發(fā)布時(shí)間：2022-04-28 21:41

　　第一部分:觀察hUCMSCs外泌體對巨噬細(xì)胞RAW264.7中NLRP3炎癥小體活化的影響目的:觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUCMSCs）來源的外泌體可否抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠單核/巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞中NLRP3炎癥小體的過度活化以及其下游炎癥因子的過度表達(dá)。方法:收集hUCMSCs培養(yǎng)上清液并提取外泌體,通過Western blot分析外泌體特征標(biāo)記蛋白,納米粒子示蹤法檢測外泌體濃度和粒徑,流式細(xì)胞儀測定平均外泌體直徑,透射電子顯微鏡觀察典型的外泌體形狀;PKH 67標(biāo)記外泌體,觀察巨噬細(xì)胞對外泌體的攝取情況;巨噬細(xì)胞按2×106/孔接種于6孔板中,隨機(jī)分為4組:巨噬細(xì)胞對照組,巨噬細(xì)胞+LPS組,巨噬細(xì)胞+LPS+hUCMSCs外泌體組,巨噬細(xì)胞+hUCMSCs外泌體組,每組3個(gè)復(fù)孔。收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液及細(xì)胞總蛋白,通過Western blot檢測巨噬細(xì)胞中NLRP3,Caspase-1的蛋白表達(dá)水平;通過ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-1β和IL-6的分泌水平。結(jié)果:巨噬細(xì)胞+LPS組中,NLRP3,Caspase-1蛋白表達(dá)明顯升高,IL-1β和IL-6分泌增多,巨... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 觀察hUCMSCs來源外泌體對RAW264.7巨噬細(xì)胞中NLRP3炎癥小體活化的影響
    1.1 研究背景
    1.2 材料與儀器
        1.2.1 材料
        1.2.2 主要儀器設(shè)備與器材
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 hUCMSCs的流式鑒定
        1.3.3 hUCMSCs的成脂成骨誘導(dǎo)分化鑒定
        1.3.4 巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
        1.3.5 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        1.3.6 hUCMSCs來源外泌體的提取與鑒定
        1.3.7 hUCMSCs來源外泌體對巨噬細(xì)胞的作用
        1.3.8 hUCMSCs外泌體處理炎癥環(huán)境下巨噬細(xì)胞
        1.3.9 細(xì)胞培養(yǎng)上清及細(xì)胞蛋白的收集
        1.3.10 hUCMSCs外泌體調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞炎癥小體NLRP3及其下游炎癥因子的表達(dá)
        1.3.11 ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分泌的IL-1β、IL-6因子水平
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4.1 hUCMSCs衍生的外泌體對巨噬細(xì)胞的影響
        1.4.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體的鑒定
        1.4.3 巨噬細(xì)胞對外泌體的攝取
        1.4.4 hUCMSCs外泌體可降低巨噬細(xì)胞NLRP 3的活化
        1.4.5 細(xì)胞上清液ELISA結(jié)果顯示,IL-6、IL-1β(pg/ml)的含量如下所示
    1.5 統(tǒng)計(jì)方法
第二部分: hUCMSCs來源外泌體在急性肝損傷小鼠模型的保護(hù)作用
    2.1 研究背景
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 急性肝衰竭模型的建立與hUCMSCs外泌體的干預(yù)
        2.3.2 動(dòng)物的麻醉
        2.3.3 組織標(biāo)本的取材與固定
        2.3.4 組織的脫水與石蠟切片的制備
        2.3.5 肝組織病理切片的蘇木素&伊紅染色(HE染色)
        2.3.6 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)檢測肝組織中NLRP3炎癥小體及相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.3.7 炎癥因子含量測定及肝功能的檢測
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 hUCMSCs的外泌體對D-Ga1N/LPS所致急性肝衰竭的保護(hù)作用
        2.4.2 hUCMSCs外泌體抑制急性肝損傷小鼠NLRP3的激活
    2.5 統(tǒng)計(jì)方法
第三章 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
中英文縮寫詞對照表
攻讀學(xué)位期間成果
致謝



本文編號(hào)：3649588