發(fā)布時間：2017-09-06 12:33

  本文關(guān)鍵詞：嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CHR抑制炎癥所致血管內(nèi)皮細胞高通透性的作用和初步機制探討

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【摘要】：目的：觀察嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CGA47-66（Chromfungin，CHR）對炎癥介質(zhì)引起的血管內(nèi)皮細胞高通透性的影響，以及探討其初步機制。 方法：分別用CHR、膿毒性休克患者血清、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）作用人臍靜脈內(nèi)皮細胞株EA.hy926。 （1）采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法、Transwell小室法測定EA.hy926的活性〔吸光度（A）值〕和通透性（A值）。 （2）應(yīng)用免疫熒光法、PCR和Western-blot分別觀察細胞纖維肌動蛋白（F-actin）的形態(tài)和血管內(nèi)皮鈣粘蛋白VE-cadherin的表達及分布，檢測血管內(nèi)皮鈣粘蛋白VE-cadherin mRNA表達，以及ROCK、磷酸化p38MAPK和總p38MAPK等同滲透性相關(guān)蛋白的表達。 結(jié)果：（1）觀察CHR對EA.hy926的活性和通透性的影響。與空白對照組比較，1、10、100nmol/L CHR對EA.hy926細胞活性無明顯影響，而1000nmol/L CHR對EA.hy926細胞活性有顯著抑制作用（A值：1.049±0.256比1.306±0.162，t=-2.390, P=0.031）。與空白對照組比較，1、10、100nmol/L CHR組EA.hy926細胞的通透性明顯降低（A值：1.619±0.324、1.496±0.356、1.132±0.280比2.315±0.440，均P＜0.05）；膿毒性休克患者血清組和TNF-α組EA.hy926細胞通透性明顯升高（血清組A值：1.204±0.248比0.277±0.017，t=9.145, P=0.000；TNF-α組A值：2.485±0.113比1.602±0.679，t=2.868，P=0.043）；1、10、100nmol/LCHR可明顯降低膿毒性休克患者血清和TNF-α引起的EA.hy926細胞高通透性（血清組A值：0.299±0.065、0.224±0.028、0.131±0.015比1.204±0.248，均P＜0.05；TNF-α組A值：1.995±0.394、1.920±0.096、1.744±0.475比2.485±0.113，均P＜0.05），且在1～100nmol/L范圍內(nèi)，CHR的上述作用呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。 （2）檢測CHR對滲透性相關(guān)分子的影響。應(yīng)用PCR技術(shù)觀察TNF-α組中VE-cadherin mRNA的表達較空白對照組的顯著降低（1.15±0.03比1.59±0.16，P0.05），，而CHR（1nM、10nM、100nM）組中EA.hy926細胞的VE-cadherin mRNA的表達較空白對照組有顯著增加（1.51±0.04、1.62±0.17、1.92±0.36比1.16±0.19，P0.05）。CHR（1nM、10nM、100nM、1000nM）能夠緩解TNF-α引起的VE-cadherinmRNA的低表達（1.54±0.15、1.52±0.10、2.09±0.44、1.64±0.16比1.15±0.03，P0.05），上述作用在1～100nM范圍內(nèi)也呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。免疫熒光技術(shù)觀察到，與空白對照組比較，TNF-α組中F-actin細胞骨架發(fā)生明顯重組和再分布，應(yīng)力纖維形成增多，VE-cadherin的表達也明顯減少，而CHR可以抑制上述變化。Western-blot檢測到TNF-α組EA.hy926細胞的ROCK、磷酸化p38MAPK蛋白表達明顯高于空白對照組，TNF-α+CHR組與TNF-α組相比，TNF-α+CHR組中ROCK、磷酸化p38MAPK蛋白表達明顯降低；空白對照組和各實驗組相比，總p38MAPK蛋白表達無明顯差異。 結(jié)論：CGA衍生多肽CHR能改善炎癥介質(zhì)（膿毒性患者血清和TNF-α）引起的血管內(nèi)皮細胞高通透性，這一作用在一定劑量范圍內(nèi)呈劑量依賴性，并且可能與RhoA/ROCK、p38MAPK信號通路相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：嗜鉻粒蛋白A 多肽 CHR 人臍靜脈內(nèi)皮細胞系EA.hy926 內(nèi)皮細胞通透性 炎癥介質(zhì) 膿毒性休克 腫瘤壞死因子
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-8
• 摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-17
• 1 內(nèi)皮細胞通透性在膿毒癥發(fā)病機制中的核心作用14
• 2 炎癥因子導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞通透性改變的已知機制14-15
• 3 膿毒癥中內(nèi)皮細胞通透性改變的干預(yù)治療仍是一個嚴峻問題15-16
• 4 腎上腺髓質(zhì)激素CGA及其衍生多肽在膿毒癥中的重要作用16
• 5 科學(xué)假設(shè)與研究的路線框架16-17
• 材料和方法17-25
• 1 材料17-20
• 2 實驗方法20-25
• 2.1 細胞培養(yǎng)20
• 2.2 MTT比色法檢測細胞活性20
• 2.3 Transwell小室法檢測EA.hy926 細胞通透性20
• 2.4 PCR檢測血管內(nèi)皮鈣粘蛋白VE-cadherin mRNA的表達20-22
• 2.5 細胞免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡觀察EA.hy926 細胞的細胞纖維肌動蛋白（F-actin）和血管內(nèi)皮細胞鈣粘蛋白（VE-cadherin）的表達和分布22-23
• 2.6 Western-blot檢測EA.hy926 細胞ROCK、磷酸化p38MAPK和總p38MAPK蛋白的表達23-25
• 3 統(tǒng)計處理25
• 結(jié)果25-34
• 1 細胞形態(tài)25-26
• 2 CHR對EA.hy926 細胞活性的影響26-27
• 3 CHR對EA.hy926 細胞通透性的影響27-29
• 4 CHR對EA.hy926 細胞的VE-cadherin mRNA表達的影響29-31
• 5 CHR對EA.hy926 細胞的F-actin和VE-cadherin的表達及分布的影響31-33
• 6 CHR對EA.hy926 細胞的通透性相關(guān)蛋白表達的影響33-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-43
• 文獻綜述43-53
• 參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文及獲獎情況54-55
• 附件55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 唐雪;王瑞蘭;;手持式正交偏振光譜和側(cè)流暗視野成像技術(shù)在膿毒癥微循環(huán)監(jiān)測中的應(yīng)用進展[J];中國全科醫(yī)學(xué);2011年18期

本文編號：803156