BET抑制劑（+）-JQ1通過調(diào)節(jié)NF-KB信號通路保護小鼠急性肝衰竭實驗研究
發(fā)布時間：2021-08-30 14:53
目的探討溴結(jié)構(gòu)域和額外末端結(jié)構(gòu)域（BET）抑制劑（+）-JQ1對脂多糖/D-氨基半乳糖（LPS/D-Gal）誘導(dǎo)的小鼠急性肝衰竭（ALF）的保護作用及其作用機制。方法將47只C57BL/6小鼠隨機分為對照組（n=15）、模型組（n=17）和（+）-JQ1干預(yù)組（n=15）,采用腹腔注射LPS/D-Gal聯(lián)合誘導(dǎo)ALF模型,其中在干預(yù)組造模前2 h腹腔注射（+）-JQ1。在造模4 h后每組處死5只小鼠,其余小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)至72 h,觀察存活率。采用ELISA法檢測血清TNF-α,采用RT-q PCR法和Western bloting法分別檢測mRNA和蛋白表達。結(jié)果模型組72 h小鼠存活率為16.7%（2/12）,（+）-JQ1干預(yù)組為60.0%（6/10,P>0.05）; ALF組血清ALT水平為（2779.0±200.6） U/L,顯著高于對照組【（44.9±2.5） U/L,P<0.05】,血清AST水平為（2885.0±143.6） U/L,顯著高于對照組【76.0±5.7) U/L,P<0.05】,而（+）-JQ1干預(yù)組血清ALT和AST水平較模型組顯著降低【分...
【文章來源】：實用肝臟病雜志. 2020,23(06)
【文章頁數(shù)】：4 頁
【部分圖文】：
各組小鼠肝臟大體觀
各組小鼠肝組織病理學表現(xiàn)(HE,100×)
ALF是一種少見但病死率很高的臨床疾病，可由多種因素導(dǎo)致。由于肝衰竭導(dǎo)致腦、腎、肺和心等功能衰竭，病情兇險。不論哪種病因均伴有肝內(nèi)炎癥細胞浸潤，體內(nèi)炎癥反應(yīng)過強或過弱均會給機體帶來不良的影響[6-8]。ALF時過度激活的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致肝細胞壞死，加重肝臟損傷。當肝臟內(nèi)細胞壞死和細胞再生無法達到平衡時則會發(fā)生ALF[9]。因此，精密調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)對疾病的控制至關(guān)重要[10-13]。有研究表明，BET蛋白在巨噬細胞釋放促炎細胞因子過程中起到關(guān)鍵性作用，而其抑制劑(+)-JQ1可以有效地抑制過度激活的炎癥反應(yīng)[14-16]。經(jīng)腹腔聯(lián)合注射LPS/D-Gal誘導(dǎo)小鼠ALF是經(jīng)典的ALF模型。LPS是革蘭氏陰性菌的主要成分，它主要通過作用于肝臟枯否細胞來誘導(dǎo)肝損傷。LPS可刺激枯否細胞大量釋放多種促炎細胞因子，包括TNF-α、IL-6和IL-1B，誘導(dǎo)ALF小鼠肝細胞壞死和凋亡。血清ALT和AST是肝臟損傷的重要標志。ALF患者血清ALT和AST會明顯升高。在本實驗中我們觀察到ALF小鼠血清ALT和AST水平明顯升高，而且促炎細胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B水平也明顯升高，肝臟組織學表現(xiàn)為肝臟組織明顯受損，證實ALF小鼠模型制備成功。此外，(+)-JQ1可以有效地抑制LPS/D-Gal聯(lián)合誘導(dǎo)導(dǎo)致的過度激活的炎癥反應(yīng)，抑制促炎細胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B分泌，降低血清ALT和AST水平，具有很好的肝臟保護作用。炎癥反應(yīng)受多條信號通路的調(diào)控，NF-KB信號通路則是其中之一。LPS是NF-KB強有力的激活劑，NF-KB信號通路激活可導(dǎo)致一系列炎癥反應(yīng)相關(guān)基因表達增加，NF-KB是多種炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)[17,18]。當沒有外界刺激時，NF-KB主要位于胞漿，以P65和P50組成的二聚體與IKB結(jié)合。當細胞受到刺激后，IKB蛋白發(fā)生磷酸化而降解，從而暴露出NF-KB，此時NF-KB二聚體由胞漿轉(zhuǎn)入到細胞核，參與多種基因轉(zhuǎn)錄的表達，其中主要包括調(diào)控促炎細胞因子表達的基因。在ALF小鼠模型，NF-KB的激活會促使細胞凋亡信號通路的激活并且促進大量促炎細胞因子的釋放，在肝細胞凋亡及肝損傷中發(fā)揮重要作用，與ALF的預(yù)后密切相關(guān)。本實驗結(jié)果表明ALF模型組IKB蛋白表達明顯減少，而P-P65和P-IKB蛋白表達顯著增多。在(+)-JQ1干預(yù)后可明顯下調(diào)P-P65和P-IKB蛋白的表達，在一定程度上恢復(fù)IKB蛋白的表達量。因此，考慮(+)-JQ1可能通過調(diào)節(jié)NF-KB信號通路來抑制促炎細胞因子的表達，抑制肝細胞的壞死，從而減輕肝組織結(jié)構(gòu)和肝功能的損傷。目前，ALF尚無有效的治療方法，(+)-JQ1在防治ALF中可能具有一定的臨床應(yīng)用價值，值得進一步探討。
本文編號：3372986
【文章來源】：實用肝臟病雜志. 2020,23(06)
【文章頁數(shù)】：4 頁
【部分圖文】：
各組小鼠肝臟大體觀
各組小鼠肝組織病理學表現(xiàn)(HE,100×)
ALF是一種少見但病死率很高的臨床疾病，可由多種因素導(dǎo)致。由于肝衰竭導(dǎo)致腦、腎、肺和心等功能衰竭，病情兇險。不論哪種病因均伴有肝內(nèi)炎癥細胞浸潤，體內(nèi)炎癥反應(yīng)過強或過弱均會給機體帶來不良的影響[6-8]。ALF時過度激活的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致肝細胞壞死，加重肝臟損傷。當肝臟內(nèi)細胞壞死和細胞再生無法達到平衡時則會發(fā)生ALF[9]。因此，精密調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)對疾病的控制至關(guān)重要[10-13]。有研究表明，BET蛋白在巨噬細胞釋放促炎細胞因子過程中起到關(guān)鍵性作用，而其抑制劑(+)-JQ1可以有效地抑制過度激活的炎癥反應(yīng)[14-16]。經(jīng)腹腔聯(lián)合注射LPS/D-Gal誘導(dǎo)小鼠ALF是經(jīng)典的ALF模型。LPS是革蘭氏陰性菌的主要成分，它主要通過作用于肝臟枯否細胞來誘導(dǎo)肝損傷。LPS可刺激枯否細胞大量釋放多種促炎細胞因子，包括TNF-α、IL-6和IL-1B，誘導(dǎo)ALF小鼠肝細胞壞死和凋亡。血清ALT和AST是肝臟損傷的重要標志。ALF患者血清ALT和AST會明顯升高。在本實驗中我們觀察到ALF小鼠血清ALT和AST水平明顯升高，而且促炎細胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B水平也明顯升高，肝臟組織學表現(xiàn)為肝臟組織明顯受損，證實ALF小鼠模型制備成功。此外，(+)-JQ1可以有效地抑制LPS/D-Gal聯(lián)合誘導(dǎo)導(dǎo)致的過度激活的炎癥反應(yīng)，抑制促炎細胞因子TNF-α、IL-6和IL-1B分泌，降低血清ALT和AST水平，具有很好的肝臟保護作用。炎癥反應(yīng)受多條信號通路的調(diào)控，NF-KB信號通路則是其中之一。LPS是NF-KB強有力的激活劑，NF-KB信號通路激活可導(dǎo)致一系列炎癥反應(yīng)相關(guān)基因表達增加，NF-KB是多種炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)[17,18]。當沒有外界刺激時，NF-KB主要位于胞漿，以P65和P50組成的二聚體與IKB結(jié)合。當細胞受到刺激后，IKB蛋白發(fā)生磷酸化而降解，從而暴露出NF-KB，此時NF-KB二聚體由胞漿轉(zhuǎn)入到細胞核，參與多種基因轉(zhuǎn)錄的表達，其中主要包括調(diào)控促炎細胞因子表達的基因。在ALF小鼠模型，NF-KB的激活會促使細胞凋亡信號通路的激活并且促進大量促炎細胞因子的釋放，在肝細胞凋亡及肝損傷中發(fā)揮重要作用，與ALF的預(yù)后密切相關(guān)。本實驗結(jié)果表明ALF模型組IKB蛋白表達明顯減少，而P-P65和P-IKB蛋白表達顯著增多。在(+)-JQ1干預(yù)后可明顯下調(diào)P-P65和P-IKB蛋白的表達，在一定程度上恢復(fù)IKB蛋白的表達量。因此，考慮(+)-JQ1可能通過調(diào)節(jié)NF-KB信號通路來抑制促炎細胞因子的表達，抑制肝細胞的壞死，從而減輕肝組織結(jié)構(gòu)和肝功能的損傷。目前，ALF尚無有效的治療方法，(+)-JQ1在防治ALF中可能具有一定的臨床應(yīng)用價值，值得進一步探討。
本文編號：3372986
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