【摘要】：背景和目的:疼痛是能引起人生理、心理及情緒上不愉快的感受,伴有機(jī)體潛在性或?qū)嵸|(zhì)上的組織損傷,它是個(gè)體的一種主觀感受。疼痛不僅能影響患者日常生活、社會(huì)交往、睡眠與情緒,還能帶來一系列生理、心理及社會(huì)問題。燒傷疼痛是指因燒傷造成機(jī)體皮膚、黏膜甚至深部組織的結(jié)構(gòu)肌功能破壞,導(dǎo)致皮膚感受器和神經(jīng)末梢受損、暴露或產(chǎn)生病理性變化等,以及在燒傷患者多種診療操作過程中帶來的各種不愉快感受與體驗(yàn)。它可直接影響燒傷創(chuàng)面的愈合速度與質(zhì)量,也可影響患者的預(yù)后與轉(zhuǎn)歸。p75NTR是一種低親和力神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體,屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族成員,能同一系列的蛋白或輔酶結(jié)合從而介導(dǎo)相應(yīng)的功能。p75NTR不僅能參與多種神經(jīng)元細(xì)胞的存活、凋亡及神經(jīng)軸突髓鞘的形成,還能作為輔助蛋白調(diào)節(jié)TrkA受體的反應(yīng)。因前期實(shí)驗(yàn)主要研究p75NTR與TrkA在皮膚創(chuàng)面愈合中的相互作用,且p75NTR能否對(duì)疼痛敏感性及TrkA的含量產(chǎn)生影響,目前還沒有明確的研究。因此本實(shí)驗(yàn)采用敲除皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞中p75NTR基因小鼠,選用TrkA作為檢測(cè)指標(biāo),觀察其在敲基因小鼠皮膚中的差異性表達(dá),并采用神經(jīng)軸突纖維特異性蛋白PGP9.5作為另一項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo),來觀察敲基因小鼠皮膚中神經(jīng)纖維含量的變化,評(píng)估敲基因小鼠對(duì)疼痛敏感性的變化,初步探討p75NTR與皮膚疼痛的關(guān)系及其相關(guān)機(jī)制。方法:選用8-12w健康成熟的野生純合雌鼠(WT)和p75NTR敲基因雌鼠(KO),體重20±2g,選用疼痛實(shí)驗(yàn)(熱板試驗(yàn)和丙酮實(shí)驗(yàn))來觀察兩組小鼠對(duì)疼痛敏感性的影響,研究P75NTR基因敲除小鼠對(duì)疼痛敏感性評(píng)估。取未做任何處理的野生純合小鼠和敲基因小鼠皮膚進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和Western blot,來分析TrkA蛋白和PGP9.5蛋白在敲基因小鼠中的差異性表達(dá)。結(jié)果:熱板試驗(yàn)中將小鼠第一次舔后足的時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,示KO組對(duì)傷害性熱刺激引起的疼痛縮足反應(yīng)時(shí)間更短(p0.001,n=13);丙酮試驗(yàn)中將小鼠爪抓剃毛區(qū)的次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,示KO組對(duì)傷害性冷刺激引起的疼痛抓撓反應(yīng)次數(shù)增加(p0.001,n=10);免疫組化結(jié)果顯示p75NTR主要表達(dá)于表皮基底層,且在KO小鼠表皮中不表達(dá);PGP9.5蛋白散在顆粒狀分布于表皮基地層,且在KO小鼠表皮中表達(dá)呈強(qiáng)陽性;TrkA蛋白連續(xù)均勻的分布于表皮中,且在KO小鼠表皮中表達(dá)增多;Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在KO小鼠中p75NTR蛋白不表達(dá)(p0.001,n=9),而TrkA蛋白表達(dá)水平升高(p0.01,n=9),PGP9.5蛋白表達(dá)水平明顯升高(p0.001,n=9)。結(jié)論:敲基因小鼠皮膚中敲除了p75NTR基因;表皮細(xì)胞p75NTR基因敲除小鼠疼痛敏感性增高;表皮細(xì)胞p75NTR基因敲除小鼠皮膚組織中神經(jīng)纖維末梢含量增多;表皮細(xì)胞p75NTR基因敲除小鼠皮膚組織中TrkA表達(dá)增加。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R644
【圖文】：

圖１皮膚組織Ｐ７５ＮＴＲ免疫熒光染Ａ邐Ｂ逡逑２５－１邐１５－１逡逑￣ｒ邐．逡逑２０－邐｜｜邐ｃ逡逑0逡逑ｏ＇邐０邋１０－ｉ邋ｊ，ｎ邐＇邋邋ｏ－Ｌ－１——．————逡逑ＷＴ邐ＫＯ邐ＷＴ邐ＫＯ逡逑

圖２疼痛實(shí)驗(yàn)Ａ熱板試驗(yàn)Ｂ丙酮實(shí)驗(yàn)逡逑

ＷＴ邐ＫＯ逡逑圖３免疫組織化學(xué)染色ＩＨＣ邋（ｘ４００）逡逑Ｃｌ、Ｃ２邋ｐ７５ＮＴＲ邋蛋白邋Ｄ１、Ｄ２邋ＰＧＰ９．５邋蛋白邋Ｅｌ、Ｅ２邋ＴｒｋＡ邋蛋白逡逑ＷＴ邐ＫＯ逡逑ｇａｐｄｈ邐ｍｍｍ邋ｍｍｍ邐１0ｌ邐－＾－逡逑０．８－逡逑Ｐ７ＢＮＴＲ邐Ｓ°＇６＇逡逑

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