【摘要】：目的探討N-乙�；�-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)通過Rho GTP酶調(diào)節(jié)TGF-β1介導的皮膚肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化和遷移的作用及其機制。方法原代培養(yǎng)大鼠乳鼠皮膚成纖維細胞,取第二代細胞進行實驗。實驗分組:1空白對照組:無血清培養(yǎng)基培養(yǎng);2 TGF-β1誘導組:無血清培養(yǎng)條件下,加入終濃度為100 nmol/L的TGF-β1誘導48h;3 Ac-SDKP預處理組:無血清培養(yǎng)條件下,先給予100 nmol/L的Ac-SDKP預處理1h,再給予TGF-β1誘導48h。劃痕實驗檢測細胞遷移能力,免疫細胞化學法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型膠原(TypeⅠcollagen,ColⅠ)、Ras相關的C3肉毒素底物(Ras related C3 botulin substrate 1,Rac1)、Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho associated coiledcoil forming protein kinase,ROCK)、細胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)、Ras同源基因家族成員A(Ras homolog gene family,member A,Rho A)蛋白的表達,Western-blot法檢測α-SMA、血清應答因子(serum response factor,SRF)、心肌蛋白相關轉(zhuǎn)錄因子(myocardin related transcription factor A,MRTF-A)、Ⅰ型膠原(ColⅠ)、Rac1、Rho A、ROCK、III型膠原(Type III collagen,Col III),和CDC42蛋白的表達。結(jié)果1細胞劃痕實驗顯示,與空白對照組比較,TGF-β1誘導組細胞遷移至中央劃痕區(qū)的距離明顯增大;與TGF-β1誘導組相比,Ac-SDKP預處理組細胞遷移至中央劃痕區(qū)的距離減小。2免疫細胞化學法結(jié)果顯示,TGF-β1誘導組細胞中α-SMA、Rac1、ROCK、Rho A、CDC42和ColⅠ的陽性表達較空白對照組增強;而Ac-SDKP預處理組可明顯抑制α-SMA、Rac1、ROCK、Rho A、CDC42和ColⅠ的陽性表達。3 Western-blot結(jié)果顯示,TGF-β1誘導組的肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化相關蛋白α-SMA、ColⅠ、Col III、SRF和MRTF-A的表達較空白對照組分別上調(diào)1.8倍、2.8倍、2倍、1.69倍和1.76倍;Rho GTP酶相關蛋白Rac1、CDC42,ROCK和Rho A的表達較空白對照組分別上調(diào)2倍、1.43倍、1.78倍和2.21倍;而經(jīng)AcSDKP預處理后的肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化相關蛋白α-SMA、ColⅠ、Col III、SRF和MRTF-A的蛋白表達較TGF-β1誘導組分別下降57%、36%、71%、67.76%和52.08%;Rho GTP酶相關蛋白Rac1、CDC42,ROCK和Rho A的表達也分別下調(diào)18.75%、51.52%、51.39%和23.81%(P0.05)。結(jié)論Ac-SDKP可能夠通過調(diào)節(jié)Rho GTP酶信號,抑制TGF-β1介導的皮膚肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化和遷移,發(fā)揮其抗纖維化的作用。圖10幅;表4個;參153篇。
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R641
【圖文】：

ColⅠ及ColIII表達水平均較低，給予TGF-β1刺激后，各蛋白的表達水平分別上調(diào)至對照組的1.8，2.8和2倍；而Ac-SDKP預處理組與TGF-β1誘導組比較，α-SMA，ColⅠ及ColIII分別下調(diào)57%，36%及71%（圖1，表1）。免疫細胞化學檢測結(jié)果顯示，在皮膚（肌）成纖維細胞中，與對照組相比，在給予TGF-β1誘導后細胞內(nèi)α-SMA和ColⅠ的表達呈強陽性，α-SMA呈纖絲狀平行交叉排列，ColⅠ呈團塊狀堆積，給予Ac-SDKP干預組，與TGF-β1誘導組相比α-SMA和ColⅠ表達明顯減弱（圖2，3）。以上圖片結(jié)果均經(jīng)分析后得到相應的數(shù)據(jù)

給予TGF-β1誘導后細胞內(nèi)α-SMA和ColⅠ的表達呈強陽性，α-SMA呈纖絲狀平行交叉排列，ColⅠ呈團塊狀堆積，給予Ac-SDKP干預組，與TGF-β1誘導組相比α-SMA和ColⅠ表達明顯減弱（圖2，3）。以上圖片結(jié)果均經(jīng)分析后得到相應的數(shù)據(jù)，所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學分析，均有意義（P＜0.05）。

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 李淑鈺;徐洪;孫月;袁媛;鄧海靜;馬文東;魏中秋;楊奕;王瑞敏;楊方;;Ac-SDKP對ROCK通路介導矽肺大鼠肌成纖維細胞分化抑制作用[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2013年02期

2 王麗雅;廖學娟;鄭曉輝;龍潔;;Wnt信號通路與骨髓間充質(zhì)干細胞成骨之間的關系[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2012年20期

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本文編號：2718394