本文關(guān)鍵詞：腸源性內(nèi)毒素血癥早期肝臟與肺損傷關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:通過(guò)研究經(jīng)門、腔靜脈途徑注入內(nèi)毒素后所致急性肺損傷的差異,以揭示腸源性內(nèi)毒素血癥早期肝臟與肺損傷的關(guān)系。方法:72只健康清潔級(jí)SD大鼠,體重220g±20g,將動(dòng)物隨機(jī)分為2組(采用隨機(jī)數(shù)字表法):對(duì)照組(異硫氰酸熒光素組FITC,F組,36只),內(nèi)毒素組(異硫氰酸熒光素-內(nèi)毒素組FITC-LPS,L組,36只);F組和L組再分為門靜脈亞組(M組,18只)和腔靜脈亞組(Q組,18只);每個(gè)亞組再按15min、30min、60min分為12個(gè)次亞組,每個(gè)次亞組6只大鼠。F組大鼠經(jīng)門、腔靜脈注射FITC-0.9%氯化鈉溶液1ml;L組大鼠經(jīng)門、腔靜脈注射FITC-LPS-0.9%氯化鈉溶液1ml。各組按3個(gè)時(shí)間點(diǎn)心臟取血測(cè)定血漿LPS含量、血漿克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)含量、血漿TNF-α含量;處死動(dòng)物后取肺組織,檢測(cè)大鼠肺組織含水量(左肺濕/干比);經(jīng)熒光顯微鏡下觀察肺組織熒光標(biāo)記的內(nèi)毒素分布;HE染色光鏡下觀察肺組織損傷程度;采用免疫組化法測(cè)定肺組織克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)的表達(dá);透射電鏡下觀察克拉拉細(xì)胞(Clara cells)的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果:1.大鼠血漿內(nèi)毒素含量:與對(duì)照組相比,內(nèi)毒素組明顯高于對(duì)照組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LM組與LQ組比較,LM組血漿內(nèi)毒素含量較LQ組明顯減少,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)二者的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.大鼠血漿克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)含量:內(nèi)毒素組高于對(duì)照組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LM組與LQ組比較,LM組血漿中CC16含量較LQ組高,在3個(gè)時(shí)間段均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LM組與LQ組中30min-60min CC16含量增長(zhǎng)的速度均低于15min-30min CC16含量增長(zhǎng)的速度。3.大鼠血漿TNF-α含量:L組高于F組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LM組血漿TNF-α含量比LQ組高,在15min、30min、60min差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.大鼠肺組織熒光標(biāo)記的內(nèi)毒素檢測(cè):與F組比較,L組熒光素表達(dá)量多,隨時(shí)間遞增,LQ組熒光素表達(dá)明顯高于LM組。5.大鼠肺組織含水量(左肺濕/干比)檢測(cè):與對(duì)照組相比,內(nèi)毒素組高于對(duì)照組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LM組與LQ組比較,LM組肺組織含水量較LQ組高,15min、30min、60min有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.HE染色光鏡觀察肺臟組織損傷:F組肺泡結(jié)構(gòu)完整,肺泡囊清晰,肺泡間隔正常。15min時(shí),LM組中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)明顯;LQ組肺泡上皮細(xì)胞水腫,肺泡隔增寬;30min時(shí),LM組肺泡內(nèi)大量炎性細(xì)胞滲出、水腫、出血,肺泡隔增寬,淋巴濾泡形成;LQ組肺泡上皮中度水腫,肺泡擴(kuò)張,少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。60min時(shí),LM組和LQ組肺泡結(jié)構(gòu)消失,肺泡實(shí)變、擴(kuò)張,大量中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),細(xì)胞明顯水腫。LM組比LQ組比較,LM組肺損傷程度嚴(yán)重,損傷評(píng)分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。7.肺組織克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)免疫組化:在肺臟中,陽(yáng)性染色為細(xì)胞漿呈棕黃色,即為大鼠肺臟克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)。與L組比較,F組評(píng)分明顯升高,呈中度陽(yáng)性表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LM組與LQ組比較,各時(shí)間點(diǎn)兩組均呈弱陽(yáng)性,LQ組評(píng)分均高于LM組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8.透射電鏡觀察肺臟Clara細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu):FM組和FQ組透射電鏡下Clara細(xì)胞超微結(jié)構(gòu):胞體大,呈圓形或橢圓形,細(xì)胞表面有少量的短小微絨毛,細(xì)胞頂端呈帽狀突入管腔。Clara細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有較多滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體及線粒體。細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有膜包繞的、電子密度均勻的致密顆粒,這些致密顆粒即為Clara顆粒,可見顆粒邊移,與細(xì)胞頂部的胞膜相貼。LM組和LQ組60min時(shí)Clara細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示:Clara細(xì)胞變性明顯,核皺縮,核膜內(nèi)陷,核周間隙消失,胞質(zhì)內(nèi)線粒體、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、分泌顆粒均減少,胞質(zhì)內(nèi)Clara顆粒密度不均勻、呈脫顆粒狀態(tài)。結(jié)論:1.腸源性內(nèi)毒素血癥早期即引發(fā)嚴(yán)重肺損傷,其原因可能與枯否氏細(xì)胞被激活,大量致炎因子的“瀑布”樣釋放有關(guān)。2.內(nèi)毒素對(duì)肺臟的直接刺激,可能涉及其對(duì)肺臟保護(hù)體系的預(yù)啟動(dòng)等。
【關(guān)鍵詞】：腸源性內(nèi)毒素血癥 急性肺損傷 內(nèi)毒素 克拉拉細(xì)胞 克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16) TNF-α
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 中英縮略詞對(duì)照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-11
• 1 實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組11-12
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料12
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備12-13
• 1.4 主要試劑的配制13
• 2 實(shí)驗(yàn)方法13-20
• 2.1 動(dòng)物模型制備13-14
• 2.2 動(dòng)物組織提取14
• 2.3 觀察指標(biāo)及方法14-20
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-31
• 3.1 大鼠血漿內(nèi)毒素含量20-21
• 3.2 大鼠血漿克拉拉細(xì)胞蛋白21-22
• 3.3 大鼠血漿 TNF-α 含量22-23
• 3.4 大鼠肺組織熒光標(biāo)記的內(nèi)毒素檢測(cè)23-24
• 3.5 大鼠肺臟含水量檢測(cè)24-25
• 3.6 大鼠肺臟組織病理形態(tài)學(xué)觀察及評(píng)分25-27
• 3.7 大鼠肺臟克拉拉細(xì)胞蛋白（CC16）免疫組化及評(píng)分27-29
• 3.8 透射電鏡下肺臟 Clara 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化29-31
• 4 討論31-34
• 4.1 腸源性內(nèi)毒素血癥31
• 4.2 腸源性內(nèi)毒素血癥早期肝臟的生物學(xué)作用31-32
• 4.3 腸源性內(nèi)毒素血癥早期急性肺損傷32-33
• 4.4 腸源性內(nèi)毒素血癥早期肝臟與肺損傷關(guān)系33-34
• 5 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述:38-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝:47-48
• 作者簡(jiǎn)介:48-49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：682902