目的:建立DEACMP大鼠模型,探討HIF-1α及Caspase-9在DEACMP模型大鼠海馬組織中的表達(dá)變化情況,為DEACMP發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:健康雄性SD大鼠156只隨機(jī)分為三組:DEACMP組(CO組60只)、假手術(shù)組(SO組60只)、空白對(duì)照組(BC組36只),其中CO組采用多次間隔腹腔注射CO建立DEACMP大鼠模型,SO組采用相同方法注射等量空氣,BC組不進(jìn)行任何處理。選取大鼠染毒后1天、3天、7天、14天、21天、28天將各組大鼠分為6個(gè)亞組。應(yīng)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測試各組大鼠的平均逃避潛伏期、空間探索。HE染色、Tunel染色、免疫組化及Western-blot法,分別檢測模型大鼠海馬區(qū)病理改變、細(xì)胞凋亡情況及HIF-1α、caspase-9蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.DEACMP大鼠模型的建立:(1)CO組大鼠染毒后出現(xiàn)明顯急性CO中毒反應(yīng),皮膚黏膜出現(xiàn)櫻桃紅、煩躁、呼吸急促等。嚴(yán)重中毒大鼠出現(xiàn)抽搐、昏迷死亡。染毒大鼠較對(duì)照組日常活動(dòng)減少、嗜睡、反應(yīng)遲鈍、進(jìn)食量減少。2.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果:各組大鼠染毒前及第7天時(shí)平均逃避潛伏期及第IV運(yùn)動(dòng)時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);CO組在染毒后第14天、21天、28天平均逃避潛伏期延長,第IV象限運(yùn)動(dòng)時(shí)間縮短與染毒前及第7天比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);BC組、SO組各時(shí)間點(diǎn)組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)運(yùn)動(dòng)軌跡:SO組、BC組大鼠趨于直線運(yùn)動(dòng),在短時(shí)間內(nèi)找到平臺(tái);CO組大鼠染毒后運(yùn)動(dòng)軌跡散亂,找到平臺(tái)所需時(shí)間長。3.HE染色結(jié)果:BC組SO組各時(shí)間點(diǎn)海馬區(qū)細(xì)胞形態(tài)正常,細(xì)胞排列整齊,約3-4層錐體細(xì)胞,細(xì)胞膜完整,邊界清楚。CO組海馬區(qū)細(xì)胞腫脹、細(xì)胞數(shù)目減少,排列紊亂,細(xì)胞間隙擴(kuò)大,細(xì)胞核碎裂、深染、固縮。4.Tunel染色結(jié)果:BC、SO組大鼠海馬區(qū)各時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞量少,凋亡指數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CO組在染毒后各時(shí)間點(diǎn)凋亡指數(shù)均較BC、SO組多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),染毒后7天達(dá)到凋亡高峰。5.HIF-1α及Caspase-9蛋白的免疫組化染色表達(dá):(1)HIF-1α蛋白表達(dá):HIF-1α在BC組及SO組中各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)較少且差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CO組染毒后HIF-1α各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均高于BC組及SO組,第3天達(dá)到峰值,組內(nèi)第3天與各時(shí)間點(diǎn)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)Caspase-9蛋白表達(dá):BC組及SO組中表達(dá)少;CO組第1天表達(dá)升高,3天達(dá)到高峰,隨后逐漸下降,組內(nèi)第3天與其它時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.Western Blot方法檢測Caspase-9蛋白的結(jié)果:caspase-9激活體的陽性表達(dá)在膠片上顯示為黑色條帶,CO組Caspase-9激活體表達(dá)較SO組、BC組多;其變化趨勢是CO組1天時(shí)表達(dá)增多,3天時(shí)達(dá)到高峰,然后下降。結(jié)論:1.多次間隔腹腔注射CO法制備DEACMP模型,是一種研究DEACMP相對(duì)理想制備動(dòng)物模型的方法。2.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)可客觀評(píng)價(jià)大鼠認(rèn)知能力,結(jié)合大鼠行為學(xué)變化、血液中COHb水平,可初步作為大鼠是否發(fā)生DEACMP的判定標(biāo)準(zhǔn)。3.急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病的發(fā)生可能與海馬神經(jīng)元遲發(fā)性病理損害有關(guān)。4.HIF-1α在DEACMP中高表達(dá)可促進(jìn)凋亡相關(guān)因子Caspase-9的表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,在DEACMP中發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。
【學(xué)位單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R595.1;R747.9
【部分圖文】：

膜、四肢肢端皮膚、鼠尾呈現(xiàn)櫻桃紅（見圖 1-1），四肢軟癱、拒食少動(dòng)等。部分大鼠出現(xiàn)四肢強(qiáng)直（見圖 1-2），抽搐，大小便失禁，甚至昏迷死亡。將大鼠置于通風(fēng)處 24h 后 CO 組大鼠有 14 只死亡，死亡率 23%，SO 組大鼠腹腔注射空氣精神稍萎靡，持續(xù) 5-10min 恢復(fù)至正常，BC 組大鼠無行為無異常表現(xiàn)，BC、SO 組大鼠無死亡。將存活大鼠觀察至 28 天發(fā)現(xiàn) CO 組大鼠進(jìn)食量及活動(dòng)較 SO、BC 組大鼠減少，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡。對(duì)中毒死亡大鼠解剖：血液暗紅，腹腔內(nèi)臟有大量散在微小出血點(diǎn)，內(nèi)臟器官腫脹，腦組織充血水腫（見圖 1-3）。符合急性 CO中毒死亡的表現(xiàn)。

膜、四肢肢端皮膚、鼠尾呈現(xiàn)櫻桃紅（見圖 1-1），四肢軟癱、拒食少動(dòng)等。部分大鼠出現(xiàn)四肢強(qiáng)直（見圖 1-2），抽搐，大小便失禁，甚至昏迷死亡。將大鼠置于通風(fēng)處 24h 后 CO 組大鼠有 14 只死亡，死亡率 23%，SO 組大鼠腹腔注射空氣精神稍萎靡，持續(xù) 5-10min 恢復(fù)至正常，BC 組大鼠無行為無異常表現(xiàn)，BC、SO 組大鼠無死亡。將存活大鼠觀察至 28 天發(fā)現(xiàn) CO 組大鼠進(jìn)食量及活動(dòng)較 SO、BC 組大鼠減少，反應(yīng)遲鈍，精神萎靡。對(duì)中毒死亡大鼠解剖：血液暗紅，腹腔內(nèi)臟有大量散在微小出血點(diǎn)，內(nèi)臟器官腫脹，腦組織充血水腫（見圖 1-3）。符合急性 CO中毒死亡的表現(xiàn)。

圖 1-3 CO中毒后腦組織充血水腫 COHb 濃度檢測結(jié)果的股動(dòng)脈血經(jīng)全自動(dòng)血?dú)夥治鰞x測得染 濃度均＜1%，CO 組大鼠染毒后 2 小時(shí)至 50%左右，每次追加注射后 2 小時(shí)測復(fù)到＞60%。在 4 小時(shí)內(nèi)維持大鼠動(dòng)脈血 COHb 濃度水平可維持至 16 小時(shí)。SO 組測得的動(dòng)脈血 COHb 濃度始終＜1%。持 CO 重度中毒狀態(tài)至少 16 小時(shí) 2-1各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn) COHb 濃度水平（%
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本文編號(hào)：2841108