本文關(guān)鍵詞：燒傷對成年大鼠認(rèn)知功能損害和海馬區(qū)S100β表達(dá)的研究

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【摘要】：目的： 譫妄是一種急性非特異性實(shí)質(zhì)腦器官的功能紊亂。大面積燒傷可導(dǎo)致譫妄的發(fā)生，燒傷合并譫妄患者死亡率增加、愈后質(zhì)量差。但燒傷所致譫妄的機(jī)制尚不清楚，并且對于譫妄的診斷尚無確切的生物學(xué)指標(biāo)。目前，臨床上僅能依據(jù)精神疾病量表、腦電圖粗略地判斷患者的譫妄狀態(tài)等。由于這些方法存在客觀性、準(zhǔn)確性等方面的缺陷，無法對譫妄的預(yù)防和發(fā)展進(jìn)行有效干預(yù)、對嚴(yán)重程度進(jìn)行客觀地評估。因此本論文通過對大面積燒傷成年大鼠認(rèn)知功能損害的觀測，探討海馬S100β蛋白與認(rèn)知障礙相關(guān)性，旨在為燒傷譫妄，提供客觀準(zhǔn)確、方便快捷的診斷依據(jù)，從而提高患者愈后質(zhì)量。 方法： 實(shí)驗動物均雄性健康成年Wistar大鼠，鼠齡90天，體重280-300g，由吉林大學(xué)動物實(shí)驗中心提供。室溫為20℃，晝夜周期12小時更替，給予充足食水。所有大鼠均在上述環(huán)境下飼養(yǎng)7天。 一、成年大鼠大面積Ⅲ度燒傷模型建立 Wistar大鼠將銅塊置于水浴鍋（95-100℃）1分鐘，并接觸鼠背皮膚持續(xù)30秒（如圖3.2）。HE染色檢測大鼠背部皮膚組織學(xué)改變，該燒傷深度累及全層皮膚，并且皮膚附屬器遭到破壞。（如圖3.3）即大鼠鼠背燒傷程度為Ⅲ度。 大鼠隨機(jī)分空白對照組（8只），燒傷組（分為燒傷后1d、3d、5d、7d、14d、21d每組各8只）。 燒傷組Wistar大鼠具體實(shí)施步驟：將銅塊置于水浴鍋（95-100℃）1分鐘，并接觸鼠背皮膚持續(xù)30秒。隨后，依據(jù)Parkland補(bǔ)液公式給予燙傷鼠乳酸林格氏液腹腔注射，進(jìn)行液體復(fù)蘇，并置于恒溫毯（38-40℃）中進(jìn)行保溫，大鼠恢復(fù)自主活動，，即造模完成。 空白對照組Wistar大鼠不施以熱力損傷。給予相同飼養(yǎng)和處置環(huán)境，以保證實(shí)驗條件的一致性。 二、空間學(xué)習(xí)、認(rèn)知能力—Morris水迷宮 該裝置為一個徑為150cm水深50cm的圓形黑色水槽（水溫20-22℃），一個黑色平臺置于直水平面下1.0cm，水槽四周設(shè)立不變標(biāo)志物，保證從實(shí)驗開始至結(jié)束水槽外周環(huán)境因素恒定不變，大鼠根據(jù)該標(biāo)志物確定找到平臺的游行路線。大鼠在燒傷前五天進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，每日一次。根據(jù)實(shí)驗規(guī)定，將水槽等分為四個象限，將大鼠置于與平臺所在象限的對立象限，大鼠面對水槽壁，然后放入該象限中，自由游泳120s，或大鼠找到平臺，該大鼠實(shí)驗終止，若120s內(nèi)大鼠未到達(dá)平臺，則引導(dǎo)其找到平臺，并且在平臺上駐足3s，以便于觀察周圍環(huán)境，上述實(shí)驗往復(fù)進(jìn)行。（如圖3.4） 第5日訓(xùn)練完畢后，將空白對照組及燒傷組（1d、3d、5d、7d、14d、21d各8只大鼠）重復(fù)水迷宮實(shí)驗，測定各組能否記憶平臺的位置。垂直水槽上方的攝像頭觀察和記錄大鼠游泳的速度、到達(dá)平臺所用的時間以及大鼠游行路線。 三、S100β蛋白ELISA實(shí)驗 1、S100β蛋白提取 ①稱重：大鼠海馬樣本天平稱重，按照100mg/1ml加入裂解液 ②勻漿：將組織樣本切碎，加入勻漿器，再加入1ml裂解液，反復(fù)抽提25-30次，于冰上進(jìn)行，勻漿完畢在冰上裂解30min。 ③離心：利用低溫離心機(jī)，1000g4℃離心10min。 ④振蕩：沉淀加入100-150ul含有PMSF裂解液，超聲震蕩3秒，3次 ⑤再離心：取上清再次離心12000r4℃10min后取上清，提取蛋白。 2、S100β蛋白ELISA測定 ①包被過程 ②封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔 ③加入待檢測樣品 ④加入酶標(biāo)抗體 ⑤加入底物液 ⑥終止反應(yīng) ⑦結(jié)果判斷 3、觀察 4、統(tǒng)計學(xué)方法： 結(jié)果： 一、Morris水迷宮路線圖 1、前5日成年大鼠Morris訓(xùn)練圖 第1日，大鼠Morris水迷宮路線圖，大鼠沿著水槽內(nèi)壁游行，在120s實(shí)驗期間并未成功踏上平臺（如圖3.5）。第3日，大鼠Morris水迷宮路線圖，大鼠沿著水槽內(nèi)壁和水槽內(nèi)部游行，在120s實(shí)驗期間內(nèi)成功踏上平臺（如圖3.6）。第4日，大鼠Morris水迷宮路線圖，大鼠很少沿著水槽內(nèi)壁游行，且路線較規(guī)整，在120s實(shí)驗期間并成功踏上平臺（如圖3.7）。第5日，大鼠Morris水迷宮路線圖，大鼠游行線路交之前規(guī)整，在120s實(shí)驗期間并成功踏上平臺（如圖3.8）。 2、空白對照組大鼠Morris訓(xùn)練圖 第1、3、5、7、14、21日，大鼠Morris水迷宮路線圖，大鼠幾乎徑直游行到平臺，成功踏上平臺（如圖3.9、如圖3.16） 3、燒傷實(shí)驗組大鼠Morris訓(xùn)練圖 第1、3、5、7、14、21日，大鼠Morris水迷宮路線圖，大鼠游行路線逐漸變?yōu)閺?fù)雜，游行方式由徑直轉(zhuǎn)向沿壁，由成功登上平臺到120s未完成實(shí)驗（如圖3.10-3.15） 二、空白對照組和實(shí)驗組大鼠游行速度、游行距離以及到達(dá)平臺時間 利用Morris水迷宮系統(tǒng)記錄和觀察，游行的距離（見表3.1）、達(dá)平臺的時間（見表3.2）和速度（見表3.3）。游行路程上看，當(dāng)燒傷干預(yù)之后大鼠游行的路程有著明顯的升高，隨后又有所回落（如圖3.18、3.20），游行時間來無論是最大值、最小值和平均值實(shí)驗組都要比對照組所花費(fèi)的時間要多（如圖3.19），從大鼠的游行速度角度來看，每組大鼠的游行速度是成上下波動的，沒有明顯的組間特征，燒傷干預(yù)并沒有明顯的效果，且組數(shù)據(jù)并沒有統(tǒng)計學(xué)意義（如圖3.21）。 三、燒傷對大鼠海馬區(qū)S100β表達(dá)的影響 本實(shí)驗探討成年大鼠在燒傷單因素后神經(jīng)系統(tǒng)S100β表達(dá)差異，本實(shí)驗利用ELISA技術(shù)檢測海馬區(qū)S100β蛋白表達(dá)情況。測定蛋白濃度后得知，大鼠燒傷后第1日-第21日，S100β蛋白濃度依次為1.008ng/ml、1.269ng/ml、2.220ng/ml、3.320ng/ml、4.650ng/ml、6.933ng/ml，大鼠燒傷后時間與S100β蛋白濃度成正相關(guān)性（如圖3.22）。 緣于燒傷對大鼠刺激程度較大，在實(shí)驗過程中出現(xiàn)部分大鼠死亡的個例，為保證實(shí)驗試驗樣本數(shù)量一致性，新增添實(shí)驗大鼠均按照總技術(shù)路線圖（如圖3.25），完成實(shí)驗一和實(shí)驗二相應(yīng)實(shí)驗，以保證實(shí)驗數(shù)據(jù)可靠性。 結(jié)論： 1.燒傷導(dǎo)致的譫妄是持續(xù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起的認(rèn)知功能障礙。 2.大面積燒傷引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害。 3. S100β可作為燒傷譫妄客觀的評估指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：大面積燒傷 譫妄機(jī)制 鈣結(jié)合蛋白S100β Morris水迷宮
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R644
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• Abstract9-14
• 中英文縮略詞14-15
• 第1章 緒論15-18
• 第2章 綜述18-31
• 2.1 前言18
• 2.2 譫妄的分類18-19
• 2.3 燒傷后譫妄的流行病學(xué)和風(fēng)險因素19-20
• 2.4 燒傷譫妄的機(jī)制20-24
• 2.4.1 膽堿能系統(tǒng)缺陷機(jī)制20-21
• 2.4.2 應(yīng)激機(jī)制21-23
• 2.4.3 炎性反應(yīng)23-24
• 2.5 燒傷譫妄診斷24-28
• 2.5.1 量表評估24-26
• 2.5.2 生物標(biāo)志物診斷26-28
• 2.5.3 腦電圖診斷譫妄28
• 2.6 燒傷譫妄的治療28-30
• 2.6.1 非藥理學(xué)方法對譫妄的防治28-29
• 2.6.2 藥理學(xué)方法對譫妄的治療29-30
• 2.6.3 譫妄不同亞型的治療30
• 2.7 存在問題與展望30-31
• 第3章 實(shí)驗研究31-44
• 3.1 實(shí)驗一：大面積燒傷對成年鼠認(rèn)知功能的影響31-40
• 3.1.1 材料與方法31-34
• 3.1.2 實(shí)驗結(jié)果34-40
• 3.1.3 結(jié)論40
• 3.2 實(shí)驗二：大面積燒傷對大鼠海馬區(qū) S100β表達(dá)影響40-44
• 3.2.1 材料與方法40-43
• 3.2.2 實(shí)驗結(jié)果43
• 3.2.3 結(jié)論43-44
• 第4章 討論44-50
• 第5章 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 致謝59-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的科研成果60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馮世杰，花蘭女，金曙雯，嚴(yán)忠馥，趙雁飛，朱清如;大鼠燙傷模型的制作[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1995年03期

2 藍(lán)海珍;于布為;;術(shù)后譫妄的研究進(jìn)展[J];上海醫(yī)學(xué);2013年02期

本文編號：789529