背景：膿毒癥早期起關(guān)鍵作用的是細(xì)胞因子。由于TNF-α和IL-1p等為早期一過性釋放的致炎因子,因此針對TNF-α或者IL-1p等致炎介質(zhì)的治療窗口期非常短暫,并且對于炎癥晚期所出現(xiàn)的膿毒癥也顯得無能為力。新發(fā)現(xiàn)的晚期炎癥介質(zhì)HMGB1,其促炎功能和動力學(xué)特點,使得它比一些早期炎癥介質(zhì)更具有潛在臨床應(yīng)用價值。目前很多研究者嘗試采用各種措施來拮抗晚期炎癥介質(zhì)HMGB1的表達(dá)與釋放,并取得了值得肯定的效果。因此我們嘗試使用主動免疫的方法,探究主動免疫是否對膿毒癥有預(yù)防效應(yīng)。方法：通過分子生物學(xué)方法構(gòu)建人HMGB1原核表達(dá)載體,并使用乳糖誘導(dǎo)表達(dá)得到重組人HMGB1蛋白；使用重組HMGB1對小鼠進(jìn)行免疫；間接ELISA方法檢測小鼠抗血清效價,并使用效價穩(wěn)定后的小鼠血清為一抗進(jìn)行Western blot檢測；CLP模型檢測免疫小鼠對膿毒癥的預(yù)防效應(yīng)；HE染色確定小鼠器官病理學(xué)變化；ELISA檢測小鼠血漿中MGB1的含量。結(jié)果：構(gòu)建得到帶有His標(biāo)簽的HMGB1原核表達(dá)載體(pET28a-His-HMGBl);經(jīng)乳糖誘導(dǎo)表達(dá)得到較純的可溶重組人HMGB1蛋白；間接ELISA和Western blot檢測共同確定小鼠經(jīng)免疫后抗血清效價達(dá)到穩(wěn)定；CLP模型檢測發(fā)現(xiàn),免疫組小鼠存活率顯著提高,組織器官得到有效保護(hù),且血漿中HMGB1含量較未免疫組小鼠有顯著下降。結(jié)論：重組人HMGB1蛋白免疫后對小鼠膿毒癥有預(yù)防效應(yīng),這為進(jìn)一步探究主動免疫預(yù)防膿毒癥奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R459.7

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本文編號：2477349