本文關(guān)鍵詞：miR-132在膿毒癥肺損傷小鼠中的保護(hù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:觀察膿毒癥肺損傷小鼠肺組織中mi R-132的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化以及肺內(nèi)上調(diào)mi R-132的表達(dá)后對(duì)膽堿酯酶及炎癥反應(yīng)的影響,探討mi R-132對(duì)膿毒癥肺損傷小鼠的肺保護(hù)作用及機(jī)制。方法:1.選擇雄性健康SPF級(jí)BABL/c小鼠;采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)構(gòu)建小鼠膿毒癥肺損傷模型,模型構(gòu)建成功后,病理切片檢測(cè)肺損傷程度;ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子的表達(dá)變化;計(jì)算肺濕干重比值;用RT-q PCR檢測(cè)肺組織中mi R-132的表達(dá)變化;用Western blot檢測(cè)肺組織Ach E蛋白含量變化;T-CHE試劑盒檢測(cè)BALF中Ach E活性。2.選擇氣管內(nèi)滴入in vivo-jet PEITM介導(dǎo)的mi R-132,轉(zhuǎn)染成功后采用CLP構(gòu)建膿毒癥肺損傷模型,造模24小時(shí)后處死小鼠。留取左肺行肺泡灌洗,用ELISA檢測(cè)BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子的表達(dá)變化;留取右肺,病理切片觀察肺損傷程度,稱量、烘干,計(jì)算濕干重比值,用RT-q PCR檢測(cè)肺組織中mi R-132的表達(dá)變化,用Western blot檢測(cè)肺組織Ach E蛋白含量變化,T-CHE試劑盒檢測(cè)BALF中Ach E活性。結(jié)果:1.CLP能夠成功構(gòu)建膿毒癥肺損傷模型,病理結(jié)果顯示造模6 h小鼠開(kāi)始出現(xiàn)肺損傷,損傷程度隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸加重,24 h小鼠肺損傷最嚴(yán)重;肺濕干重比值在CLP術(shù)后6 h開(kāi)始增加,肺水腫逐漸加重,24 h肺水腫最嚴(yán)重,隨后肺水腫逐漸減輕;BALF中炎癥因子表達(dá)量在CLP術(shù)后逐漸增加,TNF-α表達(dá)于12 h、24 h達(dá)高峰,IL-1β、IL-6于24 h達(dá)高峰,48 h后均開(kāi)始逐漸下降。2.膿毒癥會(huì)誘導(dǎo)肺組織mi R-132表達(dá)上調(diào),CLP術(shù)后6 h開(kāi)始,mi R-132的表達(dá)量逐漸升高,12 h、24 h達(dá)高峰(13.27±1.21倍、14.31±1.24倍),48 h開(kāi)始下降。3.經(jīng)氣道內(nèi)滴入in vivo-jet PEITM介導(dǎo)的mi R-132能夠成功上調(diào)肺內(nèi)的mi R-132的表達(dá),轉(zhuǎn)染后24 h表達(dá)達(dá)高峰;病理結(jié)果示轉(zhuǎn)染組膿毒癥小鼠肺損傷程度較假轉(zhuǎn)染組減輕;肺組織水腫減輕;BALF中炎癥因子表達(dá)下降,上調(diào)肺內(nèi)mi R-132能夠降低膿毒癥肺損傷小鼠的肺部炎癥反應(yīng)。4.膿毒癥肺損傷模型構(gòu)建成功后發(fā)現(xiàn)肺組織中Ach E表達(dá)隨CLP術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增加,BALF中Ach E活性亦增加;上調(diào)肺內(nèi)mi R-132后肺組織中Ach E蛋白表達(dá)及BALF中Ach E活性受抑制,提示mi R-132可能通過(guò)抑制Ach E蛋白表達(dá),減少對(duì)抗炎物質(zhì)Ach的水解,增強(qiáng)膽堿能抗炎活性。結(jié)論:肺內(nèi)上調(diào)mi R-132能夠減輕膿毒癥小鼠肺損傷程度,減輕肺部炎癥反應(yīng),具有肺保護(hù)作用,作用機(jī)制可能與mi R-132靶向Ach E,抑制Ach E對(duì)Ach的水解作用,從而增強(qiáng)膽堿能抗炎通路的抗炎活性有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA-132 膿毒癥 轉(zhuǎn)染 膽堿能抗炎通路
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 主要英文縮略詞表11-12
• 第1章 引言12-15
• 第2章 材料與方法15-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 2.1.1 小鼠15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備16-17
• 2.2 器材準(zhǔn)備及試劑配制17-18
• 2.2.1 去RNA酶處理17
• 2.2.2 Western Blot相關(guān)試劑配制17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 2.3.1 小鼠膿毒癥肺損傷模型構(gòu)建18-19
• 2.3.2 氣道內(nèi)滴入法上調(diào)肺內(nèi)mi R-132的表達(dá)19-20
• 2.4 檢測(cè)指標(biāo)20-28
• 2.4.1 肺組織濕干重比值測(cè)定20-21
• 2.4.2 肺組織常規(guī)HE染色病理檢測(cè)21
• 2.4.3 RT-q PCR檢測(cè)肺組織中mi R-132表達(dá)變化21-25
• 2.4.4 ELISA檢測(cè)BALF中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6 表達(dá)變化25
• 2.4.5 Western blot檢測(cè)肺組織中Ach E蛋白表達(dá)變化25-27
• 2.4.6 T-CHE測(cè)試盒檢測(cè)BALF中Ach E的活性27-28
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-29
• 第3章 結(jié)果29-38
• 3.1 膿毒癥肺損傷小鼠模型構(gòu)建29-31
• 3.1.1 術(shù)后一般表現(xiàn)29
• 3.1.2 病理結(jié)果29
• 3.1.3 肺組織濕干比29-30
• 3.1.4 膿毒癥肺損傷小鼠BALF中炎癥因子的變化30-31
• 3.2 MIR-132在膿毒癥肺損傷小鼠肺組織中的動(dòng)態(tài)變化31-32
• 3.3 肺內(nèi)上調(diào)MIR-132后，膿毒癥肺損傷小鼠肺內(nèi)炎癥的變化32-35
• 3.3.1 選擇最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間點(diǎn)32-33
• 3.3.2 肺內(nèi)上調(diào)mi R-132后各組肺組織病理變化33
• 3.3.3 肺內(nèi)上調(diào)mi R-132后各組肺濕干重比值變化33
• 3.3.4 肺內(nèi)上調(diào)miR-132后各組BALF中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6 的變化33-35
• 3.4 MIR-132對(duì)膿毒癥肺損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究35-38
• 3.4.1 膿毒癥肺損傷小鼠肺組織內(nèi)Ach E蛋白表達(dá)及BALF中Ach E活性變化35-36
• 3.4.2 肺內(nèi)上調(diào)mi R-132后肺組織中Ach E蛋白表達(dá)及BALF中Ach E的活性變化36-38
• 第4章 討論38-42
• 4.1 CLP術(shù)構(gòu)建小鼠膿毒癥肺損傷模型38
• 4.2 MIR-132對(duì)膿毒癥肺損傷小鼠的肺保護(hù)作用38-40
• 4.3 MIR-132對(duì)膿毒癥肺損傷小鼠的肺保護(hù)作用機(jī)制40-42
• 第5章 結(jié)論與展望42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 進(jìn)一步工作的方向42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 綜述49-55
• 參考文獻(xiàn)53-55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉芬;江榕;李勇;曾振國(guó);趙寧;夏亮;聶成;錢克儉;;微小RNA-132在脂多糖誘導(dǎo)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的表達(dá)變化[J];中華危重病急救醫(yī)學(xué);2014年02期

2 高戈;馮U，

本文編號(hào)：781484