【摘要】：研究背景:肝切除術(shù)后肝功能衰竭(posthepatectomy liver failure,PHLF)的死亡率較高,肝移植是目前唯一有效的治療方案,但是供體短缺、費(fèi)用高昂限制了其實(shí)施。因此尋找一種肝移植替代手段對(duì)治療患者PHLF至關(guān)重要。MSCs(Mesenchymal stem cells,MSCs)被證實(shí)在藥物誘導(dǎo)的肝衰竭中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能,并且能促進(jìn)肝臟再生,故而MSCs成為治療肝病的一種潛在方法。MSCs移植改善肝臟糖代謝,而研究表明糖代謝與組織再生關(guān)系緊密。肝臟糖代謝紊亂可以加重PHLF,影響肝臟再生。肝再生有效減輕PHLF,改善預(yù)后,提高生存率。其中GSK-3β主要影響糖原代謝,參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,并在胚胎發(fā)育,細(xì)胞分化中起重要作用,其下游β-catenin蛋白在肝臟再生修復(fù)中不可或缺,因此GSK-3β/β-catenin通路可能參與MSCs治療過程。因此本實(shí)驗(yàn)擬探索MSCs移植治療PHLF的具體作用及機(jī)制,以及是否通過GSK-3β/β-catenin通路影響肝臟代謝和再生。研究目的:分析MSCs移植治療90%肝切除大鼠中糖代謝與肝臟再生的變化及關(guān)系,明確MSCs促進(jìn)肝臟再生、減輕PHLF的具體機(jī)制。研究方法:從4-6周齡Sprague-Dawley大鼠中分離出MSCs并培養(yǎng),并對(duì)8-10周齡大鼠進(jìn)行90%肝切除術(shù)建立PHLF模型,使用MSCs治療90%肝切除術(shù)引起的PHLF。我們通過檢測(cè)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)、血氨、肝體重比、肝臟糖原染色、血糖和組織學(xué)檢測(cè),驗(yàn)證MSCs對(duì)PHLF的治療效果。通過對(duì)MSCs移植治療PHLF的治療機(jī)制進(jìn)行研究,分析了GSK-3β/β-catenin通路在治療后的變化,并使用A-674563(AKT抑制劑)和SB216763(GSK-3β抑制劑)來驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)論。采用SPSS version 19.0軟件對(duì)收集數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。研究結(jié)果:(1)MSCs移植有效改善90%肝切除術(shù)后大鼠肝酶指標(biāo)、降低標(biāo)準(zhǔn)化比值和血氨水平。(2)MSCs移植糾正90%肝切除術(shù)后大鼠糖代謝紊亂,并提高其生存率。(3)MSCs移植有效提高了肝細(xì)胞增殖能力,促進(jìn)肝臟再生修復(fù)。(4)MSCs通過調(diào)節(jié)AKT/GSK-3β/β-catenin通路變化促進(jìn)肝臟再生、改善肝臟糖代謝。結(jié)論:MSCs移植通過調(diào)控GSK-3β/β-catenin通路改善肝臟糖代謝、促進(jìn)肝臟再生,有效減輕PHLF。
【圖文】：

15圖 3.1 MSCs 移植對(duì)肝切除術(shù)后肝衰竭的保護(hù)作用（A）PH+PBS組合PH+MSCs組大鼠生存率比較；（B）PH+PBS組合PH+MSCs組大鼠ALT、AST、INR、血氨水平；（C）PH+PBS 組合 PH+MSCs 組大鼠 HE 染色情況。結(jié)果以 mean ±SD 表示，*表示 P < 0.05 vs PH+PBS 組。3.2 MSCs 移植增強(qiáng) PHLF 肝細(xì)胞增殖能力PHLF 是因?yàn)槭Ｓ喔闻K功能不足以滿足機(jī)體正常需求造成的，及時(shí)有效的肝臟再生對(duì)肝衰竭的預(yù)后改善至關(guān)重要，因此，本實(shí)驗(yàn)使用 Ki67 染色和 PCNA 染色分析肝細(xì)胞增殖情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MSCs 移植后 Ki67 和 PCNA 陽(yáng)性細(xì)胞核數(shù)目有明顯增多，表明肝細(xì)胞增殖增加顯著（圖 3.2A）。同時(shí)，通過統(tǒng)計(jì)肝臟和體重的比值分析肝臟再生情況，，結(jié)果與免疫組化相一致，經(jīng)過 MSCs 移植治療后12h 內(nèi)肝臟體重比沒有明顯增加，但是在 24h 之后尤其是 48h 肝臟體重比明顯上

16圖 3.2 MSCs 移植增強(qiáng)肝細(xì)胞增殖能力（A）兩組大鼠肝臟 PCNA、Ki67 免疫組化染色結(jié)果（上），陽(yáng)性細(xì)胞核占總細(xì)胞數(shù)量百分比值；（B）兩組大鼠肝臟體重比值。結(jié)果以 mean±SD 表示，*表示 P<0.05vsPH+PBS 組。3.3 MSCs 移植改善 PHLF 糖代謝肝臟是人體最重要的代謝器官，具有糖原合成及儲(chǔ)存的功能，在維持機(jī)體血糖穩(wěn)定方面發(fā)揮重要作用22, 23。統(tǒng)計(jì) 24h 內(nèi)肝切除術(shù)后大鼠血糖，90%肝切除術(shù)后大鼠會(huì)出現(xiàn)劇烈的低血糖，且術(shù)后 5h 就降至 1mmol/L 以下（圖 3.3A）。肝臟可以通過分解肝糖原維持血糖穩(wěn)定，使用 PAS 染色對(duì)肝臟糖原含量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過 MSCs 移植治療后，不但血糖得到一定程度的恢復(fù)，肝糖原儲(chǔ)備也有所
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R575.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 席兆華;;腹腔鏡肝切除術(shù)的研究進(jìn)展[J];柳州醫(yī)學(xué);2008年03期

2 洪海杰;陳燕凌;蔡欣然;陳江枝;蔣雷;陳敏敏;潘椺;李戈;;腹腔鏡肝切除術(shù)在肝血管平滑肌脂肪瘤中的應(yīng)用[J];中國(guó)微創(chuàng)外科雜志;2019年03期

3 徐杰安;;腹腔鏡肝切除術(shù)126例臨床分析[J];心血管外科雜志(電子版);2018年01期

4 王健;;規(guī)則肝切除術(shù)治療復(fù)雜肝內(nèi)膽管結(jié)石的臨床體會(huì)[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2016年36期

5 竇春青;孫麗媛;金鑫;韓明明;張寶;王大東;王有龍;李濤;;選擇性入肝血流阻斷在腹腔鏡肝切除術(shù)中的應(yīng)用[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

6 張子光;湯和林;;腹腔鏡肝切除術(shù)和開腹肝切除術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌的療效觀察[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2017年06期

7 郭新宇;馮留順;李捷;陳攀;王爽;周興虎;馮留順;;精準(zhǔn)肝切除術(shù)治療原發(fā)性肝癌120例療效分析[J];中華腫瘤防治雜志;2016年S2期

8 康杜甫;施紅寧;鄭永;;腹腔鏡肝切除術(shù)45例臨床療效分析[J];中外醫(yī)療;2017年07期

9 李慎玉;;腹腔鏡肝切除術(shù)、射頻消融術(shù)及開腹肝切除術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌的臨床療效比較[J];中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理;2017年07期

10 虞洪;;腹腔鏡肝切除術(shù)并發(fā)癥及防治[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2017年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 蔡柳新;方哲平;王愛東;張法標(biāo);杜學(xué)峰;陳斌;李劍鋒;;腹腔鏡肝切除術(shù)95例[A];2009年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 蔡柳新;方哲平;王愛東;張法標(biāo);杜學(xué)峰;陳斌;;腹腔鏡肝切除術(shù)33例報(bào)告[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

3 蔡柳新;方哲平;王愛東;張法標(biāo);杜學(xué)峰;陳斌;李劍鋒;;腹腔鏡肝切除術(shù)54例[A];2008年浙江省外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

4 郭占林;高旭東;邱能庸;;肝切除術(shù)時(shí)阻斷肝門血流對(duì)細(xì)菌移位的影響[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 蔡秀軍;王一帆;虞洪;梁霄;;腹腔鏡刮吸法肝切除術(shù)的經(jīng)驗(yàn)體會(huì)[A];2006年浙江省微創(chuàng)外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 方河清;李江濤;唐U

本文編號(hào)：2664209