本文關(guān)鍵詞：腦創(chuàng)傷后VEGI與創(chuàng)傷周圍組織炎癥反應(yīng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子 創(chuàng)傷性腦損傷 免疫 炎癥 腦水腫

【摘要】：研究目的：腦創(chuàng)傷后顱內(nèi)炎癥反應(yīng)促進(jìn)繼發(fā)性腦損傷的發(fā)展、腦水腫的形成、顱內(nèi)壓的增高、神經(jīng)元的凋亡以及神經(jīng)功能的缺失,顯著惡化原發(fā)性損傷造成的危害。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)是腫瘤壞死因子超家族成員,因其在多種疾病中具有重要作用而受到了廣泛關(guān)注。VEGI除了具有抑制血管新生的作用外,還能調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和抑制水腫的生成。本研究利用液壓沖擊法制作小鼠腦外傷模型,觀察分析腹腔注射VEGI對(duì)小鼠顱腦損傷早期神經(jīng)功能,血腦屏障,腦水腫的影響以及對(duì)腦組織局部炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用,探索VEGI在腦外傷急性期是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。 研究方法：選用清潔級(jí)健康成年雄性C57BL/6小鼠共計(jì)180只,按照隨機(jī)化原則分為假手術(shù)組(Sham組)、腦創(chuàng)傷后腹腔注射VEGI組(TBI+VEGI組)和腦創(chuàng)傷后腹腔注射VEGI溶媒組(TBI+Vehicle組)。分組后建立小鼠液壓打擊顱腦創(chuàng)傷模型,VEGI于傷后1小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)經(jīng)腹腔注射。應(yīng)用改良神經(jīng)功能評(píng)分法(mNSS)評(píng)價(jià)其行為學(xué)功能。TBI小鼠于傷后第1天和3天處死,應(yīng)用干濕重法檢測(cè)各組小鼠傷后腦組織含水量；應(yīng)用伊文思藍(lán)測(cè)定了各組小鼠傷后第3天的血腦屏障滲透率；應(yīng)用免疫組織化學(xué)/免疫熒光組織化學(xué)染色觀察腦創(chuàng)傷后第1天、3天激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞在創(chuàng)傷灶周圍的變化情況。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察各組實(shí)驗(yàn)小鼠的中性粒細(xì)胞在腦創(chuàng)傷后第1天、3天在腦創(chuàng)傷灶的浸潤(rùn)情況,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定各組小鼠腦組織中細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α變化。應(yīng)用Tunel染色技術(shù)檢測(cè)了各組小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化情況。通過(guò)Morris水迷宮于各組小鼠傷后第7-12天進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)價(jià)。 研究結(jié)果：液壓打擊后,小鼠遭受創(chuàng)傷后mNSS即刻升高,TBI+VEGI組與TBI+Vehicle組傷后12小時(shí)組間評(píng)分無(wú)明顯差異(P=0.136),傷后第1天,TBI+VEGI治療組小鼠評(píng)分低于TBI+VehicIe組,并持續(xù)至傷后第7天,各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各創(chuàng)傷組小鼠腦組織HE染色均有TBI后典型病理變化。免疫熒光染色顯示,傷后第1天,各組TBI小鼠創(chuàng)傷側(cè)ED1+小膠質(zhì)細(xì)胞大量激活,并于第3天時(shí)下降。TBI+VEGI組各時(shí)間點(diǎn)ED1+小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量低于TBI+Vehicle組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組化顯示：傷后第1天,各組TBI小鼠創(chuàng)傷側(cè)GFAP+星形膠質(zhì)細(xì)胞大量激活,第3天時(shí)數(shù)量下降,TBI+VEGI組各時(shí)間點(diǎn)GFAP+星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量低于TBI+Vehicle組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。應(yīng)用ELISA檢測(cè)技術(shù)觀察創(chuàng)傷側(cè)的促炎細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α濃度發(fā)現(xiàn)：在傷后第1天和3天,各組TBI小鼠創(chuàng)傷側(cè)IL-1β和TNF-α水平均高于Sham組,TBI+VEGI組各時(shí)間點(diǎn)IL-1β和TNF-α的水平低于TBI+Vehicle組(P0.05)。干濕重觀察發(fā)現(xiàn)：在傷后第1天和3天,與Sham組相比,TBI+VEGI組和TBI+Vehicle組腦水含量均明顯增加；TBI+VEGI組在1天和3天腦組織的水含量明顯低于TBI+Vehicle組,各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。伊文思藍(lán)滲透率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：傷后第3天,TBI+VEGI組小鼠血腦屏障滲透率低于TBI+Vehicle組(P0.05)。免疫組化染色顯示,在傷后第1天,各組TBI小鼠創(chuàng)傷灶周圍有大量中性粒細(xì)胞聚集,并于第3天達(dá)到高峰。TBI+VEGI組小鼠腦組織中MPO+中性粒細(xì)胞數(shù)目在傷后第1天、第3天明顯低于TBI+Vehicle組(P0.05)。Tunel染色觀察小鼠腦創(chuàng)傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況發(fā)現(xiàn)：傷后第3天,TBI+VEGI組腦創(chuàng)傷周圍神經(jīng)元的凋亡數(shù)目明顯低于TBI+Vehicle組(P0.05)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)示,隨著觀察時(shí)間延長(zhǎng),不同處理組小鼠認(rèn)知功能逐漸恢復(fù)。與TBI+Vehicle組比較,VEGI治療組小鼠訓(xùn)練第1天認(rèn)知功能無(wú)明顯改善(P=0.612)。但從第2天開(kāi)始,處理組小鼠逃避潛伏期縮短,并維持至訓(xùn)練結(jié)束,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第12天時(shí),VEGI治療組小鼠目標(biāo)象限所占時(shí)間百分率明顯高于TBI+Vehicle組(P0.05)。 研究結(jié)論：VEGI能夠有效抑制小鼠顱腦創(chuàng)傷急性期腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活,降低腦內(nèi)促炎因子IL-1β和TNF-α的水平,從而減輕腦水腫和血腦屏障滲漏,減少中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)和神經(jīng)元的凋亡,改善TBI小鼠的神經(jīng)功能和空間學(xué)習(xí)能力。VEGI可能成為TBI急性期治療的新途徑。
【關(guān)鍵詞】：血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子 創(chuàng)傷性腦損傷 免疫 炎癥 腦水腫
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 對(duì)象和方法13-33
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料13-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器13-16
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-32
• 2.1 小鼠液壓打擊模型制備17-19
• 2.2 rhVEGI-192 注射19
• 2.3 mNSS評(píng)價(jià)小鼠傷后行為學(xué)損害19-21
• 2.4 小鼠腦組織切片的制備21-24
• 2.5 腦組織石蠟切片HE染色24
• 2.6 腦組織切片免疫組化染色24-26
• 2.7 冰凍切片的免疫組化26-27
• 2.8 冰凍切片的免疫熒光27
• 2.9 Tunel染色27-28
• 2.10 小鼠腦水含量測(cè)定(干濕重法)28-29
• 2.11 測(cè)定小鼠腦損傷后EB滲透率29
• 2.12 ELISA檢測(cè)炎癥因子IL-1β,TNF-α的表達(dá)29-31
• 2.13 Morris水迷宮檢測(cè)空間學(xué)習(xí)記憶能力31-32
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法32-33
• 結(jié)果33-45
• 1. 小鼠腦組織形態(tài)學(xué)觀察33
• 2. 各組小鼠TBI后,ED1~+小膠質(zhì)細(xì)胞在腦組織中的激活情況33-35
• 3. 各組小鼠TBI后,GFAP~+星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦組織中的激活情況35-36
• 4. 各組小鼠TBI后,腦組織中促炎細(xì)胞因子的變化情況36-37
• 5. 各組小鼠腦水含量測(cè)定37-38
• 6. VEGI治療后小鼠血腦屏障滲透率變化38-39
• 7. 各組小鼠外周血中性粒細(xì)胞向創(chuàng)傷區(qū)浸潤(rùn)情況39-40
• 8. 腦創(chuàng)傷后各組小鼠海馬區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)比較40-41
• 9. mNSS評(píng)分評(píng)估小鼠行為學(xué)功能變化41-42
• 10. Morris水迷宮進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)價(jià)42-45
• 討論45-50
• 1. 腦外傷后腦內(nèi)炎癥細(xì)胞的激活45-46
• 2. 血源性中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)加劇腦損傷46-47
• 3. VEGI減少了TBI急性期小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活47-48
• 4. VEGI減少了TBI急性期血腦屏障的滲漏和中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)48
• 5. VEGI在TBI急性期發(fā)揮腦保護(hù)作用48-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明56-57
• 綜述 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子的研究進(jìn)展57-68
• 綜述參考文獻(xiàn)63-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：730292