本文關鍵詞：急性肺損傷微環(huán)境對大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮細胞增殖、表型的影響

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【摘要】：肺臟是體內(nèi)最為重要的生命器官之一，由于其特殊的解剖結構以及與外界相通的性質，容易受到各種損傷，在創(chuàng)傷時，特別是嚴重創(chuàng)傷，常伴發(fā)急性肺損傷(Acute lunginjury, ALI)。ALI，其病情嚴重階段即ARDS。ALI后肺臟會啟動修復過程，業(yè)已研究發(fā)現(xiàn)，多種類型的位于特殊微環(huán)境中的含量相對較少的細胞在損傷和修復過程中起到了非常重要的作用，包括外源性和內(nèi)源性干/祖細胞。除干/祖細胞的可能性修復作用外，越來越多研究還顯示，成熟的終末分化細胞在組織損傷后的修復中也可能發(fā)揮重要的作用。近年來，不少學者在多個器官組織內(nèi)證實在一定條件下存在終末分化細胞的去分化現(xiàn)象。目前關于肺組織內(nèi)是否也存在終末分化細胞的去分化現(xiàn)象，迄今尚未見文獻報道。 Ⅰ型肺泡上皮細胞(Alveolar type Ⅰ cell，ATⅠ)，是一種大而扁平的細胞，它覆蓋了95%以上的肺泡表面積，是多種類型損傷的靶細胞，如呼吸機所致的肺損傷。傳統(tǒng)觀念認為，ATⅠ是“終末分化的細胞”，只有被動的屏障功能，沒有主動的功能特性，其損傷后由Ⅱ型肺泡上皮細胞(Alveolar typeⅡcell，ATⅡ)分化補充。但近年的研究發(fā)現(xiàn)，ATⅠ可能具有多樣的生物學功能，除了參與氣血屏障的形成外，還能夠轉運水和離子，同時還有一定的免疫調節(jié)功能。然而，在損傷情況下ATⅠ的生物學行為會發(fā)生哪些改變以及能否發(fā)生去分化，目前尚未見文獻報道。 本研究在成功建立失血性休克復合內(nèi)毒素損傷誘導的ALI動物模型和成功分離培養(yǎng)ATⅠ的基礎上，利用ALI大鼠支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)和肺組織勻漿液(Lung tissue homogenates，LTH)模擬ALI微環(huán)境，在體外觀察損傷微環(huán)境對終末分化的ATⅠ增殖能力的影響以及表型相關標志物表達的影響，初步探究急性肺損傷條件下ATⅠ可能的修復作用。 本研究主要發(fā)現(xiàn)如下： 1.利用“中性蛋白酶消化+IgG貼壁法+免疫磁珠法”成功分離、培養(yǎng)高純度的大鼠ATⅠs，該方法穩(wěn)定、高效； 2.培養(yǎng)所得細胞表達ATⅠs特異性標志物PDPN、AQP5、Cav-1，幾乎不表達ATⅡ標志物pro-SPC，符合ATⅠ的特性； 3.急性肺損傷微環(huán)境均有一定的促進原代AT Ⅰ s增殖的作用，其中，ALI-D3-BALF，ALI-D3、D5-LTH能夠在體外明顯刺激ATⅠs增殖； 4.進一步用ALI-D3-LTH處理ATⅠs，通過檢測肺泡細胞表型相關基因的表達情況，ATⅠ特異性標志物AQP5和RAGE基因表達有所降低，ATⅠ分化調控基因Klf2表達明顯降低，發(fā)現(xiàn)SPC和Nkx2.1mRNA的表達水平明顯升高，，通過免疫熒光和蛋白質印記的方法確認了pro-SPC蛋白的表達。其機制可能是肺損傷微環(huán)境誘導細胞去分化的結果。
【關鍵詞】：創(chuàng)傷 急性肺損傷 微環(huán)境 Ⅰ型肺泡上皮細胞 去分化
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R655.3
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• Abstract6-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-13
• 第二章 大鼠Ⅰ型肺泡上皮細胞的分離、培養(yǎng)及生物學特性研究13-32
• 2.1 材料和方法14-23
• 2.2 結果23-27
• 2.3 討論27-32
• 第三章 急性肺損傷微環(huán)境對大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮細胞增殖、表型的影響32-70
• 3.1 材料和方法32-42
• 3.2 結果42-56
• 3.3 討論56-70
• 全文結論70-71
• 參考文獻71-78
• 文獻綜述 Ⅰ型肺泡上皮細胞研究進展78-92
• 參考文獻87-92
• 攻讀碩士學位期間的研究成果92-93
• 致謝93

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