發(fā)布時(shí)間：2020-05-14 05:12

【摘要】：目的:擬通過檢測(cè)分析局部聯(lián)合應(yīng)用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rhGM-CSF)和胰島素對(duì)糖尿病大鼠深I(lǐng)I度燙傷創(chuàng)面中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor-2,FGF-2)以及CD34表達(dá)的影響,初步探討局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素促進(jìn)糖尿病難愈性創(chuàng)面愈合的可能作用機(jī)制。方法:雄性SD大鼠100只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按照隨機(jī)數(shù)字表法將其分為正常對(duì)照組(A組,n=15)及糖尿病模型組(n=85),后者禁食不禁水12 h,單劑量腹腔快速注射1%STZ(55 mg/kg)制備I型糖尿病模型。糖尿病模型組大鼠血糖穩(wěn)定4周后,各組大鼠以2%戊巴比妥鈉麻醉,背部脫毛,次日同法麻醉后用自制燙傷裝置(保持致傷溫度100°C)制備2個(gè)直徑約2.5cm的圓形深I(lǐng)I度燙傷。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn),正常大鼠燙傷時(shí)間為10s,糖尿病大鼠燙傷時(shí)間為8s。從69只造模成功的糖尿病大鼠深I(lǐng)I度燙傷模型中按隨機(jī)數(shù)字表法選取60只并分為糖尿病對(duì)照組(B組)、胰島素用藥組(C組)、rhGM-CSF用藥組(D組)以及rhGM-CSF聯(lián)合胰島素用藥組(E組),每組各15只。根據(jù)分組情況分別予以相應(yīng)的創(chuàng)面處理,每日1次,連續(xù)21天。分別于燙傷后3、7、11、15、21 d測(cè)量各組創(chuàng)面面積,計(jì)算創(chuàng)面愈合率,取創(chuàng)面全層組織,采用HE染色及MASSON染色以觀察創(chuàng)面組織形態(tài)學(xué)情況,通過免疫組織化學(xué)染色以檢測(cè)創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2以及CD34的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)創(chuàng)面愈合率計(jì)算示:傷后7、11、15、21d,A、E組創(chuàng)面愈合率均高于其余各組,B組創(chuàng)面愈合率均低于其余各組,差異顯著(P0.05)。傷后第7 d,A組創(chuàng)面愈合率高于E組,其余時(shí)間點(diǎn)均低于E組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。傷后第11 d,D組創(chuàng)面愈合率高于C組,其余時(shí)間點(diǎn)均低于C組,但差異不顯著(P0.05)。(2)HE染色及Masson染色鏡下觀察示:B組大鼠創(chuàng)面炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)延遲且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),血管、膠原形成受阻,新生表皮薄弱且向創(chuàng)面中央爬行緩慢;且與A組大鼠相比較,其創(chuàng)面愈合時(shí)間延長(zhǎng),創(chuàng)面愈合率降低。而C、D組大鼠隨著時(shí)間的遷移,其創(chuàng)面組織中成纖維細(xì)胞及新生血管增多,新生膠原密度增加、分布均勻且排列規(guī)整,上皮爬行速度加快且新生表皮增厚,上述組織形態(tài)學(xué)變化尤以E組大鼠最為顯著。(3)免疫組織化學(xué)染色示:傷后3、7、11、15、21 d,A、E組TGF-β1表達(dá)均顯著高于其余各組,B組最低(P0.05),各組均于第15 d達(dá)到峰值。傷后第3 d,A組TGF-β1表達(dá)高于E組,其余時(shí)間點(diǎn)低于E組,但兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。傷后第3 d,C組TGF-β1表達(dá)高于D組,其余時(shí)間點(diǎn)低于D組,但兩組間差異不顯著(P0.05)。傷后3、7、11、15、21 d,A、E組FGF-2表達(dá)均顯著高于其余各組,B組最低(P0.05),各組均于第15 d達(dá)到峰值。傷后第7、11 d,E組FGF-2表達(dá)高于A組,其余時(shí)間點(diǎn)低于A組,但兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。傷后第11、15 d,D組FGF-2表達(dá)高于C組,其余時(shí)間點(diǎn)低于C組,但兩組間差異不顯著(P0.05)。傷后第3 d,A、C、D、E組CD34表達(dá)無差異性(P0.05),其余時(shí)間點(diǎn)A、E組CD34表達(dá)均高于其余各組,各時(shí)間點(diǎn)B組最低(P0.05),各組均于第21 d達(dá)到最高觀察值。傷后第3 d,A組FGF-2表達(dá)高于E組,其余時(shí)間點(diǎn)低于E組,但兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。傷后第11、21 d,D組FGF-2表達(dá)高于C組,其余時(shí)間點(diǎn)低于C組,但兩組間差異不顯著(P0.05)。結(jié)論:局部聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和胰島素可通過促進(jìn)糖尿病大鼠深I(lǐng)I度燙傷創(chuàng)面血管化、纖維化和上皮化,明顯促進(jìn)創(chuàng)面愈合,提高創(chuàng)面愈合的質(zhì)量,其機(jī)制可能與二者聯(lián)合上調(diào)創(chuàng)面中TGF-β1、FGF-2以及CD34的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖 2 各組大鼠傷后第 15d 創(chuàng)面 HE 染色（×200）FIG.2 HE staining of the wound of rats in each group at day 15 after scald atmagnification×2003.2 Masson 染色顯示：傷后第 3 d，各組大鼠創(chuàng)面組織中膠原斷裂，纖維纖細(xì)、稀疏，排列及其紊亂，尤以 B 組為甚。第 7 d，B 組膠原纖維仍較纖細(xì)、稀疏、紊亂；C、D 組膠原纖維較前致密，但仍紊亂；A、E 組膠原纖維相對(duì)粗大、致密、規(guī)整，但 A 組不及 E 組。11~ 15 d，各組膠原纖維逐漸增多并融合形成粗大的纖維束，排列也逐漸趨于均勻、規(guī)整，尤以E 組為甚，A 組次之，B 組最差（見圖 3）。第 21 d，各組創(chuàng)面真皮及真皮

圖 3 各組大鼠傷后第 15d 創(chuàng)面 Masson 染色（×200）FIG.3 Masson staining of the wound of rats in each group at day 15 after scald atmagnification×2004 免疫組織化學(xué)傷后 3，7，11，15，，21d，A、E 組 TGF-β1 表達(dá)均顯著高于其余各組，B 組最低（P < 0.05），各組均于第 15 d 達(dá)到峰值。傷后第 3 d，A 組TGF-β1 表達(dá)高于 E 組，其余時(shí)間點(diǎn)低于 E 組，但兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。傷后第 3 d，C 組 TGF-β1 表達(dá)高于 D 組，其余時(shí)間點(diǎn)低于 D 組，但兩組間差異不顯著（P > 0.05）。見表 2、圖 4。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R587.1;R644

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本文編號(hào)：2662848