本文關(guān)鍵詞：OPN誘導(dǎo)小鼠BMSCs向表皮細(xì)胞分化促進(jìn)創(chuàng)面愈合的研究

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【摘要】：研究背景皮膚創(chuàng)面愈合是一個(gè)極其復(fù)雜的病理、生理過程,需要多種細(xì)胞、細(xì)胞因子共同參與并且涉及炎癥反應(yīng)、血管生成、肉芽組織形成和組織重塑,其中皮膚損傷后皮膚表面的完整性需要表皮細(xì)胞再生以維持。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分離、培養(yǎng)后仍然保持了多向分化能力和自我更新能力,其中向表皮細(xì)胞分化已經(jīng)被廣大研究者應(yīng)用于創(chuàng)面修復(fù)[1]。骨橋蛋白屬于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,過去的大量研究表明在參與創(chuàng)面修復(fù)的過程中,骨橋蛋白對炎癥細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等各種細(xì)胞作用的發(fā)揮都起著重要調(diào)控作用。既往研究發(fā)現(xiàn),創(chuàng)面組織內(nèi)聚集的大量骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與創(chuàng)面局部高表達(dá)的骨橋蛋白存在密切的聯(lián)系。研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在分化為表皮細(xì)胞、促進(jìn)創(chuàng)面愈合過程中骨橋蛋白發(fā)揮的重要作用,無疑對促進(jìn)損傷皮膚結(jié)構(gòu)和功能的完全修復(fù)是十分必要的。目的以骨橋蛋白基因敲除小鼠和野生型小鼠作為研究對象,探討骨橋蛋白在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)、體外分化為表皮細(xì)胞過程中發(fā)揮的作用。方法1.體外實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)組,野生型組(WT)和骨橋蛋白基因敲除型組(KO),分離培養(yǎng)野生型和基因敲除型新生鼠(鼠齡1天)的BMSCs,流式鑒定其純度后,取第3代分別在表皮轉(zhuǎn)化培養(yǎng)體系中孵育,通過鏡下觀察、流式細(xì)胞檢測、免疫熒光染色、Western Blot等方法,比較兩組表皮細(xì)胞標(biāo)志物角質(zhì)形成蛋白14(CK14)表達(dá)水平的差異。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組:野生型小鼠創(chuàng)周注射GFP-MSCs組,即WT/MSCs組,按相同的方法,其他3個(gè)組分別為WT/PBS組,KO/MSCs組,KO/PBS組。每組均采用8只雄鼠,鼠齡在6?8周左右,體重20?25g;將分離培養(yǎng)的GFP-MSCs和PBS按以上的分組注射到創(chuàng)周。從術(shù)后第1天開始,連續(xù)7天創(chuàng)面拍照,計(jì)算每組的創(chuàng)面愈合率,并在小動(dòng)物成像儀下觀察GFP-MSCs向創(chuàng)面遷移的情況;分別在術(shù)后第3、5、7天切取創(chuàng)面組織進(jìn)行HE染色觀察創(chuàng)面生長變化,免疫熒光染色檢測GFP-MSCs向表皮細(xì)胞分化的情況。結(jié)果1.分離培養(yǎng)的BMSCs純度超過90%,細(xì)胞形態(tài)呈梭形或成纖維細(xì)胞樣;2.BMSCs體外誘導(dǎo)分化后免疫熒光染色結(jié)果顯示,誘導(dǎo)分化后WT和KO組的細(xì)胞均表達(dá)CK14,WT組的表達(dá)陽性率明顯高于KO組(P0.01);3.BMSCs體外誘導(dǎo)分化后WB檢測CK14的表達(dá)量,WT組明顯高于KO組(P0.01);4.WT/MSCs組創(chuàng)緣注射的GFP-MSCs向創(chuàng)面中心遷移的速度較KO/MSCs組快,并且遷移的數(shù)量也較KO/MSCs組多(P0.01);5.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):以WT/PBS組作為對照,KO/PBS組的創(chuàng)面愈合速度較對照組慢(P0.05),同樣以WT/PBS組作為對照,WT/MSCs組的創(chuàng)面愈合速度較對照組快(P0.05);6.創(chuàng)周注射的GFP-MSCs可以分化為表皮細(xì)胞,其分化能力KO/MSCs組明顯弱于WT/MSCs組(P0.05)。結(jié)論1.骨橋蛋白能夠增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力;2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)外均可被誘導(dǎo)分化為表皮細(xì)胞,骨橋蛋白具有促進(jìn)其分化的作用;3.骨橋蛋白通過誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為表皮細(xì)胞從而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。
【關(guān)鍵詞】：骨橋蛋白(OPN) 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs) 表皮 分化 愈合
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R641
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 1.1 選題緣由11
• 1.2 研究意義11-12
• 1.3 研究內(nèi)容及方法12-13
• 第二章 分離、培養(yǎng)及鑒定BMSCs13-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-21
• 2.4 討論21-22
• 第三章 OPN促進(jìn)BMSCs在體外分化為表皮細(xì)胞22-30
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法24-26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 3.4 討論28-30
• 第四章 創(chuàng)面高表達(dá)的OPN促進(jìn)BMSCs分化為表皮細(xì)胞30-41
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-40
• 4.4 討論40-41
• 全文結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 文獻(xiàn)綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞的來源及其參與創(chuàng)面修復(fù)的研究45-59
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文59-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張彥;胡依民;黃平平;李尚珠;韓忠朝;;間充質(zhì)干細(xì)胞在血管工程中的應(yīng)用[J];中國全科醫(yī)學(xué);2009年24期

2 王海兵;付晉鳳;韓亞龍;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在皮膚缺損修復(fù)中的應(yīng)用[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2009年01期

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本文編號：562235