發(fā)布時間：2017-07-26 04:06

  本文關鍵詞：重癥中暑肝竇內(nèi)皮細胞損傷的初步研究

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【摘要】：目的： 1.觀察重癥中暑大鼠肝損傷變化規(guī)律。 2.探討肝竇內(nèi)皮細胞(SEC)在重癥中暑大鼠肝損傷過程中結構及功能損傷的表現(xiàn)。 3.探討血必凈預處理后,肝臟及肝竇內(nèi)皮細胞(SEC)在組織學損傷、炎癥損傷、微循環(huán)障礙等方面的變化。 方法： 1.建立重癥中暑大鼠模型,按不同中心體溫組采集標本。 成年SPF級雄性Wista大鼠共36只,體重約250-350g之間,將其隨機分為6組,：A.室溫對照組(Sham組)6只,于實驗開始后第90分鐘時處死并采集標本；B.中心體溫39℃組6只,造模過程中大鼠中心體溫達到39℃時立即將其處死并收集標本；C.中心體溫42℃組6只,造模過程中大鼠中心體溫達到42℃時立即將其處死并收集標本；D.重癥中暑組(HS組)6只,大鼠造模成功后立即將其處死并收集標本；E.血必凈預處理重癥中暑組(XBJ組)6只,造模前48小時尾靜脈注射血必凈注射液預處理,大鼠造模成功后立即將其處死并收集標本；F.生理鹽水預處理+重癥中暑組(XBJ組)6只,下文簡稱為saline組,造模前48小時尾靜脈注射與血必凈注射液同等劑量的生理鹽水預處理,大鼠造模成功后立即將其處死并收集標本。 2.動態(tài)觀察觀察重癥中暑形成過程中梯度熱打擊處理后大鼠肝酶譜及肝臟病理損傷情況、超微結構變化及細胞凋亡變化。 2.1檢測大鼠血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)濃度。 2.2HE染色后光鏡下觀察各組大鼠肝臟組織學變化。 2.3TUNNEL方法檢測各組肝臟細胞凋亡情況。 3.動態(tài)觀察各組SEC損傷規(guī)律,包括各組大鼠循環(huán)血中SCE損傷標記物的濃度以及血管舒縮物質(zhì)的濃度變化、SEC超微結構的變化、相關因子的表達變化。 3.1檢測各組大鼠血清中SEC損傷標志物的濃度,包括血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)、透明質(zhì)酸(HA)、(vWF)； 3.2透射電鏡下觀察各組SEC的超微結構變化。 3.3免疫組化方法檢測各組大鼠肝臟中SEC表達vWF、組織因子(TF)、TM的變化。 3.4PCR方法檢測各組SEC表達粘附分子(ICAM-1)、白介素-6(IL-6)、TF的變化。 3.6檢測大鼠循環(huán)血中內(nèi)皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)濃度的變化。 結果： 1.熱打擊中暑大鼠從42℃組開始出現(xiàn)明顯肝損傷,且其程度隨溫度梯度增高而增加,以HS組及saline組為明顯。 1.1中暑大鼠血清AST、ALT濃度HS組與saline組較對照組明顯增高,42℃組次之(P0.05),XBJ組較中暑組低(P0.05)； 1.2中暑致肝臟病理結構損害從大鼠中心體溫達42℃時開始,HS組及saline組明顯,其病理損害以肝竇周邊表現(xiàn)明顯,XBJ組損害不明顯。 1.3中暑致肝細胞凋亡從大鼠中心體溫達42℃時開始明顯增加,HS組及saline組為著(P0.05),且凋亡細胞主要集中于肝竇周邊,XBJ組損害不明顯。 2.中暑致SEC結構及功能損傷 2.1中暑致SEC血清標志物濃度變化： 2.1.1中暑致sTM濃度降低：39℃組較SHAM組增高,但42℃組、HS組以及saline組均顯著降低,以HS組為明顯,而XBJ組較中暑組高(p0.05)； 2.1.2中暑致HA濃度增高：42℃組、HS組與saline組較對照組高,XBJ組則次之,數(shù)據(jù)差異明顯(p0.05)； 2.2.3中暑致vWF濃度增高：血清vWF濃度在39℃組即開始緩慢升高,以42℃組、HS組以及saline組為明顯,HS組較42℃組增高明顯,XBJ組較HS組低(p0.05)； 2.2.4中暑致SEC表達血管舒縮物質(zhì)濃度失衡：ET-1濃度從39℃組開始逐漸增高,HS組及saline組增高顯著,XBJ組較42℃組高,但低于HS組(p0.05)；而SHAM組與39℃組NO濃度無明顯差異(P0.05),42℃組濃度下降明顯,HS組與saline組濃度下降顯著,XBJ組較42℃及HS組高(P0.05)； 2.2中暑致SEC超微結構變化：對照組及39℃未見明顯超微結構變化；42℃組：SEC出現(xiàn)明顯腫脹,細胞完整結構結構破壞明顯,局部見空泡樣變性,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹且模糊不清,肝竇擴張,淤血明顯,局部有灶性出血病灶；HS組與saline組：SEC明顯縮小,細胞核皺縮變形,肝竇擴張,淤血加重；XBJ組：SEC結構完整,局部空泡樣變性,淤血較前減輕。 2.3中暑致內(nèi)皮相關標志物免疫組化表達結果：SHAM組及39℃組均未見明顯TF及vWF表達,42℃、HS組以及saline組肝竇周邊TF及vWF表達明顯,而XBJ組表達明顯減少,COD值進行分析顯示數(shù)據(jù)差異明顯(P0.05)；42℃組、HS組及saline組肝竇周邊TM表達顯著減少明顯,XBJ組有輕度表達,各組免疫組化COD值進行分析結果顯示：差異明顯(P0.05)； 3.中暑致肝組織IL-6.ICAM-1、TFmaRNA表達變化：HS組TF mRNA明顯增高,ICAM-1及IL-6的mRNA在42℃組及HS組表達增加明顯,數(shù)據(jù)差異具有顯著性(P0.05) 結論： 梯度熱應激過程中出現(xiàn)明顯肝損傷,肝竇區(qū)域局部微循環(huán)障礙；重癥中暑梯度熱打擊過程中SEC出現(xiàn)明顯結構破壞及功能損傷,并通過表達TM、TF、vWF等凝血相關因子,以及表達ET-1與NO等血管舒縮物質(zhì)的濃度失衡而導致局部微循環(huán)紊亂,進而加劇肝損傷可能；血必凈預處理可減輕中暑大鼠的SEC結構及功能損傷,并通過調(diào)節(jié)相關凝血因子的表達而減輕肝微循環(huán)障礙。
【關鍵詞】：重癥中暑 肝竇內(nèi)皮細胞 肝損傷 中醫(yī)藥 炎癥損傷 微循環(huán)障礙
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R594.12
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-10
• 目錄10-12
• 前言12-14
• 第一章 文獻綜述14-17
• 1.1 中醫(yī)藥防治中暑的研究14-15
• 1.2 血管內(nèi)皮細胞在重癥中暑中的作用研究現(xiàn)狀15
• 1.3 SEC與肝損傷15-16
• 1.4 小結16-17
• 第二章 實驗研究17-41
• 2.1 實驗材料17-18
• 2.1.1 主要實驗儀器17
• 2.1.2 主要試劑與耗材17-18
• 2.2 實驗方法18-26
• 2.2.1 建立中暑大鼠模型18-20
• 2.2.2 標本采集20
• 2.2.3 ELISA方法檢測血清標志物20-21
• 2.2.4 肝臟組織切片及HE染色檢測21
• 2.2.5 透射電鏡檢查21
• 2.2.6 免疫組化染色21-22
• 2.2.7 TUNEL染色步驟22-23
• 2.2.8 肝組織IL-6、ICAM-1、TFmRNA表達RT-PCR步驟23-25
• 2.2.9 統(tǒng)計學處理25-26
• 2.3 結果26-37
• 2.3.1 各組中暑大鼠肝損傷比較26-29
• 2.3.2 梯度熱打擊下SEC結構及功能變化29-37
• 2.4 討論37-41
• 2.4.1 梯度熱打擊致肝損傷37-38
• 2.4.2 梯度熱打擊致SEC損傷及其參與介導的局部微循環(huán)紊亂38-41
• 結語41-42
• 參考文獻42-47
• 附錄47-49
• 研究生在學期間發(fā)表論文情況49-50
• 致謝50

【參考文獻】

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本文編號：574628