本文關鍵詞：組蛋白去乙�；敢种苿⿲C傷大鼠小腸腸屏障損傷的保護作用及機制研究

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【摘要】：目的：以往研究表明，嚴重燒傷后組織缺氧能激活缺氧誘導因子1（HIF-1）信號通路，損害腸上皮屏障功能，組蛋白去乙�；敢种苿℉DACIs）能保護腸缺血引起的胃腸道屏障及遠隔器官損害，但其具體的機制還不十分清楚，本研究假設HDACIs通過增加HIF-1乙酰化水平、抑制HIF-1功能，保護燙傷應激時腸上皮細胞的屏障功能。研究內容包括：1.采用大鼠50%TBSAⅢ度燙傷模型，研究腹腔內給予HDACIs能否減少HIF-1的表達，減輕腸屏障功能損害；2.通過腸上皮細胞低氧培養(yǎng)模型，研究HDACIs下調HIF-1、保護腸上皮屏障功能的可能機制。 方法： 1動物實驗 動物分組：64只清潔級大鼠，體重240g-260g，購入后適應性飼養(yǎng)1周。術前12小時禁食，自由飲水。實驗動物隨機分為4組①假燙對照組（SC組）②燙傷組（SN組）③SAHA治療燙傷組（SS組）④VPA治療燙傷組（SV組）；每組根據(jù)觀察時間點不同又分燙傷后3h（S3）和燙傷后6h（S6）兩個亞組，（每個亞組n=8） 模型制作：取大鼠，，稱重，標號，戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔內注射，麻醉成功后，備背部和腹部皮膚，假燙對照組大鼠置于37℃溫水中，燙傷組大鼠置于100℃熱水中，背部浸潤15s，腹部浸潤8s，假燙后在假燙對照組大鼠腹腔內注射生理鹽水0.25ml，燙傷后在燙傷組大鼠腹腔內依次注射0.25ml生理鹽水、SAHA(7.5mg/kg，溶于0.25ml生理鹽水中)、丙戊酸鈉(300mg/kg，溶于0.25ml生理鹽水中)，分別在傷后3h和6h從腹主動脈取血標本、于回腸末端留取腸組織。 指標檢測:①紫外分光光度計檢測血清中二胺氧化酶(DAO)活性；②熒光顯微鏡觀察免疫熒光雙標法標記后的腸上皮細胞中ZO-1的變化；③用免疫印跡的方法測定腸組織中ZO-1和HIF-1α的含量；④運用多普勒血流儀監(jiān)來測定腸黏膜血流量（IMBF）的變化； 2細胞實驗 細胞分組：取凍存Caco-2細胞，快速復蘇后進行培養(yǎng)細胞，將細胞隨機分為四組①正常對照組（NC組）②缺氧組（H組）③SAHA治療缺氧組(5uM)（HS組）④VPA治療缺氧組（2mM）（HV組）； 模型制作:細胞融合達到95%以上時，分別用DMSO、Cocl2(1mM)+DMSO、 Cocl2(1mM)+SAHA (5uM)、 Cocl2(1mM)+VPA(2mM)+DMSO、刺激24h，24h后留取上清液，取胞漿液。 指標檢測：①紫外分光光度計檢測血清液中二胺氧化酶(DAO)活性；②用免疫印跡的方法測定胞漿中HIF-1α的含量；③免疫共沉淀方法檢測胞漿中HIF-1α乙�；� 結果： 動物實驗： 1血清中DAO活性：燙傷組DAO活性較假燙對照組明顯升高，（P0.05），HDACIs治療燙傷組較燙傷組明顯降低，（P0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）較VPA治療燙傷組（SV組）明顯降低，（P0.05）。 2腸組織中緊密連接蛋白ZO-1：（1）免疫印跡法分析，與假燙對照組比較，燙傷組蛋白表達明顯減少；HDACIs治療燙傷組顯著高于燙傷組，SAHA治療燙傷組（SS組）較VPA治療燙傷組（SV組）高；（2）觀察免疫熒光，相比燙傷組，假燙對照組腸粘膜ZO-1呈陽性顯示，熒光信號強，呈現(xiàn)出連續(xù)的狀態(tài)；HDACIs治療燙傷組熒光信號強于燙傷組（P 0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）熒光信號強于VPA治療燙傷組（SV組）（,P 0.05）。 3HIF-1α Western blot：較假燙對照組，燙傷組HIF-1α表達顯著增多（P0.05），而HDACIs治療燙傷組低于燙傷組（P 0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）低于VPA治療燙傷組（SV組），(P 0.05)。 4腸黏膜血流量：相比假燙對照組，燙傷組IMBF明顯降低，（P 0.05），HDACIs治療燙傷組較燙傷組明顯升高，（P 0.05），SAHA治療燙傷組（SS組）較VPA治療燙傷組（SV組）明顯上升，（P 0.05）。 細胞實驗: 1上清液中DAO活性 缺氧組DAO活性相比空白對照組明顯增大，（P 0.05），而HDACIs治療缺氧組較缺氧組明顯降低，（P0.05），SAHA治療缺氧組較VPA治療缺氧組明顯降低，（P0.05）。 2HIF-1α Western blot：缺氧組HIF-1α蛋白水平較空白對照組顯著升高（P0.05），而HDACIs治療缺氧組HIF-1α蛋白水平較缺氧組較顯著減少（P0.05）， SAHA治療缺氧組較VPA治療缺氧組顯著減少（P0.05）。 3HIF-1α乙酰化水平：通過免疫共沉淀方法能夠檢測HIF-1α乙�；剑毖踅MHIF-1α乙�；讲幻黠@， HDACIs治療缺氧組HIF-1α乙�；捷^缺氧組顯著升高（P0.05）。 結論： 1HDACIs能抑制大鼠燙傷后腸上皮ZO-1的降解，降低腸上皮細胞通透性，保護腸屏障功能，SAHA的保護作用優(yōu)于VPA。 2HDACIs能夠增加HIF-1α乙�；�，減少HIF-1α的表達，保護腸屏障，這可能是HDACIs保護腸粘膜屏障的重要作用機制之一。
【關鍵詞】：組蛋白去乙�；敢种苿� 燙傷 缺氧誘導因子-1 緊密連接蛋白ZO-1 腸屏障
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R644
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-13
• 第一部分 動物實驗13-19
• 材料與方法13-17
• 結果17-18
• 結論18-19
• 第二部分 細胞實驗19-35
• 引言19
• 材料與方法19-22
• 結果22-23
• 附圖23-29
• 附表29-31
• 討論31-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-38
• 綜述 組蛋白去乙酰化酶抑制劑抗缺血缺氧的研究進展38-46
• 參考文獻42-46
• 致謝46-47
• 個人簡歷47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳秀凱 ,蒲踐一 ,邱方 ,程愛國 ,劉剛;二胺氧化酶與D-乳酸對腦損傷大鼠腸屏障功能的監(jiān)測意義[J];中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志;2003年07期

本文編號：667438