發(fā)布時間：2020-05-31 17:25

【摘要】：目的:急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是一種常見的臨床危重病癥,嚴重的ALI極易發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合癥(acute respiratory ditress syndrome,ARDS),以進行性呼吸窘迫和難治性低氧血癥為臨床特征。由于缺乏有效的治療方法,該病的病死率高達30-40%,對民眾的健康造成了嚴重危害。ALI的本質是機體內(nèi)失控的炎癥反應,其中促炎性細胞因子與抗炎性細胞因子的比例失衡是炎癥反應失控的關鍵,因此重建促炎因子和抗炎因子的平衡有望成為治療ALI的新策略。白細胞介素-4(IL-4)是一種主要由Th2細胞產(chǎn)生的免疫活性細胞因子,它能夠抑制如IL-1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等促炎性細胞因子的分泌,同時能促進IL-10、IL-13等抗炎性細胞因子的分泌,從而有利于恢復促炎因子和抗炎因子之間的平衡,有可能成為治療ALI的理想藥物。因此本研究旨在評價IL-4對小鼠ALI的治療效果。方法:將健康的C57BL/6J雌性小鼠隨機分為3組:對照組、LPS組和IL-4組。給LPS組和IL-4組的小鼠氣管中先滴注LPS溶液(15 mg/kg)以構建穩(wěn)定的ALI模型,給對照組小鼠氣管中滴入體積相等的PBS作為對照。LPS滴注完畢0.5 h后向IL-4組小鼠氣管內(nèi)滴注IL-4溶液(10μg/kg),向對照組和LPS組小鼠氣管內(nèi)均滴注等體積的PBS。觀察不同實驗組小鼠的精神狀態(tài)、進食情況、反應能力等一般狀況。在LPS滴注完后的6 h和48 h兩個時間點采集標本,利用蘇木精-伊紅染色法(HE染色)評價小鼠的肺病理損傷程度、測定小鼠的肺組織濕干重比、BCA法測定小鼠肺泡盥洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的總蛋白,并測定小鼠肺組織勻漿中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平的分泌(ELISA法)和mRNA水平的表達(q-PCR法)。結果:(1)與對照組小鼠相比,LPS組小鼠的肺組織出現(xiàn)肺泡壁增厚、肺泡結構破壞以及炎癥細胞浸潤等病理改變,而且肺泡內(nèi)滲出的蛋白含量顯著增多,肺組織內(nèi)TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌量也顯著提高,說明本實驗中所制備的小鼠急性肺損傷模型是成功的;(2)在造模后6 h,與LPS組相比,IL-4治療組小鼠的一般狀況有所好轉,肺組織損傷評分明顯變小(P0.01),肺泡灌洗液中的總蛋白濃度顯著降低(P0.01),肺組織勻漿中的IL-1β、IL-6的分泌也明顯減少(P0.01),肺組織濕干重比和肺組織勻漿中tnf-α,Il-6,Il-1b mRNA相對表達量有所降低,但沒有顯著性差異;(3)在造模后48 h,與LPS組小鼠相比,IL-4組小鼠肺組織病理損傷評分,肺濕干重比、肺泡灌洗液中總蛋白以及TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌均有降低,但都沒有統(tǒng)計學意義。結論:(1)經(jīng)氣管滴注LPS可構建穩(wěn)定的ALI小鼠模型;(2)外源性IL-4對LPS誘導的小鼠ALI在致病6 h內(nèi)有顯著的治療作用,但隨著治病時間延長至48 h,治療效果減弱;(3)IL-4對LPS誘導的ALI的治療作用可能與它能抑制肺組織內(nèi)促炎因子IL-6、IL-1β的分泌有關。
【圖文】：

Control LPS IL-4圖 3- 1 致傷后 6 h和 48 h各組小鼠肺組織 HE染色（400x）3.3 肺組織病理損傷評分結果顯示：造模后 6 h：LPS 組小鼠的肺組織發(fā)生了非常顯著的彌漫性病理損傷，與對照組相比其損傷評分明顯升高； IL-4組小鼠較 LPS 組小鼠的肺組織損傷程度減輕，病理損傷評分明顯下降，且達到了統(tǒng)計學差異。造模后 48 h：與 LPS組比 IL-4 組小鼠肺組織病理損傷評分亦有降低，但未達到統(tǒng)計學差異。各組小鼠肺組織病理損傷評分見表 3.1和圖 3-2表 3. 1 致傷后 6 h和 48 h各組小鼠肺組織病理損傷評分Control LPS IL-4損傷評分（6 h） 1.50±1.23 5.90±1.52** 3.10±0.74*##損傷評分（48 h） 1.0±0 9.67±1.51** 9.00±1.67

圖 3- 2 致傷后 6 h和 48 h各組小鼠肺組織病理損傷評分A: 致傷后 6 h 取材 B：致傷后 48 h 取材**，p < 0.01，與對照組比； ##，p < 0.01，與 LPS 組比3.4 肺組織濕干重比肺組織濕干重比(W/D)是反應肺部液體滲出及水腫的主要指標，造模后 30min，對 IL-4 組小鼠和 LPS 組小鼠給予不同的處理措施，向前者氣管內(nèi)于注入IL-4 溶液，向后者氣管內(nèi)滴注 PBS。致傷后 6 h 和致傷后 48 h 取材，如下圖所示，致傷后 6h：相比于對照組，LPS 組小鼠的肺組織的 W/D 明顯增大，，給予 IL-4 干預后，急性肺損傷小鼠的肺組織 W/D 有一定程度的降低，但是沒有達到統(tǒng)計學差異；致傷后 48 h：相比于對照組，LPS 組小鼠的肺組織 W/D 升高， IL-4 組小鼠的肺濕干重比與 LPS 組相比較有所下降，但無統(tǒng)計學意義。各組小鼠肺的W/D 結果如表 3.2 和圖 3-3.
【學位授予單位】：軍事科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R563.8

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本文編號：2690204