目的:創(chuàng)傷性腦損傷是由銳器或突然的暴力作用于頭部造成的一種后天型腦組織器質(zhì)性損傷。創(chuàng)傷性腦損傷包括首次和二次損傷,首次損傷后便立即伴隨著繼發(fā)性損傷,它是造成中樞神經(jīng)損傷不易修復(fù)的重要因素。核因子E2相關(guān)因子2(Nucleus factor E2-related factor,Nrf2)在許多神經(jīng)退行性病變中具有神經(jīng)保護作用。前期研究抑制ERK信號通路可以改善神經(jīng)功能,但對于Nrf2-ARE信號通路與細胞外調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK)信號通路之間的相關(guān)性并沒有詳細的報道。因此,我們以黑質(zhì)紋狀體通路損傷為模型來研究二者之間的相關(guān)性。我們推測通過抑制ERK可以活化Nrf2信號通路并抑制氧化應(yīng)激,從而促進腦損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)。研究方法:隨機選取雄性昆明小鼠分為假手術(shù)組,黑質(zhì)紋狀體通路損傷組(traumatic brain injury,TBI),TBI+萊菔硫烷(sulforaphane,SFN)給藥組,TBI+U0126(ERK抑制劑)給藥組。以黑質(zhì)紋狀體通路損傷為模型,損傷后立即進行腹腔注射SFN(5mg/kg),為防止二次損傷立即將U0126(3μg/μL)行損傷原位給藥。利用Western blot檢測Nrf2在損傷周圍組織細胞質(zhì)細胞核中的表達,以及HO-1,NQO1,p-ERK和GFAP在損傷前后及給藥后蛋白表達量;利用免疫熒光組化-檢測損傷周圍星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP以及Nrf2在星形膠質(zhì)細胞中的定位表達;利用超氧化物歧化酶試劑盒檢測損傷前后及給藥后SOD活力值以查看氧化應(yīng)激水平;通過動物行為學(xué)實驗如抓力實驗,以及神經(jīng)功能評分檢測損傷后給予SFN,U0126,對神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。結(jié)果:1.我們應(yīng)用Western blot和免疫熒光組化檢測了損傷后1,4,7,和14天后損傷周圍星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP的表達,損傷后4天時GFAP達到峰值,4天時損傷周圍的星形膠質(zhì)細胞胞體肥大(hypertrophy),突起縮短變粗。2.我們觀測到假手術(shù)組中Nrf2表達較低,只存在于星形膠質(zhì)細胞的胞質(zhì)中,損傷后Nrf2信號通路激活,核內(nèi)表達上升,胞質(zhì)內(nèi)減少,SFN激動劑治療后入核增多,胞質(zhì)內(nèi)明顯有降低趨勢。3.U0126給藥后核內(nèi)Nrf2表達略高于損傷組,胞質(zhì)內(nèi)表達略低于損傷組,說明U0126給藥后對Nrf2入核有促進作用。4.損傷后HO-1,NQO1表達略升高,SFN給藥后表達明顯增加,U0126給藥后HO-1,NQO1表達也高于損傷組。5.損傷后p-ERK表達明顯增加,SFN給藥后表達減少,U0126給藥后明顯抑制了p-ERK的表達。6.損傷后SOD表達明顯減少,SFN,U0126給藥后表達明顯上升。7.行為學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn),SFN和U0126降低了神經(jīng)功能評分,并加強了小鼠的抓力。結(jié)論:SFN,U0126給藥后加強了Nrf2信號通路激活,使Ⅱ相解毒酶HO-1,NQO1,超氧化物歧化酶的表達升高,有效抵抗氧化應(yīng)激促進了神經(jīng)功能恢復(fù),且通過抑制ERK減少了反應(yīng)性膠質(zhì)細胞增殖活化。因此抑制ERK信號通路能夠上調(diào)Nrf2表達,加強內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)促進神經(jīng)功能恢復(fù)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R651.15
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果3.1 腦損傷后星形膠質(zhì)細胞活化首先我們應(yīng)用 Western blot 和免疫熒光組化檢測了損傷后 1，4，7，和 14 天后損傷周圍星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP的表達，損傷后4天時GFAP達到峰值（圖1），4 天時損傷周圍胞體肥大，突起縮短變粗(圖 2)。

圖 3 損傷及給藥組 Nrf2 在胞質(zhì)胞核分布情況圖 3 為 Western blot 檢測 Nrf2 在損傷組和給藥組，胞質(zhì)胞核分布的表達情況； * P ≤ 0.05,*** P ≤ 0.001，與假手術(shù)組比較，# P ≤ 0.05, ## P ≤ 0.01,### P ≤ 0.001 表示與損傷組比較；所有結(jié)果均用 x±s 表示。

圖 3 損傷及給藥組 Nrf2 在胞質(zhì)胞核分布情況圖 3 為 Western blot 檢測 Nrf2 在損傷組和給藥組，胞質(zhì)胞核分布的表達情況； * P ≤ 0.05,*** P ≤ 0.001，與假手術(shù)組比較，# P ≤ 0.05, ## P ≤ 0.01,### P ≤ 0.001 表示與損傷組比較；所有結(jié)果均用 x±s 表示。
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本文編號：2862852