【摘要】：目的探討N-乙�；�-絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)通過(guò)Rho GTP酶調(diào)節(jié)TGF-β1介導(dǎo)的皮膚肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化和遷移的作用及其機(jī)制。方法原代培養(yǎng)大鼠乳鼠皮膚成纖維細(xì)胞,取第二代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組:1空白對(duì)照組:無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng);2 TGF-β1誘導(dǎo)組:無(wú)血清培養(yǎng)條件下,加入終濃度為100 nmol/L的TGF-β1誘導(dǎo)48h;3 Ac-SDKP預(yù)處理組:無(wú)血清培養(yǎng)條件下,先給予100 nmol/L的Ac-SDKP預(yù)處理1h,再給予TGF-β1誘導(dǎo)48h。劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型膠原(TypeⅠcollagen,ColⅠ)、Ras相關(guān)的C3肉毒素底物(Ras related C3 botulin substrate 1,Rac1)、Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho associated coiledcoil forming protein kinase,ROCK)、細(xì)胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)、Ras同源基因家族成員A(Ras homolog gene family,member A,Rho A)蛋白的表達(dá),Western-blot法檢測(cè)α-SMA、血清應(yīng)答因子(serum response factor,SRF)、心肌蛋白相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(myocardin related transcription factor A,MRTF-A)、Ⅰ型膠原(ColⅠ)、Rac1、Rho A、ROCK、III型膠原(Type III collagen,Col III),和CDC42蛋白的表達(dá)。結(jié)果1細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,與空白對(duì)照組比較,TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞遷移至中央劃痕區(qū)的距離明顯增大;與TGF-β1誘導(dǎo)組相比,Ac-SDKP預(yù)處理組細(xì)胞遷移至中央劃痕區(qū)的距離減小。2免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示,TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞中α-SMA、Rac1、ROCK、Rho A、CDC42和ColⅠ的陽(yáng)性表達(dá)較空白對(duì)照組增強(qiáng);而Ac-SDKP預(yù)處理組可明顯抑制α-SMA、Rac1、ROCK、Rho A、CDC42和ColⅠ的陽(yáng)性表達(dá)。3 Western-blot結(jié)果顯示,TGF-β1誘導(dǎo)組的肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白α-SMA、ColⅠ、Col III、SRF和MRTF-A的表達(dá)較空白對(duì)照組分別上調(diào)1.8倍、2.8倍、2倍、1.69倍和1.76倍;Rho GTP酶相關(guān)蛋白R(shí)ac1、CDC42,ROCK和Rho A的表達(dá)較空白對(duì)照組分別上調(diào)2倍、1.43倍、1.78倍和2.21倍;而經(jīng)AcSDKP預(yù)處理后的肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白α-SMA、ColⅠ、Col III、SRF和MRTF-A的蛋白表達(dá)較TGF-β1誘導(dǎo)組分別下降57%、36%、71%、67.76%和52.08%;Rho GTP酶相關(guān)蛋白R(shí)ac1、CDC42,ROCK和Rho A的表達(dá)也分別下調(diào)18.75%、51.52%、51.39%和23.81%(P0.05)。結(jié)論Ac-SDKP可能夠通過(guò)調(diào)節(jié)Rho GTP酶信號(hào),抑制TGF-β1介導(dǎo)的皮膚肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化和遷移,發(fā)揮其抗纖維化的作用。圖10幅;表4個(gè);參153篇。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R641
【圖文】：

ColⅠ及ColIII表達(dá)水平均較低，給予TGF-β1刺激后，各蛋白的表達(dá)水平分別上調(diào)至對(duì)照組的1.8，2.8和2倍；而Ac-SDKP預(yù)處理組與TGF-β1誘導(dǎo)組比較，α-SMA，ColⅠ及ColIII分別下調(diào)57%，36%及71%（圖1，表1）。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，在皮膚（�。┏衫w維細(xì)胞中，與對(duì)照組相比，在給予TGF-β1誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)α-SMA和ColⅠ的表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，α-SMA呈纖絲狀平行交叉排列，ColⅠ呈團(tuán)塊狀堆積，給予Ac-SDKP干預(yù)組，與TGF-β1誘導(dǎo)組相比α-SMA和ColⅠ表達(dá)明顯減弱（圖2，3）。以上圖片結(jié)果均經(jīng)分析后得到相應(yīng)的數(shù)據(jù)

給予TGF-β1誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)α-SMA和ColⅠ的表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，α-SMA呈纖絲狀平行交叉排列，ColⅠ呈團(tuán)塊狀堆積，給予Ac-SDKP干預(yù)組，與TGF-β1誘導(dǎo)組相比α-SMA和ColⅠ表達(dá)明顯減弱（圖2，3）。以上圖片結(jié)果均經(jīng)分析后得到相應(yīng)的數(shù)據(jù)，所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均有意義（P＜0.05）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 李淑鈺;徐洪;孫月;袁媛;鄧海靜;馬文東;魏中秋;楊奕;王瑞敏;楊方;;Ac-SDKP對(duì)ROCK通路介導(dǎo)矽肺大鼠肌成纖維細(xì)胞分化抑制作用[J];中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué);2013年02期

2 王麗雅;廖學(xué)娟;鄭曉輝;龍潔;;Wnt信號(hào)通路與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨之間的關(guān)系[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年20期

3 段紅梅;吳志遠(yuǎn);江黎明;;皮膚創(chuàng)傷在胚胎內(nèi)外愈合過(guò)程中基因差異表達(dá)[J];廣西醫(yī)學(xué);2009年09期

4 袁媛;楊方;徐洪;于婉瑩;孫月;鄧海靜;馬文東;魏中秋;王瑞敏;;Ac-SDKP對(duì)ROCK通路介導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2013年09期

本文編號(hào)：2718394