本文關鍵詞：骨髓內皮祖細胞治療大鼠急性腦缺血的實驗研究

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【摘要】：腦卒中是神經系統最常見的疾病，嚴重地危害人類的健康。腦卒中血管受損時，EPCs能夠選擇性遷移并聚集在受損或缺血組織區(qū)形成血管。EPCs在心腦及肝腎等多種缺血性疾病中的研究日益增多，已成為研究熱點。 目的：本研究旨在將大鼠骨髓內皮祖細胞注入大鼠急性腦缺血再灌注模型，探討EPCs在急性腦缺血疾病治療中的作用。 方法：采用密度梯度離心聯合貼壁篩選法從Wistar大鼠骨髓分離獲得單個核細胞（MNC），進行誘導培養(yǎng)，觀察、記錄細胞的生物學特征；選取EPCs特異性表面標志CD34、KDR對原代細胞進行免疫熒光檢測。 使用線栓法制備Wistar大鼠左側大腦中動脈缺血再灌注模型。取體重250-300g健康成年雄性Wistar大鼠60只，，隨機分3組：假手術組12只（A組），PBS治療組20只（B組），EPCs治療組28只（C組）（移植EPCs后1d、3d、7d、14d取材，共4個檢測時間點）。 （1）大鼠術后行神經行為學評分，1～3分者入選后續(xù)實驗。 （2）TTC染色觀察腦梗死范圍。 （3）HE染色觀察腦組織病理學變化。 （4）免疫組化法測定大鼠各個時間點VEGF、FGF-2的表達。顯微鏡下觀察、記錄陽性表達情況。運用SPSS17.0軟件行統計學分析。 結果： (1)成功從大鼠骨髓分離并培養(yǎng)了內皮祖細胞 (2)貼壁細胞表面CD34、KDR免疫熒光表達陽性 (3)成功制備了大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型。 (4)神經行為學評分：C組評分明顯低于B組，治療7天后評分差異更明顯。 (5)TTC染色腦梗死體積：C組梗死體積明顯小于B組，有統計學差異（P0.05）。 (6)VEGF、FGF-2的表達：C組VEGF和FGF-2表達明顯增高，與其他兩組相比均有統計學差異（P0.01） 結論： （1）可以從大鼠骨髓分離獲得EPCs，成功在體外培養(yǎng)并進行鑒定，為缺血性腦血管病治療提供基礎。 （2）EPCs在急性缺血性腦卒中治療中有較好的療效，能促進新生血管形成，挽救缺血半暗帶，減小梗死體積，明顯改善神經損傷，促進神經功能恢復。
【關鍵詞】：內皮祖細胞 腦缺血 血管內皮生長因子 成纖維細胞生長因子-2
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文單詞縮寫表12-13
• 第1章 緒論13-14
• 第2章 文獻綜述14-20
• 2.1 EPCS 的生物學特性14-15
• 2.1.1 EPCs 的來源及表面標志14
• 2.1.2 EPCs 的動員、歸巢和誘導分化14-15
• 2.1.3 EPCs 的功能15
• 2.2 EPCS 在缺血性腦血管病中的作用15-17
• 2.2.1 EPCs 促進血管生長及內皮修復16-17
• 2.2.2 EPCs 促進神經生長17
• 2.3 EPCS 治療缺血性腦血管病現狀17-19
• 2.3.1 EPCs 移植治療腦缺血17-18
• 2.3.2 EPCs 聯合基因治療18
• 2.3.3 EPCs 在支架中的應用18-19
• 2.4 結論與展望19-20
• 第3章 材料與方法20-30
• 3.1 實驗材料20-23
• 3.1.1 主要儀器和設備20-21
• 3.1.2 主要試劑21
• 3.1.3 溶液配制及使用方法21-22
• 3.1.4 動物來源22-23
• 3.2 大鼠骨髓 EPCS 的分離、培養(yǎng)和鑒定23-24
• 3.2.1 大鼠骨髓單個核細胞的分離23
• 3.2.2 免疫熒光細胞化學23-24
• 3.3 動物模型的制備24-25
• 3.3.1 線栓來源24
• 3.3.2 大腦中動脈局灶性腦缺血模型的制備24-25
• 3.4 腦梗死模型的判定25-27
• 3.4.1 行為學判定25
• 3.4.2 TTC 染色判定25
• 3.4.3 大鼠局灶性腦缺血周邊區(qū)立體定位移植25-26
• 3.4.4 移植術后大鼠行為學評分26-27
• 3.5 標本的制作和免疫組織化學染色方法27-28
• 3.5.1 大鼠的心臟灌流27-28
• 3.5.2 腦組織切片 HE 染色28
• 3.5.3 腦組織切片免疫組織化學染色（S-P 法）28
• 3.6 數據采集28-29
• 3.7 統計學分析29-30
• 第4章 結果30-41
• 4.1 骨髓 EPCS 的生長特性30-31
• 4.2 免疫熒光細胞化學31
• 4.3 各組大鼠神經行為學評分31-32
• 4.4 TTC 染色比較腦梗死體積32-33
• 4.5 病理學實驗結果33-41
• 4.5.1 HE 染色33-35
• 4.5.2 腦組織 VEGF 免疫組織化學染色35-38
• 4.5.3 腦組織 FGF-2 免疫組織化學染色38-41
• 第5章 討論41-45
• 5.1 EPCS 的生物學特性及其應用41-42
• 5.2 不同來源的 EPCS42
• 5.3 移植時間窗和劑量的選擇42-43
• 5.4 腦缺血后 VEGF 和 FGF-2 的表達43-45
• 第6章 結論45-46
• 參考文獻46-50
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果50-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前6條

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本文編號：740201