本文關(guān)鍵詞：內(nèi)皮祖細(xì)胞移植在膿毒癥大鼠中的作用研究

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【摘要】：目的：探討EPCs移植在LPS引起的大鼠sepsis中的治療作用,探究內(nèi)皮組細(xì)胞對sepsis靶向治療的分子生物學(xué)機制提供基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù)。方法：采用密度梯度離心法分離SD大鼠的骨髓EPCs,接種在含20%優(yōu)質(zhì)胎牛血清的DMEM-F12完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)5代后采用流式細(xì)胞儀鑒定表面標(biāo)記物CD133、CD34的表達(dá),免疫熒光檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞特異性抗原CD133、CD34的表達(dá)。綠色熒光蛋白腺病毒轉(zhuǎn)染方法進行內(nèi)皮祖細(xì)胞熒光標(biāo)記,活體成像儀檢測及冰凍切片檢測組織中標(biāo)記熒光的EPCs在體內(nèi)的表達(dá)。大鼠隨機分為4組：正常對照組、內(nèi)皮祖細(xì)胞組(EPCs組)、膿毒癥模型組(LPS組)和內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療組(LPS+EPCs組),膿毒癥模型通過LPS靜脈給藥誘導(dǎo),EPC移植組大鼠經(jīng)尾靜脈注入熒光標(biāo)記EPCs懸液(EPCs2×106/0.5ml)。分別于移植后1、7天取肺、肝及腎組織,采用冰凍切片檢測組織中標(biāo)記熒光的EPCs表達(dá)；檢測各組織干/濕比值(W/D),采用HE染色評估病理改變；采用ELISA法檢測炎癥因子IL-6、IL-10;采用Real-time PCR法檢測肝、腎及肺組織TLR4的mRNA表達(dá)。結(jié)果：培養(yǎng)的細(xì)胞在胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天后能形成圓形、梭形的細(xì)胞表型,10-14d細(xì)胞可鋪滿整個瓶底,光鏡下可見鋪路石樣改變。采用流式細(xì)胞儀測到培養(yǎng)的細(xì)胞CD133、CD34的雙標(biāo)記陽性率為99.0%,激光掃描共聚焦顯微鏡雙熒光染色試驗顯示培養(yǎng)的細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)特異性抗原CD133、CD34。證明EPCs培養(yǎng)成功。應(yīng)用已標(biāo)記綠色熒光蛋白的EPCs移植膿毒癥大鼠后,熒光成像顯示1d后EPCs主要集中在胸腹部,并持續(xù)到第7d。冰凍組織切片熒光顯微鏡檢測肺、肝及腎組織血管附近熒光分別較強,d7的組織標(biāo)本熒光比dl均明顯增強。EPCs移植可顯著減輕膿毒癥大鼠肺、肝及腎組織炎癥細(xì)胞的浸潤、細(xì)胞損傷,降低組織的W/D比值；降低炎癥因子IL-6、 IL-10表達(dá),恢復(fù)促炎癥反應(yīng)及抑炎反應(yīng)平衡；同時下調(diào)肺、肝及腎組織TLR4mRNA的表達(dá)。結(jié)論：1、采用密度梯度離心法,經(jīng)體外培養(yǎng)、鑒定,成功分離出大鼠的骨髓EPCs;2、EPC靜脈移植后能成功到達(dá)損傷大鼠的肺、肝及腎組織。3.LPS誘導(dǎo)的膿毒癥大鼠模型中EPCs移植可顯著緩解肺、肝及腎組織損傷,修復(fù)了損傷的血管從而通過減少炎性細(xì)胞滲出和粘附,減輕了炎癥應(yīng)答；通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞,下調(diào)了促炎癥反應(yīng)的應(yīng)答,使機體恢復(fù)促炎—抗炎平衡。4.實驗結(jié)果表明EPC移植能改善LPS誘導(dǎo)的大鼠臟器損傷,為膿毒癥治療提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮祖細(xì)胞 干細(xì)胞移植 膿毒癥 大鼠
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-13
• 引言13-16
• 參考文獻14-16
• 1. 材料與方法16-23
• 1.1 材料16-18
• 1.2 方法18-23
• 2. 結(jié)果23-41
• 2.1 內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定23-26
• 2.2 內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療sepsis大鼠實驗26-41
• 3. 討論41-46
• 參考文獻46-52
• 結(jié)論52-53
• 文獻綜述：內(nèi)皮祖細(xì)胞移植在膿毒癥中作用研究53-60
• 參考文獻58-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文61

【共引文獻】

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本文編號：841030