本文關(guān)鍵詞：抗氧化劑在減輕ARDS肺纖維化中的作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的:本課題首先通過臨床觀察膿毒癥ARDS(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)患者呼吸末氫的變化,提示我們氫可能在ARDS肺損傷及修復(fù)中起一定作用;然后我們通過構(gòu)建內(nèi)毒素(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的小鼠ARDS肺纖維化模型,重點(diǎn)觀察補(bǔ)充外源性氫對(duì)LPS誘導(dǎo)肺纖維化是否具有保護(hù)作用,并對(duì)氫的作用機(jī)制進(jìn)行研究;與此同時(shí),我們還觀察了天然的抗氧化劑白藜蘆醇(Resveratrol,RSV)在LPS誘導(dǎo)肺纖維化中的作用,并探討相關(guān)機(jī)制。內(nèi)容和方法:第一部分:通過收集臨床中膿毒癥ARDS患者及健康志愿者呼吸氣體,用氣相色譜分析法對(duì)其中氫的含量進(jìn)行檢測。第二部分:ICR小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組,模型組,富氫生理鹽水組。模型組小鼠予以單次氣管內(nèi)滴注LPS(5mg/kg)構(gòu)建小鼠肺纖維化模型,觀察7d,14d,21d,28d時(shí)肺組織的病理演變過程。采用Masson染色觀察肺組織病理膠原分布情況;堿性水解法與ELISA法檢測肺組織中羥脯氨酸及I型膠原含量評(píng)估肺臟纖維化的程度;免疫組化染色、Western Blot方法檢測肺組織中E-cadherin和a-SMA的表達(dá)變化觀察上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的進(jìn)展;ELISA法檢測TGF-β1含量,Western Blot方法檢測p-Smad2/Smad3、Smad4蛋白水平表達(dá)的改變反映TGF-β1下游信號(hào)通路的變化;檢測MDA含量,T-AOC、SOD、CAT活性反映肺組織的氧化應(yīng)激水平。富氫生理鹽水組分為3個(gè)亞組,在氣管滴注LPS后即刻分別腹腔注射富氫生理鹽水(2.5、5、10 ml/kg),每天給予等量的氫水,持續(xù)28天。對(duì)照組:氣管內(nèi)滴注與模型組等量的生理鹽水,同時(shí)腹腔注射等量的生理鹽水,每天1次,觀察28天,于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)行上述相關(guān)檢測。第三部分:ICR小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組,模型組,白藜蘆醇組,白藜蘆醇組在氣管內(nèi)滴注LPS后即刻腹腔注射RSV(0.3mg/kg),每天給予等量的RSV,持續(xù)28天。對(duì)照組及模型組處理同第二部分,腹腔注射等量的RSV溶劑,每天一次,持續(xù)28天,然后進(jìn)行相關(guān)檢測(同第二部分)。主要結(jié)果:第一部分:ARDS患者與健康人相比,呼吸氫含量明顯減少。第二部分:LPS處理21至28天后,可造成肺組織中膠原分布增加,羥脯氨酸及I型膠原含量增多;LPS可誘導(dǎo)EMT的進(jìn)程;在LPS作用21至28天后,LPS刺激TGF-β1生成明顯增多,激活其下游的Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,并可誘導(dǎo)快速的氧化應(yīng)激的發(fā)生,表現(xiàn)為7天時(shí)MDA明顯增多,T-AOC,CAT,SOD活性明顯下降,并可持續(xù)4周。相反,富氫生理鹽水可減輕LPS誘導(dǎo)的EMT及肺纖維化程度,抑制LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激及TGF-β1生成。第三部分:白藜蘆醇也可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的EMT,減輕肺組織纖維化的程度。同時(shí),白藜蘆醇可抑制LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激,TGF-β1生成及Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。結(jié)論:臨床上ARDS患者呼吸氫含量減少,提示我們氫可能在ARDS肺損傷及修復(fù)中起一定作用;而補(bǔ)充外源性富氫生理鹽水可減輕LPS誘導(dǎo)的肺纖維化及EMT,其機(jī)制可能與氫抑制氧化應(yīng)激及TGF-β1生成有關(guān);天然自由基清除劑白藜蘆醇也可減輕LPS誘導(dǎo)的EMT及肺纖維化,其機(jī)制可能與其對(duì)氧化應(yīng)激狀態(tài)的調(diào)節(jié)及對(duì)TGF-β1/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控有關(guān)�？寡趸瘎┑氖褂没蚩勺鳛闇p輕ARDS相關(guān)肺纖維化的一種有效的輔助治療手段。
【關(guān)鍵詞】：抗氧化劑 肺纖維化 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 氧化應(yīng)激 TGF-β1
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7;R563.8
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 符號(hào)說明11-13
• 緒論13-16
• 第一部分 膿毒癥ARDS患者呼吸氫含量變化16-24
• 對(duì)象與方法17-19
• 研究結(jié)果19-20
• 討論20-24
• 第二部分 富氫生理鹽水減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺纖維化及其機(jī)制研究24-52
• 材料與方法24-27
• 實(shí)驗(yàn)方法27-35
• 研究結(jié)果35-46
• 1、氣管內(nèi)滴注LPS可誘導(dǎo)小鼠肺纖維化35-37
• 2、LPS可誘導(dǎo)肺組織發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）37-38
• 3、LPS激活TGF-β1 信號(hào)通路38-39
• 4、LPS上調(diào)肺組織內(nèi)氧化應(yīng)激水平39-41
• 5、富氫水可減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺纖維化及EMT41-44
• 6、富氫水抑制肺組織中LPS誘導(dǎo)的TGF-β1 生成44-45
• 7、富氫水抑制肺組織中LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激水平45-46
• 討論46-52
• 第三部分 白藜蘆醇減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺纖維化及其機(jī)制研究52-60
• 材料與試劑52
• 實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 研究結(jié)果53-58
• 1、RSV減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺纖維化及EMT53-55
• 2、RSV抑制肺組織中LPS誘導(dǎo)的TGF-β1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活55-56
• 3、RSV抑制肺組織中LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激水平56-58
• 討論58-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-72
• 綜述 急性呼吸窘迫綜合征肺纖維化的研究進(jìn)展72-85
• 參考文獻(xiàn)77-85
• 致謝85-87
• 學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄87

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8 楊s，

本文編號(hào)：755038