發(fā)布時間：2017-09-05 11:00

  本文關(guān)鍵詞：蘆薈多糖通過VEGFR-2介導(dǎo)的Ras信號通路調(diào)控血管內(nèi)皮細胞增殖及促進創(chuàng)面愈合的作用機制

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【摘要】：目的:探討蘆薈多糖通過VEGFR-2介導(dǎo)Ras信號通路調(diào)控血管內(nèi)皮細胞增殖以及促進小鼠深Ⅱ度創(chuàng)面愈合的作用機制。方法:1體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)隨機分為兩組-蘆薈多糖組和對照組,蘆薈多糖組為HUVEC分別經(jīng)100,200和400mg/L濃度蘆薈多糖作用,未經(jīng)蘆薈多糖作用為對照組。MTT法檢測各組細胞增殖狀況,倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學改變;流式細胞技術(shù)檢測細胞周期;AO-EB染色法檢測蘆薈多糖對細胞毒副作用;LDH漏出率檢測蘆薈多糖對細胞損傷程度。2蘆薈多糖組和對照組HUVECs進行逐級信號阻斷:⑴加入SU5416半數(shù)抑制劑量(IC50)阻斷VEGFR-2;⑵加入U73122完全阻斷PLC-γ后,用FPP IC50阻斷Ras;⑶以不加抑制劑作為抑制劑對照組。MTT法檢測各組細胞增殖狀況,ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中VEGF和VEGFR-2水平,Western Blot法檢測細胞中VEGFR-2、Ras、Raf以及Ras和Raf磷酸化蛋白的表達。3 150只C57BL/6雄性小鼠隨機分為對照組(n=6)和實驗組(n=144),實驗組小鼠于背部制作直徑2cm深Ⅱ度燙傷模型,并隨機細分為四個處理組(每個處理組36只),創(chuàng)面分別用0.5%蘆薈多糖霜、SD-Ag霜、基質(zhì)霜和生理鹽水處理,觀察創(chuàng)面愈合情況,并于傷后1,3,7,10,14和21d取創(chuàng)面組織,應(yīng)用ELISA法檢測VEGF和VEGFR-2水平。結(jié)果:1 MTT檢測結(jié)果顯示蘆薈多糖作用后HUVEC增殖與對照組比較均較為活躍,并于第5天達峰值;倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)無明顯改變;蘆薈多糖作用后G0/G1期細胞所占百分率顯著下降,而G2/M期和S期細胞所占百分率顯著上升(P0.01);AO-EB染色結(jié)果未發(fā)現(xiàn)凋亡或死亡細胞;各組LDH漏出率也無明顯改變。2⑴與對照組比較,200和400mg/L蘆薈多糖組培養(yǎng)上清液中VEGF水平顯著上升(P0.05-0.01),細胞Ras磷酸化蛋白表達明顯增強(P0.05);100,200和400mg/L蘆薈多糖組VEGFR、Ras和Raf蛋白表達也明顯增強(P0.05-0.01)。⑵與不加抑制劑的蘆薈多糖組和對照組比較,加入IC50 SU5416作用48h后相對應(yīng)各組HUVEC增殖明顯下降,培養(yǎng)上清液中VEGF水平顯著上升(P0.05-0.01),細胞VEGFR-2、Ras和Ras磷酸化蛋白表達均顯著下降(P0.05-0.01);但與抑制劑對照組比較,200和400mg/L蘆薈多糖組細胞增殖明顯上升(P0.01);100,200和400mg/L蘆薈多糖組培養(yǎng)上清液中VEGF水平顯著上升(P0.05),而VEGFR-2水平只有200mg/L蘆薈多糖組差異具有顯著性意義(P0.05);100,200和400mg/L蘆薈多糖組細胞VEGFR-2蛋白表達明顯增強(P0.05-0.01),200和400mg/L蘆薈多糖組細胞Ras和Ras磷酸化蛋白表達明顯增強(P0.05)。⑶與不加抑制劑的蘆薈多糖組和對照組比較,加入IC50 FPP作用48h后相對應(yīng)各組細胞增殖明顯下降(P0.01),細胞Ras、Raf及其磷酸化蛋白表達均顯著下降(P0.05-0.01);但與抑制劑對照組比較,200和400mg/L蘆薈多糖組細胞增殖明顯上升(P0.01);100,200和400mg/L蘆薈多糖組細胞Ras、和Raf蛋白表達明顯增強(P0.01),它們磷酸化蛋白呈上升趨勢。3與SD-Ag組、基質(zhì)組和生理鹽水組比較,蘆薈多糖組傷后10、14和21d創(chuàng)面愈合明顯增快(P0.05)。蘆薈多糖組傷后1、3、7和21d創(chuàng)面組織中VEGF水平與生理鹽水組比較顯著增加(P0.05-0.01);而與SD-Ag組和基質(zhì)組比較,蘆薈多糖組傷后3、7和21d創(chuàng)面組織中VEGF水平也顯著性上升(P0.05-0.01)。蘆薈多糖組傷后7、10、14和21d創(chuàng)面組織中VEGFR-2水平與生理鹽水組比較顯著增加,而與SD-Ag組和基質(zhì)組比較,蘆薈多糖組傷后14和21d創(chuàng)面組織中VEGFR-2水平呈顯著性增加(P0.05-0.01)。結(jié)論:蘆薈多糖能促進血管內(nèi)皮細胞增殖,且無毒性,它促進血管內(nèi)皮細胞分泌VEGF,并增強由VEGFR-2介導(dǎo)Ras信號通路中VEGFR-2、Ras、Raf和Ras磷酸化蛋白表達,從而促進血管內(nèi)皮細胞增殖。動物實驗證實蘆薈多糖促進深Ⅱ度燙傷小鼠創(chuàng)面組織產(chǎn)生VEGF,并能增強創(chuàng)面組織中VEGFR-2表達,加速創(chuàng)面愈合。本研究結(jié)果表明蘆薈多糖在由VEGFR-2介導(dǎo)Ras信號通路調(diào)控血管內(nèi)皮細胞增殖的創(chuàng)面愈合過程中起重要作用。
【關(guān)鍵詞】：蘆薈多糖 VEGFR-2 信號通路 Ras 創(chuàng)面愈合
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 英文縮略詞表（4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 第一部分 蘆薈多糖對體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞增殖的影響材料與方法15-26
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-23
• 討論23-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 蘆薈多糖通過VEGFR-2 介導(dǎo)Ras信號通路調(diào)控人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞增殖的作用機制材料與方法26-40
• 材料與方法26-31
• 結(jié)果31-36
• 討論36-39
• 小結(jié)39-40
• 第三部分 蘆薈多糖對小鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面組織中VEGF與VEGFR-2 的影響及其作用機制材料與方法40-48
• 材料與方法40-42
• 結(jié)果42-46
• 討論46-47
• 小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-53
• 綜述53-62
• 參考文獻58-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：797562