【摘要】：背景和目的:疼痛是能引起人生理、心理及情緒上不愉快的感受,伴有機體潛在性或?qū)嵸|(zhì)上的組織損傷,它是個體的一種主觀感受。疼痛不僅能影響患者日常生活、社會交往、睡眠與情緒,還能帶來一系列生理、心理及社會問題。燒傷疼痛是指因燒傷造成機體皮膚、黏膜甚至深部組織的結(jié)構(gòu)肌功能破壞,導(dǎo)致皮膚感受器和神經(jīng)末梢受損、暴露或產(chǎn)生病理性變化等,以及在燒傷患者多種診療操作過程中帶來的各種不愉快感受與體驗。它可直接影響燒傷創(chuàng)面的愈合速度與質(zhì)量,也可影響患者的預(yù)后與轉(zhuǎn)歸。p75NTR是一種低親和力神經(jīng)營養(yǎng)因子受體,屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族成員,能同一系列的蛋白或輔酶結(jié)合從而介導(dǎo)相應(yīng)的功能。p75NTR不僅能參與多種神經(jīng)元細胞的存活、凋亡及神經(jīng)軸突髓鞘的形成,還能作為輔助蛋白調(diào)節(jié)TrkA受體的反應(yīng)。因前期實驗主要研究p75NTR與TrkA在皮膚創(chuàng)面愈合中的相互作用,且p75NTR能否對疼痛敏感性及TrkA的含量產(chǎn)生影響,目前還沒有明確的研究。因此本實驗采用敲除皮膚角質(zhì)形成細胞中p75NTR基因小鼠,選用TrkA作為檢測指標,觀察其在敲基因小鼠皮膚中的差異性表達,并采用神經(jīng)軸突纖維特異性蛋白PGP9.5作為另一項檢測指標,來觀察敲基因小鼠皮膚中神經(jīng)纖維含量的變化,評估敲基因小鼠對疼痛敏感性的變化,初步探討p75NTR與皮膚疼痛的關(guān)系及其相關(guān)機制。方法:選用8-12w健康成熟的野生純合雌鼠(WT)和p75NTR敲基因雌鼠(KO),體重20±2g,選用疼痛實驗(熱板試驗和丙酮實驗)來觀察兩組小鼠對疼痛敏感性的影響,研究P75NTR基因敲除小鼠對疼痛敏感性評估。取未做任何處理的野生純合小鼠和敲基因小鼠皮膚進行免疫組織化學(xué)染色和Western blot,來分析TrkA蛋白和PGP9.5蛋白在敲基因小鼠中的差異性表達。結(jié)果:熱板試驗中將小鼠第一次舔后足的時間進行統(tǒng)計學(xué)分析,示KO組對傷害性熱刺激引起的疼痛縮足反應(yīng)時間更短(p0.001,n=13);丙酮試驗中將小鼠爪抓剃毛區(qū)的次數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)分析,示KO組對傷害性冷刺激引起的疼痛抓撓反應(yīng)次數(shù)增加(p0.001,n=10);免疫組化結(jié)果顯示p75NTR主要表達于表皮基底層,且在KO小鼠表皮中不表達;PGP9.5蛋白散在顆粒狀分布于表皮基地層,且在KO小鼠表皮中表達呈強陽性;TrkA蛋白連續(xù)均勻的分布于表皮中,且在KO小鼠表皮中表達增多;Western blot實驗結(jié)果表明,在KO小鼠中p75NTR蛋白不表達(p0.001,n=9),而TrkA蛋白表達水平升高(p0.01,n=9),PGP9.5蛋白表達水平明顯升高(p0.001,n=9)。結(jié)論:敲基因小鼠皮膚中敲除了p75NTR基因;表皮細胞p75NTR基因敲除小鼠疼痛敏感性增高;表皮細胞p75NTR基因敲除小鼠皮膚組織中神經(jīng)纖維末梢含量增多;表皮細胞p75NTR基因敲除小鼠皮膚組織中TrkA表達增加。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R644
【圖文】：

圖１皮膚組織Ｐ７５ＮＴＲ免疫熒光染Ａ邐Ｂ逡逑２５－１邐１５－１逡逑￣ｒ邐．逡逑２０－邐｜｜邐ｃ逡逑0逡逑ｏ＇邐０邋１０－ｉ邋ｊ，ｎ邐＇邋邋ｏ－Ｌ－１——．————逡逑ＷＴ邐ＫＯ邐ＷＴ邐ＫＯ逡逑

圖２疼痛實驗Ａ熱板試驗Ｂ丙酮實驗逡逑

ＷＴ邐ＫＯ逡逑圖３免疫組織化學(xué)染色ＩＨＣ邋（ｘ４００）逡逑Ｃｌ、Ｃ２邋ｐ７５ＮＴＲ邋蛋白邋Ｄ１、Ｄ２邋ＰＧＰ９．５邋蛋白邋Ｅｌ、Ｅ２邋ＴｒｋＡ邋蛋白逡逑ＷＴ邐ＫＯ逡逑ｇａｐｄｈ邐ｍｍｍ邋ｍｍｍ邐１0ｌ邐－＾－逡逑０．８－逡逑Ｐ７ＢＮＴＲ邐Ｓ°＇６＇逡逑

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本文編號：2766921