本文關(guān)鍵詞：HMGB1在嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇大鼠腸道ICAM-1表達(dá)中的作用及機(jī)制

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【摘要】：一、研究背景:嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后,腸道組織的缺血缺氧:進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞功能的紊亂、損傷及最終死亡。而長(zhǎng)時(shí)間低動(dòng)力循環(huán),使循環(huán)淤滯和微血栓的形成從而誘發(fā)患者血小板的聚集和活化,在缺血部位聚集、趨化和浸潤(rùn)也是由預(yù)激白細(xì)胞導(dǎo)致的,進(jìn)而造成毛細(xì)血管通透性增高,從而引發(fā)腸道組織間質(zhì)水腫。進(jìn)而損傷腸道粘膜,破壞腸道屏障,致使細(xì)菌和毒素容易移位,進(jìn)而導(dǎo)致全身感染即全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)乃至多器官功能障礙綜合癥(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。所以腸損傷是導(dǎo)致燒傷患者死亡的一個(gè)重要因素。細(xì)胞間粘附分子1(intracellular adhesion molecule-1,ICAM-1)又名CD54,免疫球蛋白超家族中的成員,介導(dǎo)黏附反應(yīng)重要的黏附分子,是單鏈跨膜糖蛋白,其結(jié)構(gòu)由胞外區(qū)、疏水的跨膜區(qū)及較短的胞質(zhì)區(qū)組成,是一種重要炎癥介質(zhì)。CAM-1在細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)游走、維持,炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié),血栓形成、和對(duì)腫瘤的治療中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。ICAM-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)最強(qiáng)、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞也有表達(dá)。在腸組織毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中,ICAM-1表達(dá)可破壞內(nèi)皮細(xì)胞的完整性,導(dǎo)致血管通透性增加及腸水腫的形成。粘附分子上ICAM-1通過介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或與基質(zhì)相互作用,發(fā)揮免疫監(jiān)視作用,促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生,在嚴(yán)重?zé)齻缙谂K器損害發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。高遷移率族蛋白B1(high mobility group box 1protein,HMGB1)是35年前發(fā)現(xiàn)的一種與DNA結(jié)合的蛋白,普遍存在于多種動(dòng)物細(xì)胞內(nèi),如胸腺,淋巴細(xì)胞等。HMGB1作為核蛋白的功能,參與了細(xì)胞核小體的從組,修復(fù)及增值等。HMGB1是一種內(nèi)源性免疫佐劑也是晚期嚴(yán)重介質(zhì),各種炎癥性疾病的發(fā)展起到重要作用,如燒傷,急重癥胰腺炎,腫瘤等。但是關(guān)于HMGB1在嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇大鼠腸道ICAM-1的表達(dá)中作用及初步機(jī)制尚不清楚。本課題采用大鼠30%TBSAⅢ度燒傷延遲復(fù)蘇動(dòng)物模型,觀察嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇所致急性腸損傷時(shí)腸組織中HMGB1的動(dòng)態(tài)變化,并檢測(cè)腸組織細(xì)胞間粘附分子(I CAM-1)表達(dá)及p38MAPK活性等的變化,探討嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后腸損傷的發(fā)生機(jī)制與HMGB1的關(guān)系。以了解HMGB1在嚴(yán)重?zé)齻笫竽c道ICAM-1的表達(dá)中的作用及機(jī)制,為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)燒傷導(dǎo)致的腸損傷的發(fā)生提供新的思路及方法。二、研究目的:探討HMGB1在嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇大鼠腸道ICAM-1表達(dá)中的初步機(jī)制。三、實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)驗(yàn)的Sprague Dawley雌性大鼠56只,由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,體重在200~250g之間,將購買的大鼠在常溫下飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為N組(Normal,正常對(duì)照組,8只)、B組(Burn,燒傷延遲復(fù)蘇24只)和S組(Sodium butyrate,燒傷延遲復(fù)蘇+正丁酸鈉,24只)。開始實(shí)驗(yàn)后,給大鼠腹腔內(nèi)注射由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心配制的3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉,去除大鼠背部毛發(fā),用恒溫儀將水設(shè)置到98°C,將B組和S組大鼠背部靜置98°C熱水中12s后快速擦干,以免燙傷進(jìn)一步加重。結(jié)果造成大鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷(后經(jīng)病理證實(shí))。B組大鼠分別在傷后6h、12h、36h三個(gè)時(shí)間段,用乳酸林格氏液2ml·/(kg.TBSA),腹腔注射進(jìn)行燒傷后液體的復(fù)蘇。S組使用正丁酸鈉的劑量為400mg/kg,首先根據(jù)每只大鼠的重量,計(jì)算出每只大鼠應(yīng)該使用的正丁酸鈉劑量,然后將正丁酸鈉用乳酸林格氏液稀釋成1:150,腹腔注射進(jìn)行液體復(fù)蘇,并以同樣的時(shí)間點(diǎn)和方式給大鼠含等量正丁酸鈉的乳酸林格氏液,進(jìn)行休克的復(fù)蘇。所有燒傷后大鼠分別12h、24h和48h經(jīng)心臟取血后處死,后將大鼠放在固定板上,取出大鼠腸組織,用Western blot及免疫組化的方法檢測(cè)腸組織中HMGB1,ICAM-1的表達(dá)變化規(guī)律及轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)p38MAPK的活化情況。N組大鼠,進(jìn)行相同的麻醉,用室溫水浴模擬燙傷過程不進(jìn)行液體復(fù)蘇,但行相同的指標(biāo)檢測(cè)。四:研究結(jié)果:1.燒傷延遲復(fù)蘇組大鼠隨病程的進(jìn)展,腸組織中HMGB1的表達(dá)逐漸增高,在傷后12h,24h和48h均顯著高于正常對(duì)照組。而燒傷延遲復(fù)蘇+正丁酸鈉組在燙傷后每個(gè)時(shí)間相表達(dá)均明顯低于同時(shí)間點(diǎn)的燒傷延遲復(fù)蘇組。2.正常對(duì)照組腸組織上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面均有少量染色呈棕黃色,表示ICAM-1的表達(dá)呈輕度弱陽性。而燒傷延遲復(fù)蘇組血管內(nèi)皮細(xì)胞和部分腸組織上皮細(xì)胞表面有明顯的棕黃色顆粒,說明ICAM-1呈強(qiáng)陽性。燒傷延遲復(fù)蘇+正丁酸鈉組血管內(nèi)皮細(xì)胞及腸組織上皮細(xì)胞表面可見少量的棕黃色顆粒,但較燒傷延遲復(fù)蘇組明顯減少。3.用Western blot方法檢測(cè)腸道p38MAPK的活性,p38 MAPK的活性以p-p38/p38的灰度值比表示,并將正常對(duì)照組腸p38MAPK的活性設(shè)為1,燒傷延遲復(fù)蘇組24h,p38MAPK的活性明顯升高,為2.17,經(jīng)HMGB1抑制劑正丁酸鈉處理后,燒傷延遲復(fù)蘇+正丁酸鈉治療組24h大鼠腸道p38MAPK活性較燒傷延遲復(fù)蘇組24h明顯降低,為1.03。4.免疫組化的方法檢測(cè)腸組織p38MAPK的表達(dá),在正常對(duì)照組大鼠的腸組織有散在的陽性蛋白顆粒,而嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇組傷后24h的腸組織的上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞有大量的p38MAPK陽性蛋白顆粒,在燒傷延遲復(fù)蘇+正丁酸鈉24h組,免疫組化法檢測(cè)腸組織上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞陽性蛋白顆粒明顯減少。五、研究結(jié)論:大鼠30%TBSAⅢ°燒傷延遲腸損傷發(fā)生時(shí),腸道p38MAPK活性顯著升高,腸組織粘附分子ICAM-1表達(dá)明顯增強(qiáng),使用HMGB1抑制劑正丁酸鈉進(jìn)行干預(yù)后上述改變顯著減輕,此結(jié)果表明:HMGB1通過活化p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,參與了腸組織粘附分子ICAM-1的產(chǎn)生,由此參與了嚴(yán)重?zé)齻舆t復(fù)蘇后急性腸損傷的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族蛋白B1 燒傷 急性腸損傷 細(xì)胞因子 p38MAPK信號(hào)通路 細(xì)胞間粘附分子ICAM-1
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R644
【目錄】：

• 縮寫對(duì)照表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-20
• 參考文獻(xiàn)17-20
• 材料與方法20-27
• 結(jié)果27-28
• 討論28-33
• 全文小結(jié)33-34
• 附圖34-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 附錄 個(gè)人簡(jiǎn)歷41-42
• 致謝42-43
• 綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)50-52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 魏敏,劉開軍,劉杰,魯華玉,王德文,張燕;嚴(yán)重?zé)齻笤缙诖笫蟾闻K細(xì)胞粘附分子1和白介素6的表達(dá)[J];西南國防醫(yī)藥;2003年05期

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本文編號(hào)：755998