本文關(guān)鍵詞：重癥中暑肝竇內(nèi)皮細(xì)胞損傷的初步研究

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【摘要】：目的： 1.觀察重癥中暑大鼠肝損傷變化規(guī)律。 2.探討肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(SEC)在重癥中暑大鼠肝損傷過程中結(jié)構(gòu)及功能損傷的表現(xiàn)。 3.探討血必凈預(yù)處理后,肝臟及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(SEC)在組織學(xué)損傷、炎癥損傷、微循環(huán)障礙等方面的變化。 方法： 1.建立重癥中暑大鼠模型,按不同中心體溫組采集標(biāo)本。 成年SPF級(jí)雄性Wista大鼠共36只,體重約250-350g之間,將其隨機(jī)分為6組,：A.室溫對(duì)照組(Sham組)6只,于實(shí)驗(yàn)開始后第90分鐘時(shí)處死并采集標(biāo)本；B.中心體溫39℃組6只,造模過程中大鼠中心體溫達(dá)到39℃時(shí)立即將其處死并收集標(biāo)本；C.中心體溫42℃組6只,造模過程中大鼠中心體溫達(dá)到42℃時(shí)立即將其處死并收集標(biāo)本；D.重癥中暑組(HS組)6只,大鼠造模成功后立即將其處死并收集標(biāo)本；E.血必凈預(yù)處理重癥中暑組(XBJ組)6只,造模前48小時(shí)尾靜脈注射血必凈注射液預(yù)處理,大鼠造模成功后立即將其處死并收集標(biāo)本；F.生理鹽水預(yù)處理+重癥中暑組(XBJ組)6只,下文簡(jiǎn)稱為saline組,造模前48小時(shí)尾靜脈注射與血必凈注射液同等劑量的生理鹽水預(yù)處理,大鼠造模成功后立即將其處死并收集標(biāo)本。 2.動(dòng)態(tài)觀察觀察重癥中暑形成過程中梯度熱打擊處理后大鼠肝酶譜及肝臟病理?yè)p傷情況、超微結(jié)構(gòu)變化及細(xì)胞凋亡變化。 2.1檢測(cè)大鼠血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)濃度。 2.2HE染色后光鏡下觀察各組大鼠肝臟組織學(xué)變化。 2.3TUNNEL方法檢測(cè)各組肝臟細(xì)胞凋亡情況。 3.動(dòng)態(tài)觀察各組SEC損傷規(guī)律,包括各組大鼠循環(huán)血中SCE損傷標(biāo)記物的濃度以及血管舒縮物質(zhì)的濃度變化、SEC超微結(jié)構(gòu)的變化、相關(guān)因子的表達(dá)變化。 3.1檢測(cè)各組大鼠血清中SEC損傷標(biāo)志物的濃度,包括血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)、透明質(zhì)酸(HA)、(vWF)； 3.2透射電鏡下觀察各組SEC的超微結(jié)構(gòu)變化。 3.3免疫組化方法檢測(cè)各組大鼠肝臟中SEC表達(dá)vWF、組織因子(TF)、TM的變化。 3.4PCR方法檢測(cè)各組SEC表達(dá)粘附分子(ICAM-1)、白介素-6(IL-6)、TF的變化。 3.6檢測(cè)大鼠循環(huán)血中內(nèi)皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)濃度的變化。 結(jié)果： 1.熱打擊中暑大鼠從42℃組開始出現(xiàn)明顯肝損傷,且其程度隨溫度梯度增高而增加,以HS組及saline組為明顯。 1.1中暑大鼠血清AST、ALT濃度HS組與saline組較對(duì)照組明顯增高,42℃組次之(P0.05),XBJ組較中暑組低(P0.05)； 1.2中暑致肝臟病理結(jié)構(gòu)損害從大鼠中心體溫達(dá)42℃時(shí)開始,HS組及saline組明顯,其病理?yè)p害以肝竇周邊表現(xiàn)明顯,XBJ組損害不明顯。 1.3中暑致肝細(xì)胞凋亡從大鼠中心體溫達(dá)42℃時(shí)開始明顯增加,HS組及saline組為著(P0.05),且凋亡細(xì)胞主要集中于肝竇周邊,XBJ組損害不明顯。 2.中暑致SEC結(jié)構(gòu)及功能損傷 2.1中暑致SEC血清標(biāo)志物濃度變化： 2.1.1中暑致sTM濃度降低：39℃組較SHAM組增高,但42℃組、HS組以及saline組均顯著降低,以HS組為明顯,而XBJ組較中暑組高(p0.05)； 2.1.2中暑致HA濃度增高：42℃組、HS組與saline組較對(duì)照組高,XBJ組則次之,數(shù)據(jù)差異明顯(p0.05)； 2.2.3中暑致vWF濃度增高：血清vWF濃度在39℃組即開始緩慢升高,以42℃組、HS組以及saline組為明顯,HS組較42℃組增高明顯,XBJ組較HS組低(p0.05)； 2.2.4中暑致SEC表達(dá)血管舒縮物質(zhì)濃度失衡：ET-1濃度從39℃組開始逐漸增高,HS組及saline組增高顯著,XBJ組較42℃組高,但低于HS組(p0.05)；而SHAM組與39℃組NO濃度無(wú)明顯差異(P0.05),42℃組濃度下降明顯,HS組與saline組濃度下降顯著,XBJ組較42℃及HS組高(P0.05)； 2.2中暑致SEC超微結(jié)構(gòu)變化：對(duì)照組及39℃未見明顯超微結(jié)構(gòu)變化；42℃組：SEC出現(xiàn)明顯腫脹,細(xì)胞完整結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)破壞明顯,局部見空泡樣變性,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹且模糊不清,肝竇擴(kuò)張,淤血明顯,局部有灶性出血病灶；HS組與saline組：SEC明顯縮小,細(xì)胞核皺縮變形,肝竇擴(kuò)張,淤血加重；XBJ組：SEC結(jié)構(gòu)完整,局部空泡樣變性,淤血較前減輕。 2.3中暑致內(nèi)皮相關(guān)標(biāo)志物免疫組化表達(dá)結(jié)果：SHAM組及39℃組均未見明顯TF及vWF表達(dá),42℃、HS組以及saline組肝竇周邊TF及vWF表達(dá)明顯,而XBJ組表達(dá)明顯減少,COD值進(jìn)行分析顯示數(shù)據(jù)差異明顯(P0.05)；42℃組、HS組及saline組肝竇周邊TM表達(dá)顯著減少明顯,XBJ組有輕度表達(dá),各組免疫組化COD值進(jìn)行分析結(jié)果顯示：差異明顯(P0.05)； 3.中暑致肝組織IL-6.ICAM-1、TFmaRNA表達(dá)變化：HS組TF mRNA明顯增高,ICAM-1及IL-6的mRNA在42℃組及HS組表達(dá)增加明顯,數(shù)據(jù)差異具有顯著性(P0.05) 結(jié)論： 梯度熱應(yīng)激過程中出現(xiàn)明顯肝損傷,肝竇區(qū)域局部微循環(huán)障礙；重癥中暑梯度熱打擊過程中SEC出現(xiàn)明顯結(jié)構(gòu)破壞及功能損傷,并通過表達(dá)TM、TF、vWF等凝血相關(guān)因子,以及表達(dá)ET-1與NO等血管舒縮物質(zhì)的濃度失衡而導(dǎo)致局部微循環(huán)紊亂,進(jìn)而加劇肝損傷可能；血必凈預(yù)處理可減輕中暑大鼠的SEC結(jié)構(gòu)及功能損傷,并通過調(diào)節(jié)相關(guān)凝血因子的表達(dá)而減輕肝微循環(huán)障礙。
【關(guān)鍵詞】：重癥中暑 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞 肝損傷 中醫(yī)藥 炎癥損傷 微循環(huán)障礙
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R594.12
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-10
• 目錄10-12
• 前言12-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述14-17
• 1.1 中醫(yī)藥防治中暑的研究14-15
• 1.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞在重癥中暑中的作用研究現(xiàn)狀15
• 1.3 SEC與肝損傷15-16
• 1.4 小結(jié)16-17
• 第二章 實(shí)驗(yàn)研究17-41
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器17
• 2.1.2 主要試劑與耗材17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 2.2.1 建立中暑大鼠模型18-20
• 2.2.2 標(biāo)本采集20
• 2.2.3 ELISA方法檢測(cè)血清標(biāo)志物20-21
• 2.2.4 肝臟組織切片及HE染色檢測(cè)21
• 2.2.5 透射電鏡檢查21
• 2.2.6 免疫組化染色21-22
• 2.2.7 TUNEL染色步驟22-23
• 2.2.8 肝組織IL-6、ICAM-1、TFmRNA表達(dá)RT-PCR步驟23-25
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-26
• 2.3 結(jié)果26-37
• 2.3.1 各組中暑大鼠肝損傷比較26-29
• 2.3.2 梯度熱打擊下SEC結(jié)構(gòu)及功能變化29-37
• 2.4 討論37-41
• 2.4.1 梯度熱打擊致肝損傷37-38
• 2.4.2 梯度熱打擊致SEC損傷及其參與介導(dǎo)的局部微循環(huán)紊亂38-41
• 結(jié)語(yǔ)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 附錄47-49
• 研究生在學(xué)期間發(fā)表論文情況49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：574628