本文關(guān)鍵詞：低血糖后葡萄糖再灌注性腦損傷機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 葡萄糖再灌注性腦損傷 Bcl-2 Bax 鈣離子 α酮戊二酸脫氫酶 聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1

【摘要】：目的：低血糖后過快的升糖速度可以引起葡萄糖再灌注性腦損傷，其機(jī)制還不十分清楚，本研究旨在探討胰島素誘導(dǎo)大鼠低血糖后，不同血糖升高速度引起大鼠低血糖后葡萄糖再灌注性腦損傷的機(jī)制。 方法：采用正常雄性SD大鼠36只，其體重控制在200g-300g，我們采用簡單隨機(jī)抽樣分組的方式將36只實(shí)驗(yàn)大鼠分入6個(gè)組別，即空白組，假手術(shù)組，4組實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)組別均有SD大鼠6只�？瞻捉M為不經(jīng)過任何處理的大鼠，假手術(shù)組使用腹腔注射胰島素方式的同時(shí)股靜脈泵注25%葡萄糖，持續(xù)血糖監(jiān)測并維持大鼠血糖在5.5mmol/L上下，4組實(shí)驗(yàn)組先經(jīng)股靜脈泵注胰島素誘導(dǎo)低血糖后，使用推注泵按不同的速率泵注25%的葡萄糖，依據(jù)1小時(shí)后血糖升高的不同水平將4個(gè)組別分為1.0～3.0mmol/L組、3.0～6.0mmol/L組、6.0～9.0mmol/L組和＞9.0mmol/L組。我們使用Western Blot電泳方法分析并檢測4個(gè)不同組別之間凋亡蛋白Bax及Bcl-2在各自大鼠皮層及海馬神經(jīng)細(xì)胞上積分光密度的比值，采用BD流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測4個(gè)不同組別之間大腦皮層及海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的熒光強(qiáng)度的變化。使用雙抗體夾心Elisa方法檢測大腦皮層及海馬神經(jīng)細(xì)胞中α酮戊二酸脫氫酶（α-KGDHC）及聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1（PARP-1）在葡萄糖再灌注1小時(shí)及6小時(shí)后的含量及隨時(shí)間的變化。應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，P0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：（1）凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值變化：與空白組及假手術(shù)組比較，4組實(shí)驗(yàn)組皮層及海馬的Bax/Bcl-2比值明顯升高，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（皮層：F=265.8，P0.05，海馬：F=42.67，P0.05），四組實(shí)驗(yàn)組中＞9.0mmol/L組Bax/Bcl-2表達(dá)比值最大，1.0～3.0mmol/L組次之，與其他兩組實(shí)驗(yàn)組之間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（皮層：F=212.1，P0.05，海馬：F=27.38，P0.05），（2）鈣離子熒光強(qiáng)度變化：與空白組及假手術(shù)組比較,4組實(shí)驗(yàn)組的鈣離子的平均熒光強(qiáng)度明顯升高，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（皮層：F=79.80，P0.05，海馬：F=355.0，P0.05），四組實(shí)驗(yàn)組中＞9.0mmol/L組的鈣離子平均熒光強(qiáng)度最大，1.0～3.0mmol/L組次之，與其他兩組實(shí)驗(yàn)組之間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（皮層：F=50.08，，P0.05，海馬：F=71.13，P0.05）。（3）α酮戊二酸脫氫酶：葡萄糖再灌注1小時(shí)后，在皮層和海馬組織中，1-3mmol/L組，空白組，假手術(shù)組之間α-KGDHC濃度沒有顯著性的差異，其他3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與空白組有顯著性的差異，在皮層中，后三組實(shí)驗(yàn)組相互比較有顯著性的差異（F=10.68，P0.05）,使用SNK-q兩兩比較,其中9mmol/L組α-KGDHC濃度最低。在海馬中,后三組實(shí)驗(yàn)組之間無顯著性的差異（F=1.565，P0.05）。葡萄糖再灌注6小時(shí)后，1-3mmol/L組水平降低，其他三組水平升高（除皮層的6-9mmol/L組）。（4）聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1：在皮層與海馬中，空白組與假手術(shù)組之間沒有差異，4個(gè)實(shí)驗(yàn)組與空白組比較有顯著性的差異，其中在皮層中，1-3mmol/L組，3-6mmol/L組之間沒有顯著性的差異，6-9mmol/L組次之，9mmol/L組相對其他三個(gè)實(shí)驗(yàn)組都有顯著性差異，PARP-1的濃度是最低的，在海馬組織中，1-3mmol/L組與3-6mmol/L組之間沒有顯著性的差異,6-9mmol/L組與9mmol/L組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，PARP-1的濃度是最低。葡萄糖再灌注6小時(shí)后，除了皮層的1-3mmol/L組，其余PARP-1濃度都有所升高。 結(jié)論：升糖速度引起低血糖葡萄糖再灌注腦損傷的機(jī)制與凋亡基因Bax及Bcl-2的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、α-KGDHC及PARP-1酶的改變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：葡萄糖再灌注性腦損傷 Bcl-2 Bax 鈣離子 α酮戊二酸脫氫酶 聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R651.15
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 英文縮略語10-12
• 目錄12-14
• 1 緒論14-16
• 2 材料與方法16-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)器材17-18
• 2.2 主要試劑及液體的配制18-20
• 2.3 采用主要軟件20-21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 2.4.1 動(dòng)物模型的制作與分組21-22
• 2.4.2 標(biāo)本的取材22-23
• 2.4.3 Westernblot 實(shí)驗(yàn)過程23-24
• 2.4.4 鈣離子濃度檢測過程24-25
• 2.4.5 α酮戊二酸脫氫酶及聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1 的檢測過程25-26
• 2.4.6 統(tǒng)計(jì)分析26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-42
• 3.1 Bax/Bcl-2 的結(jié)果26-30
• 3.1.1 各組皮層神經(jīng)細(xì)胞中 Bax/Bcl-2 比值統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果27-29
• 3.1.2 各組海馬神經(jīng)細(xì)胞中 Bax/Bcl-2 比值比較統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果29-30
• 3.2 鈣離子檢測結(jié)果30-33
• 3.2.1 各組皮層神經(jīng)細(xì)胞 Ca2+濃度統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果31-32
• 3.2.2 各組海馬神經(jīng)細(xì)胞 Ca2+濃度統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果32-33
• 3.3 α酮戊二酸脫氫酶及聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-11 小時(shí)的結(jié)果33-38
• 3.3.1 α酮戊二酸脫氫酶在皮層與海馬細(xì)胞中的結(jié)果33-35
• 3.3.2 聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-1 的結(jié)果35-38
• 3.4 α酮戊二酸脫氫酶及聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-16 小時(shí)的結(jié)果38-42
• 3.4.1 α酮戊二酸脫氫酶 6 小時(shí)結(jié)果38-40
• 3.4.2 聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶-16 小時(shí)的結(jié)果40-42
• 4 討論42-47
• 5 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 韋艷玲;;降糖藥物低血糖風(fēng)險(xiǎn)評估及其使用分析[J];臨床合理用藥雜志;2012年03期

2 劉建芝;趙玉武;褚秀麗;徐周偉;;大鼠低血糖后血糖升高水平對腦損傷的影響[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2013年05期

本文編號：635105