【摘要】：目的探討低氧誘導(dǎo)因子-1 (HIF-1α)對(duì)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響及作用機(jī)制。方法構(gòu)建HIF-1α干擾及過(guò)表達(dá)載體,應(yīng)用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染原代大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,濃度為200μg/ml遺傳霉素(G418)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)和Western blot檢測(cè)HIF-1α、內(nèi)皮素-1(ET-1)、內(nèi)皮素受體A(ETA)、內(nèi)皮素受體B(ETB)和閉鎖小帶(ZO-1)的表達(dá);應(yīng)用ET-1信號(hào)通路抑制劑BQ123及BQ788預(yù)處理HIF-1α過(guò)表達(dá)細(xì)胞株1 h,RT-PCR和Western blot檢測(cè)HIF-1α、ET-1、ETA、ETB和ZO-1的表達(dá),細(xì)胞膜通透性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)單層內(nèi)皮細(xì)胞膜通透系數(shù)變化。結(jié)果與轉(zhuǎn)染短發(fā)夾RNA-陰性對(duì)照組(shRNA-NC組)相比,轉(zhuǎn)染shRNA-Ⅱ組HIF-1α、ET-1、ETA、ETB mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.01),ZO-1的表達(dá)則明顯升高(P0.01)。與轉(zhuǎn)染GV230組比較,穩(wěn)轉(zhuǎn)GV230/HIF-1α組HIF-1α、ET-1、ETA、ETB mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P0.01),ZO-1的表達(dá)則明顯降低(P0.01);同時(shí)細(xì)胞膜通透性系數(shù)亦明顯升高(P0.01);應(yīng)用BQ123和BQ788處理能夠抑制HIF-1α誘導(dǎo)的ETA和ETB表達(dá)、增強(qiáng)ZO-1的表達(dá),同時(shí)細(xì)胞膜通透性系數(shù)明顯降低(P0.01)。結(jié)論 HIF-1α可通過(guò)上調(diào)ET-1的表達(dá)進(jìn)而增加大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的通透性,HIF-1α/ET-1信號(hào)軸在調(diào)控?zé)齻笫笱芡ㄍ感苑矫婢哂兄匾饔谩?br>【圖文】：

圖1轉(zhuǎn)染不同shＲNA對(duì)HIF-1α表達(dá)的影響1:轉(zhuǎn)染shＲNA-NC組;2:轉(zhuǎn)染shＲNA-Ⅰ組;3:轉(zhuǎn)染shＲNA-Ⅱ組;4:轉(zhuǎn)染shＲNA-Ⅲ組;與shＲNA-NC組比較:＊＊P＜0.01P＜0.001)、ETA(T=11.27，P=0.004)和ETB(T=23.19，P=0.001)mＲNA和蛋白表達(dá)均明顯降低，而ZO-1(T=12.46，P=0.002)則顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)圖2A、2B。與轉(zhuǎn)染GV230組比較，穩(wěn)轉(zhuǎn)GV230/HIF-1α組HIF-1α(T=13.23，P=0.002)、ET-1(T=14.86，P=0.001)、ETA(T=14.86，P=0.001)和ETB(T=27.29，P=0.001)mＲNA和蛋白表達(dá)顯著升高，而ZO-1(T=16.17，P＜0.001)則顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)圖2C、2D。2．3HIF-1α過(guò)表達(dá)對(duì)大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性系數(shù)的影響分別檢測(cè)GV230組和GV230/HIF-1α組樣品的熒光強(qiáng)度值(OD488nm)，并將GV230組細(xì)胞通透系數(shù)均一化為100%，計(jì)算GV230/HIF-1α組單層內(nèi)皮細(xì)胞膜通透性系數(shù)。結(jié)果顯示，與GV230組比，GV230/HIF-1α(T=6.765，P＜0.001)組細(xì)胞通透性系數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)圖3。2．4阻斷HIF-1α/ET-1信號(hào)通路對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)和細(xì)胞通透性的影響聯(lián)合應(yīng)用濃度分別為10nmol/L的BQ123和1nmol/L的BQ788預(yù)處理穩(wěn)轉(zhuǎn)GV230/HIF-1α大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞1h，ＲT-PCＲ和Westernblot分別檢測(cè)HIF-1α、ET-1、ETA、ETB和ZO-1mＲNA和蛋白表達(dá)。同時(shí)，熒光分光光度計(jì)檢測(cè)各組熒光度值。結(jié)果顯示，BQ123和BQ788能夠抑制HIF-1α誘?

圖3HIF-1α過(guò)表達(dá)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞通透性系數(shù)的影響與GV230組比較:＊＊P＜0.01圖4阻斷HIF-1α/ET-1信號(hào)通路對(duì)相關(guān)蛋白的mＲNA及蛋白質(zhì)表達(dá)影響A:阻斷HIF-1α/ET-1信號(hào)通路相關(guān)mＲNA表達(dá);B:阻斷HIF-1α/ET-1信號(hào)通路相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá);1:GV230/HIF-1α組;2:GV230/HIF-1α+BQ123/BQ788組;與GV230/HIF-1α組比較:＊＊P＜0.01圖5阻斷HIF-1α/ET-1信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞膜通透性影響與GV230/HIF-1α組比較:＊＊P＜0.013討論細(xì)胞通透性改變是炎性反應(yīng)、組織缺氧以及細(xì)胞代謝障礙等多種疾病的重要病理過(guò)程。燒傷早期血管通透性改變受多種因素調(diào)節(jié)，而內(nèi)皮細(xì)胞損傷占有重要地位［1］，內(nèi)皮細(xì)胞在組織和血管中起生理屏障作用［2－3］，這道屏障允許小分子物質(zhì)通過(guò)，禁止大分子物質(zhì)通過(guò);而大分子物質(zhì)通過(guò)細(xì)胞鏈接、細(xì)胞上的窗孔和跨細(xì)胞途徑跨越細(xì)胞通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞屏障到達(dá)組織中，大量血漿樣液體及高分子物質(zhì)從血管內(nèi)滲出血管外，引起血容量驟減造成休克發(fā)生和發(fā)展。而機(jī)體缺氧更使血管通透性增加，這樣反復(fù)形成惡性循環(huán)［4］。燒傷早期血管活性物質(zhì)及炎性介質(zhì)釋放改變了血管結(jié)構(gòu)，從而改變血管通透性［5］。但是至目前為止，燒傷早期血管通透性改變發(fā)生的具體機(jī)制仍不明確［6］，，因而臨床更無(wú)有效的預(yù)防治療手段來(lái)降低血管通透性。HIF-1α是一種異源二聚體轉(zhuǎn)錄因子并廣泛分布于人體內(nèi)，它由120ku的HIF-1α和91～94ku的HIF-1β兩個(gè)亞單位組成［7］。正常情況下，機(jī)體合成的HIF-1蛋白很快失去活性，HIF-1蛋白只有在機(jī)體缺氧條件下才能具有活性。其中α亞基決定

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 唐富波;白曉東;胡森;;燒傷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障的影響及其保護(hù)藥物的研究進(jìn)展[J];感染、炎癥、修復(fù);2015年04期

2 張曉軍;劉健;萬(wàn)磊;孫s

本文編號(hào)：2624116