本文關(guān)鍵詞：利用iTRAQ探索膿毒癥診斷及預(yù)后評估的新型生物學標記物的臨床價值

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【摘要】：目的：本實驗旨在篩選并驗證血清和尿液中具有相關(guān)性的可對膿毒癥進行早期診斷、病情嚴重程度及其預(yù)后評估的新型生物標記物。 方法：收集2012年3月至2013年5月在中國人民解放軍總醫(yī)院呼吸科監(jiān)護病房（RICU）、急診科監(jiān)護病房(EICU)和外科重癥監(jiān)護病房(SICU)的住院、滿足膿毒癥診斷標準兩項或兩項以上條件患者的血標本。應(yīng)用iTRAQ聯(lián)合LC-MS技術(shù)檢測，其中SIRS患者10例，膿毒癥生存患者10例，膿毒癥死亡患者10例，對血清和尿液進行蛋白提取及核素標記、質(zhì)譜檢測，篩選候選差異蛋白，并進行生物信息學分析，進一步篩選具有臨床價值的候選差異表達蛋白。采用ELISA雙抗夾心法分別檢測131例膿毒癥患者和25例SIRS患者血清和尿液候選蛋白。記錄標本收集對應(yīng)時間患者的生命體征、CRP、PCT、血常規(guī)、血生化、凝血功能及動脈血氣分析等資料。 結(jié)果：用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)最終篩選出血尿一致性表達的候選差異蛋白為α-1-酸性糖蛋白（AGP）和維生素D結(jié)合蛋白（VDBP）。在ELISA驗證中，血清中的AGP水平在膿毒癥中明顯高于SIRS組，優(yōu)于CRP和PCT，，且在膿毒癥亞組間差異具有顯著統(tǒng)計學意義。尿液中AGP在膿毒癥診斷及病情嚴重程度評估均無明顯價值（p＞0.05）。血清和尿液VDBP水平在膿毒癥和SIRS患者差異均無統(tǒng)計學意義，但是隨著病情加重，血清VDBP濃度逐漸降低，具有統(tǒng)計學意義。且血清VDBP可預(yù)測膿毒癥患者的轉(zhuǎn)歸。結(jié)論：本實驗首次將定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)應(yīng)用膿毒癥患者血清和尿液標記物的篩選。我們發(fā)現(xiàn)，血清AGP可以有效地鑒別SIRS和膿毒癥患者及評估膿毒癥不同病情嚴重程度，血清VDBP可以對膿毒癥患者的病情嚴重程度及預(yù)后進行客觀評估。
【關(guān)鍵詞】：iTRAQ 膿毒癥 診斷 預(yù)后 生物標記物
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 英文縮略詞表7-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-13
• 第一部分 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學技術(shù)篩選膿毒癥早期診斷及預(yù)后評估標志物13-35
• 第一章 前言13-17
• 第二章 材料與方法17-24
• 第一節(jié) 病例收集17-18
• 2.1.1 病例來源17
• 2.1.2 入選標準與排除標準17-18
• 2.1.3 標本與數(shù)據(jù)采集18
• 第二節(jié) 儀器與耗材18-20
• 2.2.1 主要試劑18-19
• 2.2.2 主要儀器19-20
• 第三節(jié) 實驗方法20-24
• 2.3.1 定量蛋白質(zhì)組學 iTRAQ 技術(shù)原理20
• 2.3.2 定量蛋白質(zhì)組學 iTRAQ 技術(shù)實驗流程20-21
• 2.3.3 蛋白鑒定21-22
• 2.3.4 生物信息學分析22
• 2.3.5 血清和尿液蛋白的聚類分析22-23
• 2.3.6 技術(shù)路線圖23-24
• 第三章 實驗結(jié)果24-31
• 第一節(jié) 質(zhì)譜鑒定24-26
• 3.1.1 蛋白定量標準曲線24-25
• 3.1.2 鑒定到肽段的數(shù)量分布25
• 3.1.3 蛋白序列覆蓋度統(tǒng)計25-26
• 第二節(jié) 生物信息學分析26-29
• 3.2.1 GO 功能分析26-27
• 3.2.2 COG 注釋27-28
• 3.2.3 Pathway 代謝通路注釋28-29
• 第三節(jié) 血清和尿液差異蛋白聚類分析29-30
• 第四節(jié) 血尿差異蛋白相關(guān)性分析30
• 第五節(jié) 差異蛋白篩選30-31
• 第四章 討論31-34
• 第五章 結(jié)論34-35
• 第二部分 α-1-酸性糖蛋白、維生素D結(jié)合蛋白在膿毒癥診斷及預(yù)后評估的臨床價值35-80
• 第一章 前言35-37
• 第二章 材料與方法37-43
• 第一節(jié) 病例收集37-39
• 2.1.1 病例來源37
• 2.1.2 入選標準與排除標準37-38
• 2.1.3 標本與數(shù)據(jù)采集38-39
• 第二節(jié) 儀器與耗材39-43
• 2.2.1 主要試劑39
• 2.2.2 主要儀器39
• 2.2.3 酶聯(lián)免疫法（enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA）39-42
• 2.2.4 統(tǒng)計學分析42-43
• 第三章 實驗結(jié)果43-61
• 第一節(jié) 一般臨床資料43-47
• 3.1.1 各組病例分布43
• 3.1.2 入組患者性別與膿毒癥患者轉(zhuǎn)歸43-44
• 3.1.3 年齡與膿毒癥患者轉(zhuǎn)歸44
• 3.1.4 入組患者基礎(chǔ)疾病分布與膿毒癥轉(zhuǎn)歸44-45
• 3.1.5 病因分布45
• 3.1.6 入組第 1 天時的 WBC、CRP、APACHE II 評分及 SOFA 評分情況45-47
• 第二節(jié) 血清α-1-酸性糖蛋白和維生素 D 結(jié)合蛋白對膿毒癥早期診斷、病情嚴重程度評估的價值47-54
• 3.2.1 候選蛋白的初步篩選47
• 3.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定血清 AGP 和 VDBP 的標準曲線47
• 3.2.3 入組第 1 天 SIRS 及膿毒癥患者的 AGP、VDBP、WBC、CRP、PCT 水平和 APACHE II、SOFA 評分47-49
• 3.2.4 膿毒癥患者亞組間 AGP、VDBP、WBC、CRP、PCT 和 APACHE II、SOFA 評較49-51
• 3.2.5 血清中 AGP 和 VDBP 診斷膿毒癥的價值51-52
• 3.2.6 各指標鑒別不同病情嚴重程度膿毒癥患者的價值52-53
• 3.2.7 血清候選差異蛋白與 SOFA 評分相關(guān)性分析53-54
• 第三節(jié) 血清α-1-酸性糖蛋白和維生素 D 結(jié)合蛋白對膿毒癥患者預(yù)后評估的價值54-57
• 3.3.1 各指標對膿毒癥預(yù)后的評估價值54-55
• 3.3.2 各指標在生存組與死亡組動態(tài)變化55-56
• 3.3.3 膿毒癥患者預(yù)后相關(guān)因素二分類變量 logistic 回歸分析56-57
• 第四節(jié) 尿液中α-1-酸性糖蛋白和維生素 D 結(jié)合蛋白對膿毒癥的診斷價值4957-61
• 3.4.1 SIRS 組和 moderate sepsis 組尿液 AGP、VDBP 水平57
• 3.4.2 尿液中 AGP、VDBP 對膿毒癥的早期診斷價值57-58
• 3.4.3 尿液中 AGP、VDBP 對膿毒癥患者病情嚴重程度的評估價值58-59
• 3.4.4 尿液中 AGP、VDBP 對膿毒癥患者預(yù)后評估價值59-60
• 3.4.5 血液和尿液中 AGP、VDBP 的相關(guān)性分析60-61
• 第四章 討論61-71
• 第一節(jié) 膿毒癥的基本臨床特征61-63
• 4.1.1 發(fā)病率與病死率61
• 4.1.2 性別對膿毒癥的影響61-62
• 4.1.3 年齡對膿毒癥的影響62-63
• 第二節(jié) 新生物標志物對膿毒癥的診斷價值63-66
• 4.2.1 膿毒癥發(fā)病機制的復雜性及尋找生物標志物的必要性63-64
• 4.2.2 α-1-酸性糖蛋白及維生素 D 結(jié)合蛋白簡介64-65
• 4.2.3 血清 AGP、VDBP 對膿毒癥的診斷價值65-66
• 第三節(jié) 新標志物對膿毒癥嚴重程度的評估價值66-68
• 第四節(jié) 新標志物對評估膿毒癥預(yù)后的價值68-69
• 第五節(jié) 尿中新標志物對膿毒癥的價值69-70
• 本研究的不足之處70-71
• 第五章 結(jié)論71-80
• 綜述80-88
• 參考文獻84-88
• 附錄A 急性生理功能和慢性健康狀況評分系統(tǒng)88-92
• 附錄B 膿毒癥相關(guān)器官衰竭評估（即序貫器官衰竭評估）92-93
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章情況93
• 學術(shù)交流93-94
• 致謝94-95

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 文愛清,蔣建新;膿毒癥與基因多態(tài)性相關(guān)性研究進展[J];創(chuàng)傷外科雜志;2005年06期

2 譚文京,楊宇清,藍光明;難治性膿毒癥休克病人的臨床特征與監(jiān)護[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2005年09期

3 劉雙,高偉;膿毒癥的診斷與治療[J];心肺血管病雜志;2005年02期

4 A case report ari I.K.;Mdná r Z.;Lá szló A.;L. Medve;張e

本文編號：515168