發(fā)布時間：2017-07-20 11:18

  本文關(guān)鍵詞：急性肺損傷微環(huán)境對大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞增殖、表型的影響

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【摘要】：肺臟是體內(nèi)最為重要的生命器官之一，由于其特殊的解剖結(jié)構(gòu)以及與外界相通的性質(zhì)，容易受到各種損傷，在創(chuàng)傷時，特別是嚴(yán)重創(chuàng)傷，常伴發(fā)急性肺損傷(Acute lunginjury, ALI)。ALI，其病情嚴(yán)重階段即ARDS。ALI后肺臟會啟動修復(fù)過程，業(yè)已研究發(fā)現(xiàn)，多種類型的位于特殊微環(huán)境中的含量相對較少的細(xì)胞在損傷和修復(fù)過程中起到了非常重要的作用，包括外源性和內(nèi)源性干/祖細(xì)胞。除干/祖細(xì)胞的可能性修復(fù)作用外，越來越多研究還顯示，成熟的終末分化細(xì)胞在組織損傷后的修復(fù)中也可能發(fā)揮重要的作用。近年來，不少學(xué)者在多個器官組織內(nèi)證實在一定條件下存在終末分化細(xì)胞的去分化現(xiàn)象。目前關(guān)于肺組織內(nèi)是否也存在終末分化細(xì)胞的去分化現(xiàn)象，迄今尚未見文獻(xiàn)報道。 Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞(Alveolar type Ⅰ cell，ATⅠ)，是一種大而扁平的細(xì)胞，它覆蓋了95%以上的肺泡表面積，是多種類型損傷的靶細(xì)胞，如呼吸機(jī)所致的肺損傷。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，ATⅠ是“終末分化的細(xì)胞”，只有被動的屏障功能，沒有主動的功能特性，其損傷后由Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞(Alveolar typeⅡcell，ATⅡ)分化補(bǔ)充。但近年的研究發(fā)現(xiàn)，ATⅠ可能具有多樣的生物學(xué)功能，除了參與氣血屏障的形成外，還能夠轉(zhuǎn)運(yùn)水和離子，同時還有一定的免疫調(diào)節(jié)功能。然而，在損傷情況下ATⅠ的生物學(xué)行為會發(fā)生哪些改變以及能否發(fā)生去分化，目前尚未見文獻(xiàn)報道。 本研究在成功建立失血性休克復(fù)合內(nèi)毒素?fù)p傷誘導(dǎo)的ALI動物模型和成功分離培養(yǎng)ATⅠ的基礎(chǔ)上，利用ALI大鼠支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)和肺組織勻漿液(Lung tissue homogenates，LTH)模擬ALI微環(huán)境，在體外觀察損傷微環(huán)境對終末分化的ATⅠ增殖能力的影響以及表型相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響，初步探究急性肺損傷條件下ATⅠ可能的修復(fù)作用。 本研究主要發(fā)現(xiàn)如下： 1.利用“中性蛋白酶消化+IgG貼壁法+免疫磁珠法”成功分離、培養(yǎng)高純度的大鼠ATⅠs，該方法穩(wěn)定、高效； 2.培養(yǎng)所得細(xì)胞表達(dá)ATⅠs特異性標(biāo)志物PDPN、AQP5、Cav-1，幾乎不表達(dá)ATⅡ標(biāo)志物pro-SPC，符合ATⅠ的特性； 3.急性肺損傷微環(huán)境均有一定的促進(jìn)原代AT Ⅰ s增殖的作用，其中，ALI-D3-BALF，ALI-D3、D5-LTH能夠在體外明顯刺激ATⅠs增殖； 4.進(jìn)一步用ALI-D3-LTH處理ATⅠs，通過檢測肺泡細(xì)胞表型相關(guān)基因的表達(dá)情況，ATⅠ特異性標(biāo)志物AQP5和RAGE基因表達(dá)有所降低，ATⅠ分化調(diào)控基因Klf2表達(dá)明顯降低，發(fā)現(xiàn)SPC和Nkx2.1mRNA的表達(dá)水平明顯升高，，通過免疫熒光和蛋白質(zhì)印記的方法確認(rèn)了pro-SPC蛋白的表達(dá)。其機(jī)制可能是肺損傷微環(huán)境誘導(dǎo)細(xì)胞去分化的結(jié)果。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷 急性肺損傷 微環(huán)境 Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞 去分化
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R655.3
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• Abstract6-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-13
• 第二章 大鼠Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究13-32
• 2.1 材料和方法14-23
• 2.2 結(jié)果23-27
• 2.3 討論27-32
• 第三章 急性肺損傷微環(huán)境對大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞增殖、表型的影響32-70
• 3.1 材料和方法32-42
• 3.2 結(jié)果42-56
• 3.3 討論56-70
• 全文結(jié)論70-71
• 參考文獻(xiàn)71-78
• 文獻(xiàn)綜述 Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞研究進(jìn)展78-92
• 參考文獻(xiàn)87-92
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果92-93
• 致謝93

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本文編號：567769