目的：探討犬骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)體外分離、純化、擴增的方法，證實其自我更新能力及多向分化潛能，為細胞移植治療急性心肌梗死(AMI)做準備。 方法：無菌條件下用骨髓穿刺針獲取骨髓液，用密度為1.073g/ml的Percoll分離液通過密度梯度離心法獲取骨髓單個核細胞，用含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液種植細胞，通過貼壁篩選法獲得純化的MSCs。細胞生長融合達80%左右時，用胰酶消化傳代細胞，細胞消化、傳代培養(yǎng)三代后，可獲得大量的純度較高的MSCs。對不同代MSCs進行細胞計數(shù)，并繪制生長曲線，觀察細胞生長特性。應(yīng)用流式細胞儀對MSCs表面標記蛋白CD29、CD34進行表面抗原鑒定。取第3代MSCs分別進行成骨組織以及脂肪組織的誘導(dǎo)分化，通過茜素紅以及油紅O染色檢測是否誘導(dǎo)分化為成骨組織以及脂肪組織。 結(jié)果：采用密度梯度法獲得犬骨髓單個核細胞，剛分離的細胞體積較小，呈圓形。細胞培養(yǎng)72小時后觀察可見單個或少量成集落樣生長的貼壁細胞克隆，形態(tài)大多呈短梭形，原代細胞培養(yǎng)10-12天達到傳代標準。細胞傳代后增殖較快，MSCs生長曲線繪制顯示，MSCs生長曲線呈S型，第6-7天生長達到...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 犬骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離、培養(yǎng)及其生物學性質(zhì)的研究
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻
    附圖
第二部分 多功能心腔內(nèi)導(dǎo)管移植骨髓間充質(zhì)干細胞治療急性心肌梗死的實驗研究
    第一節(jié) 多功能心腔內(nèi)導(dǎo)管移植骨髓間充質(zhì)干細胞對犬梗死心肌血管新生的影響
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
        附圖
    第二節(jié) 多功能心腔內(nèi)導(dǎo)管移植骨髓間充質(zhì)干細胞對犬心室重構(gòu)的影響
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻
        附圖
全文小結(jié)
本研究的局限性
文獻綜述一
    參考文獻
致謝
攻讀博士期間發(fā)表論文



本文編號：3992621