發(fā)布時間：2017-08-26 06:25

  本文關(guān)鍵詞：骨髓內(nèi)皮祖細胞治療大鼠急性腦缺血的實驗研究

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【摘要】：腦卒中是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的疾病，嚴重地危害人類的健康。腦卒中血管受損時，EPCs能夠選擇性遷移并聚集在受損或缺血組織區(qū)形成血管。EPCs在心腦及肝腎等多種缺血性疾病中的研究日益增多，已成為研究熱點。 目的：本研究旨在將大鼠骨髓內(nèi)皮祖細胞注入大鼠急性腦缺血再灌注模型，探討EPCs在急性腦缺血疾病治療中的作用。 方法：采用密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法從Wistar大鼠骨髓分離獲得單個核細胞（MNC），進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察、記錄細胞的生物學(xué)特征；選取EPCs特異性表面標志CD34、KDR對原代細胞進行免疫熒光檢測。 使用線栓法制備Wistar大鼠左側(cè)大腦中動脈缺血再灌注模型。取體重250-300g健康成年雄性Wistar大鼠60只，，隨機分3組：假手術(shù)組12只（A組），PBS治療組20只（B組），EPCs治療組28只（C組）（移植EPCs后1d、3d、7d、14d取材，共4個檢測時間點）。 （1）大鼠術(shù)后行神經(jīng)行為學(xué)評分，1～3分者入選后續(xù)實驗。 （2）TTC染色觀察腦梗死范圍。 （3）HE染色觀察腦組織病理學(xué)變化。 （4）免疫組化法測定大鼠各個時間點VEGF、FGF-2的表達。顯微鏡下觀察、記錄陽性表達情況。運用SPSS17.0軟件行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： (1)成功從大鼠骨髓分離并培養(yǎng)了內(nèi)皮祖細胞 (2)貼壁細胞表面CD34、KDR免疫熒光表達陽性 (3)成功制備了大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型。 (4)神經(jīng)行為學(xué)評分：C組評分明顯低于B組，治療7天后評分差異更明顯。 (5)TTC染色腦梗死體積：C組梗死體積明顯小于B組，有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 (6)VEGF、FGF-2的表達：C組VEGF和FGF-2表達明顯增高，與其他兩組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.01） 結(jié)論： （1）可以從大鼠骨髓分離獲得EPCs，成功在體外培養(yǎng)并進行鑒定，為缺血性腦血管病治療提供基礎(chǔ)。 （2）EPCs在急性缺血性腦卒中治療中有較好的療效，能促進新生血管形成，挽救缺血半暗帶，減小梗死體積，明顯改善神經(jīng)損傷，促進神經(jīng)功能恢復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮祖細胞 腦缺血 血管內(nèi)皮生長因子 成纖維細胞生長因子-2
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文單詞縮寫表12-13
• 第1章 緒論13-14
• 第2章 文獻綜述14-20
• 2.1 EPCS 的生物學(xué)特性14-15
• 2.1.1 EPCs 的來源及表面標志14
• 2.1.2 EPCs 的動員、歸巢和誘導(dǎo)分化14-15
• 2.1.3 EPCs 的功能15
• 2.2 EPCS 在缺血性腦血管病中的作用15-17
• 2.2.1 EPCs 促進血管生長及內(nèi)皮修復(fù)16-17
• 2.2.2 EPCs 促進神經(jīng)生長17
• 2.3 EPCS 治療缺血性腦血管病現(xiàn)狀17-19
• 2.3.1 EPCs 移植治療腦缺血17-18
• 2.3.2 EPCs 聯(lián)合基因治療18
• 2.3.3 EPCs 在支架中的應(yīng)用18-19
• 2.4 結(jié)論與展望19-20
• 第3章 材料與方法20-30
• 3.1 實驗材料20-23
• 3.1.1 主要儀器和設(shè)備20-21
• 3.1.2 主要試劑21
• 3.1.3 溶液配制及使用方法21-22
• 3.1.4 動物來源22-23
• 3.2 大鼠骨髓 EPCS 的分離、培養(yǎng)和鑒定23-24
• 3.2.1 大鼠骨髓單個核細胞的分離23
• 3.2.2 免疫熒光細胞化學(xué)23-24
• 3.3 動物模型的制備24-25
• 3.3.1 線栓來源24
• 3.3.2 大腦中動脈局灶性腦缺血模型的制備24-25
• 3.4 腦梗死模型的判定25-27
• 3.4.1 行為學(xué)判定25
• 3.4.2 TTC 染色判定25
• 3.4.3 大鼠局灶性腦缺血周邊區(qū)立體定位移植25-26
• 3.4.4 移植術(shù)后大鼠行為學(xué)評分26-27
• 3.5 標本的制作和免疫組織化學(xué)染色方法27-28
• 3.5.1 大鼠的心臟灌流27-28
• 3.5.2 腦組織切片 HE 染色28
• 3.5.3 腦組織切片免疫組織化學(xué)染色（S-P 法）28
• 3.6 數(shù)據(jù)采集28-29
• 3.7 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 第4章 結(jié)果30-41
• 4.1 骨髓 EPCS 的生長特性30-31
• 4.2 免疫熒光細胞化學(xué)31
• 4.3 各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分31-32
• 4.4 TTC 染色比較腦梗死體積32-33
• 4.5 病理學(xué)實驗結(jié)果33-41
• 4.5.1 HE 染色33-35
• 4.5.2 腦組織 VEGF 免疫組織化學(xué)染色35-38
• 4.5.3 腦組織 FGF-2 免疫組織化學(xué)染色38-41
• 第5章 討論41-45
• 5.1 EPCS 的生物學(xué)特性及其應(yīng)用41-42
• 5.2 不同來源的 EPCS42
• 5.3 移植時間窗和劑量的選擇42-43
• 5.4 腦缺血后 VEGF 和 FGF-2 的表達43-45
• 第6章 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-50
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果50-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 富奇志;齊志國;朱曉峰;謝鵬;;血管內(nèi)皮祖細胞對共同植入缺血再灌注模型大鼠腦內(nèi)的神經(jīng)干細胞增殖、凋亡和血管形成的調(diào)節(jié)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2010年06期

2 劉國政;;缺血性腦血管病的研究進展[J];實用心腦肺血管病雜志;2013年08期

3 楊亞榮;曾秋棠;郎明健;閔新文;郭敏;彭昱東;吉慶偉;張靜;;內(nèi)皮祖細胞移植對大鼠心肌梗死后缺血心肌血管再生及心功能的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年25期

4 閆醒軍;邊忠平;;外周血內(nèi)皮祖細胞治療下肢缺血性疾病的療效[J];中國老年學(xué)雜志;2012年07期

5 石旺清;鄭關(guān)毅;陳曉東;朱元貴;張靜;江瓊;;大鼠腦缺血/再灌注后bFGF和GAP-43的表達與神經(jīng)再生[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2013年01期

6 崔立玲;黃國志;陳鎮(zhèn)洲;郭陽;;自體血管內(nèi)皮祖細胞治療缺血缺氧性腦損傷[J];中國組織工程研究;2013年14期

本文編號：740201