PPAR-γ受體介導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞向M2亞型極化對顱腦創(chuàng)傷預(yù)后的影響
【學(xué)位單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:R651.15
【部分圖文】:
4.2原代小膠質(zhì)細胞Iba-1免疫熒光鑒定逡逑小膠質(zhì)細胞特異性抗體丨ba-1免疫熒光鑒定結(jié)果顯示,絕大部分分離培養(yǎng)的細逡逑胞Iba-1表徶陽性,陽性率平均為92.58%,表明小膠質(zhì)細胞分離成功。圖1.1是逡逑小膠質(zhì)細胞Iba-1免疫熒光鑒定結(jié)果,紅色熒光為Iba-1陽性細胞,藍色為DAPI逡逑核染色陽性。逡逑圖1.1小膠質(zhì)細胞Iba-1免疫熒光鑒定:紅色熒光為Iba-1陽性細胞,藍色為DAPI逡逑核染色陽性。逡逑9逡逑
本研究中我們通過激活或抑制PPAR-y受體調(diào)控小膠質(zhì)細胞的極化亞型改變,逡逑實驗中利用Western-blot檢測PPAR-丫蛋白表達水平以反映各組細胞處理后PPAR-y逡逑受體激活情況。圖2.1分別是各組細胞中PPAR-Y表達條帶(A)和各組細胞中逡逑PPAR-y蛋白相對表達水平(B)。研究結(jié)果顯示,相比對照組小鼠,LPS刺激后小逡逑膠質(zhì)細胞中PPAR-y表徶水平顯著降低(p<0.01)。相比LPS處理組,LPS邋+PPAR-Y逡逑激動劑羅格列酮處理組小膠質(zhì)細胞中PPAR-y蛋白表達水平顯著升高(p<0.01),逡逑LPS邋+邋PPAR-y抑制劑GW9662處理組小膠質(zhì)細胞中PPAR-y蛋白表達水平降低(p<逡逑0.01)。結(jié)果表明,LPS刺激可以抑制小膠質(zhì)細胞中PPAR-y蛋白表達,羅格列酮和逡逑GW9662可以有效的上調(diào)或抑制小膠質(zhì)細胞中PPAR-y表達。逡逑A邋c,5l逡逑o邐**邐姦I邋Control逡逑l,c邐**邐 ̄邐■邐-?邋LPS逡逑2*邐1.0-邐■■邋LPS+Rosiglitazoir?逡逑^邋^邐IH|邐LPS+GW9662逡逑Pill邋ill逡逑y邐?逡逑/邋/逡逑B邋/邋^邋/邋/逡逑PPARy邋-mmmmmrn-邋,栥邐rnmmmmm邐栜逡逑圖2.1邋Westem-blot檢測各組細胞中PPAR-Y蛋白表徸情況逡逑圖2.1分別是各組細胞中PPAR-y蛋白檢測條帶(A)和相對表達水平(B)。結(jié)果逡逑顯示
研究中我們通過檢測小膠質(zhì)細胞表面標(biāo)志物的mRNA水平來判定小膠質(zhì)細胞逡逑極化亞型。CD16、CD86為Ml亞型小肢質(zhì)細胞標(biāo)志分子,CD206、YM-1為M2逡逑亞型小肢質(zhì)細胞標(biāo)志分子。圖2.2-圖2.5分別是各組小膠質(zhì)細胞中CD16、CD86、逡逑CD206和YM-lmRNA相對表達水平。結(jié)果顯示,相比于對照組細胞,LPS刺激逡逑后小膠質(zhì)細胞中CD16、CD86mRNA相對表徸水平均顯著升高(p<0.01),邋CD206逡逑和YM-lmRNA相對表達水平均顯著降低(p<0.01)。相比于LPS刺激組,LPS邋+逡逑PPAR-y激動劑羅格列酮組小膠質(zhì)細胞中CD16、CD86mRNA相對表達水平均顯著逡逑降低(p<邋0.01,p邋<0.05),CD206和YM-lmRNA相對表達水平均顯著升高(p<逡逑0.05)。相比于LPS組,LPS邋+邋PPAR-y拮抗劑GW9662組小膠質(zhì)細胞中CD16、CD86逡逑mRNA相對表達水顯著升高(p<邋0.05),CD206和YM-lmRNA相對表達水平顯逡逑著降低(p<0.05)。該研究結(jié)果表明,LPS損傷刺激可促使小膠質(zhì)細胞向Ml亞型逡逑極化
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