞組即6h，24h，48h，72h，7天，每個亞組10只。假手術(shù)組只分離血管不插線栓。缺血組和藥物干預組采用線栓法造模。藥物干預組在造模成功后立即腹腔注射Purmorphamine溶液（0.691mg/kg）。Purmorphamine溶液配制方法：溶于有機溶劑二甲基甲酰胺（DMF），并且完全溶解。假手術(shù)組和缺血組給予同等劑量的DMF。成功造模后，觀察實驗動物是否具有神經(jīng)缺損癥狀，依據(jù)標準評分法，評分不達標的動物均棄之不用，排除出組的動物在后續(xù)的試驗中予以補充。于既定時間點，取出腦組織標本。免疫組化法檢測缺血側(cè)腦組織的NGF、BDNF的表達，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應（Real-time PCR）檢測缺血側(cè)腦組織Gli-1mRNA的表達。 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，所有結(jié)果均采用均數(shù)±標準差(±s)表示。組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗，檢驗水準：a=0.05。結(jié)果 1.各組NGF的表達情況 假手術(shù)組有少量NGF表達。缺血組、藥物干預組在缺血后6小時即有表達。24小時表達明顯增多，在缺血72小時達到峰值，之后呈下降趨勢。缺血組、藥物干預組和假手術(shù)組相比，NGF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。藥物干預組和缺血組各時間點相比，NGF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P 0.05)。 2.各組BDNF的表達情況 假手術(shù)組有少量BDNF表達。缺血組、藥物干預組在缺血后6小時即有表達。至72小時達到峰值，之后呈下降趨勢。缺血組、藥物干預組和假手術(shù)組相比，BDNF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P 0.05)。藥物干預組和缺血組各時間點相比，BDNF表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P 0.05)。 3.各組Gli-1mRNA的表達情況 假手術(shù)組有少量Gli-1mRNA表達。缺血組、藥物干預組在缺血后6小時即有表達。24小時表達明顯增多，之后呈下降趨勢。缺血組、藥物干預組和假手術(shù)組相比，Gli-1mRNA表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P 0.05)。藥物干預組和缺血組各時間點，Gli-1mRNA表達明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論 1.外源性給予Purmorphamine后，可以有效激活Shh信號通路。 2. Shh信號通路被有效激活后，可以促進腦缺血組織中NGF和BDNF的表達，從而發(fā)揮神經(jīng)修復作用。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)生長因子 神經(jīng)源性營養(yǎng)因子 Shh信號通路 purmorphamine
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 材料與方法14-22
• 1 材料14-16
• 2 實驗方法16-22
• 結(jié)果22-24
• 1．各組大鼠腦組織中 NGF 的表達情況22
• 2．各組大鼠腦組織中 BDNF 的表達情況22-23
• 3．各組大鼠腦組織中 Gli-1mRNA 的表達情況23-24
• 討論24-29
• 1．腦缺血與神經(jīng)損傷24-25
• 2．腦缺血與 NGF25
• 3．腦缺血與 BDNF25-26
• 4．激活 Shh 信號通路與神經(jīng)修復26-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻30-34
• 附圖34-37
• 綜述37-58
• 參考文獻51-58
• 英文縮略詞58-59
• 個人簡歷59
• 在校期間發(fā)表學術(shù)論文59-60
• 致謝60

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