【摘要】：目的:本研究主要探討肝X受體(Liver X Receptors,LXRs)對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞p65 NF-κB的影響,并進(jìn)一步探討其可能機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)我們采用RAW264.7細(xì)胞作為研究對(duì)象,以LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞為炎癥模型,觀察LXRs配體預(yù)處理巨噬細(xì)胞對(duì)p65 NF-κB表達(dá)和多聚泛素化水平的影響。用蛋白質(zhì)合成抑制劑亞胺環(huán)己酮(CHX)阻斷p65 NF-κB蛋白的合成,分析LXR配體是否影響p65 NF-κB蛋白的穩(wěn)定性。通過(guò)western blot和PCR技術(shù)觀察LXRs配體對(duì)SOCS1基因和蛋白的表達(dá)情況。然后通過(guò)采用siRNA干擾技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,沉默RAW264.7細(xì)胞內(nèi)SOCS1表達(dá)后,觀察LXRs配體對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中SOCS1、p65 NF-κB蛋白表達(dá)以及p65 NF-κB多聚泛素化水平的影響。結(jié)果:LXRs配體預(yù)處理能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中p65 NF-κB蛋白的表達(dá),并且也能顯著上調(diào)E3連接酶SOCS1mRNA和蛋白的表達(dá)。蛋白酶體抑制劑MG132阻斷泛素化途徑時(shí),T0901317能夠促進(jìn)p65 NF-κB的泛素化和泛素化降解。SOCS1siRNA轉(zhuǎn)染至RAW264.7細(xì)胞阻斷SOCS1的表達(dá),明顯抑制T0901317誘導(dǎo)的p65 NF-κB泛素化和泛素化降解。結(jié)論:LXRs配體預(yù)處理能夠明顯抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞p65 NF-κB蛋白表達(dá),這可能是LXRs通過(guò)SOCS1介導(dǎo)的泛素化途徑下調(diào)p65 NF-κB水平。
【圖文】：

T0901317 預(yù)處理不影響 p65 mRNA 的表達(dá)；Western blot 結(jié)果表明（圖 4.2），LPS 促進(jìn) p65 蛋白的表達(dá)，與 LPS 組相比，T0901317 預(yù)處理明顯抑制 LPS 誘導(dǎo)的 p65 表達(dá)。結(jié)果表明，T0901317 在轉(zhuǎn)錄后水平影響 p65 蛋白的表達(dá)。

圖 4.2 不同因素處理 RAW264.7 小鼠巨噬細(xì)胞 p65 NF-κB 蛋白的表達(dá)水平*p<0.054.2 觀察 T0901317 對(duì) RAW264.7 細(xì)胞 p65 NF-κB 蛋白穩(wěn)定性的影響接下來(lái)分析 LXRs 是否影響 p65 NF-κB 蛋白的穩(wěn)定性，采用蛋白質(zhì)合成抑制劑亞胺環(huán)己酮(CHX)阻斷 p65 NF-κB 蛋白的合成。將 LXRs 配體預(yù)處理RAW264.7 小鼠巨噬細(xì)胞 12 h，然后用 50μg/ml 的亞胺環(huán)己酮(CHX)處理 0，2，4 和 8h，Western blot 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) p65 NF-κB 蛋白表達(dá)，通過(guò)計(jì)算細(xì)胞內(nèi)殘余p65 NF-κB 量，半定量分析其穩(wěn)定性。結(jié)果表明（圖 4.3），LPS 組在 CHX 處理2，，4 和 8 小時(shí)后，p65 蛋白表達(dá)有所減少；與 LPS 組相比，T0901317 組在 CHX處理 2，4 和 8 小時(shí)后，p65 蛋白表達(dá)明顯減少。結(jié)果表明，T0901317 預(yù)處理能
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 許衍碩;梁艷冰;唐皓;陳志斌;馬中富;;外周血單核細(xì)胞SOCS-1表達(dá)與MODS患者預(yù)后關(guān)系的研究[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

本文編號(hào)：2661187