本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎肝衰竭發(fā)生機(jī)制中的三重打擊，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《吉林大學(xué)》 2011年

天然免疫和獲得性免疫等因素在慢性HBV感染中的作用研究

李婉玉  

【摘要】：乙型肝炎病毒的感染是全球性的公共衛(wèi)生問題。全球大約有20億人曾經(jīng)感染過乙型肝炎病毒(HBV)。HBV通�？梢蕴颖茉缙诤屯砥诿庖邞�(yīng)答導(dǎo)致慢性肝臟疾病——慢性乙型肝炎、乙肝后肝硬化、肝衰竭、肝癌。目前國內(nèi)外研究證明HBV感染的結(jié)局與病毒、肝臟微環(huán)境以及宿主抗病毒的免疫應(yīng)答有關(guān)。其中免疫機(jī)制在這個過程中最重要,涉及到天然免疫、獲得性免疫(細(xì)胞免疫及體液免疫)等諸多方面。研究證明,在HBV的清除過程中,細(xì)胞免疫起著重要作用,但其所引發(fā)的免疫應(yīng)答也成為肝損傷的發(fā)病機(jī)制。免疫過激反應(yīng)雖早期可以清除病毒,但同時也造成了肝細(xì)胞的大量壞死,出現(xiàn)急性重癥肝炎,甚至導(dǎo)致死亡。近年越來越多的證據(jù)表明天然免疫系統(tǒng)在HBV感染的結(jié)局以及疾病發(fā)病機(jī)制過程中發(fā)揮著重要作用。其中作為天然免疫主要組成的NK細(xì)胞在HBV感染初始階段以及在慢性感染過程中是否導(dǎo)致肝臟損傷或是清除病毒,目前尚不明確。大量研究表明作為免疫調(diào)節(jié)介質(zhì)的細(xì)胞因子在HBV感染過程中可以抑制病毒復(fù)制亦可導(dǎo)致肝臟損傷。基于免疫系統(tǒng)的復(fù)雜性以及HBV疾病譜多樣性,目前關(guān)于HBV感染的免疫學(xué)研究尚不明確。 因此本研究采用流式細(xì)胞技術(shù)和焦磷酸測序等技術(shù)： (1)檢測慢性HBV感染者NK細(xì)胞數(shù)量、活化性和抑制性受體以及細(xì)胞因子分泌和殺傷功能,并與臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析,對改變明顯的受體進(jìn)行體外阻斷功能研究； (2)在慢性HBV感染者、HBV感染后自發(fā)清除者、健康對照者中對IL-28B上游的rs12979860、rs12980275和下游8KB的rs8099917進(jìn)行測序；應(yīng)用ELISA法測不同研究組間血清IL-28B水平； (3)對乙肝和丙肝后肝硬化患者外周血中CD8+T、CD4+T、Treg細(xì)胞進(jìn)行鑒定和分析；同時應(yīng)用微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)(CBA)體外檢測Thl、Th2等相關(guān)細(xì)胞因子濃度,并且就其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： (1)不同慢性HBV感染者NK細(xì)胞數(shù)、CD3-CD56highNK、CD3-CD56lowNK細(xì)胞的比例以及IFN-y分泌無明顯差別。 (2)活化性受體NKP46在非活動性HBsAg攜帶者高于慢性HBV攜帶者、HBeAg+CHB及健康人。抑制性受體CD158a在慢性HBV攜帶者高于非活動性HBsAg攜帶者、HBeAg+CHB。 (3)免疫活化期NK細(xì)胞殺傷標(biāo)志CD107a表達(dá)顯著高于免疫耐受期；體外阻斷NKP46后發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞對靶細(xì)胞(K562)及肝癌細(xì)胞系(HepG2、HepG2.215)殺傷能力降低。 (4)IL-28B三個位點(diǎn)的等位基因與基因型頻率均與病毒載量及ALT有關(guān)。 (5)慢性HBV感染組血清IL-28B水平比自限感染組和健康組明顯低。而且血清IL-28B水平與IL-28B基因型有關(guān)。 (6)肝硬化患者免疫細(xì)胞亞群與正常對照存在顯著差別。肝硬化患者CD3+CD8+T細(xì)胞顯著下降,CD3+CD4+T、Treg和CD4/CD8顯著升高,而乙肝后和丙肝后肝硬化患者之間無差異。 (7)Th2細(xì)胞因子(IL-6)在肝硬化患者中顯著升高,而Th1細(xì)胞因子(IFN-γ)只有在乙肝后肝硬化患者中升高。IFN-γ/IL-6在肝硬化組顯著高于健康對照組。 綜上所述,從我們的研究中可以看出慢性HBV感染者存在廣泛的免疫異常包括天然免疫(NK細(xì)胞)、獲得性免疫(T細(xì)胞、Treg)以及細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-6、IL-28B),作為復(fù)雜的多基因疾病HBV感染可能非單一因素引起,而為免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子綜合作用的結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62
【目錄】：

前言4-5

中文摘要5-7

Abstract7-13

第1篇 緒論13-39

第1章 HBV感染的天然免疫和獲得性免疫學(xué)研究進(jìn)展13-33

1.1 病毒因素13-19

1.2 宿主免疫因素19-33

第2章 HBV感染與細(xì)胞因子33-39

2.1 細(xì)胞因子分類33

2.2 細(xì)胞因子在乙型肝炎中的研究33-39

第2篇 實(shí)驗(yàn)研究39-90

第1章 NK細(xì)胞在慢性HBV感染中的研究39-64

第1節(jié) 材料和方法41-50

1 資料和儀器41-42

2 主要試劑及溶液42-44

3 主要儀器44

4 方法44-50

第2節(jié) 結(jié)果50-61

1 研究對象的一般信息和臨床特點(diǎn)50

2 外周血NK細(xì)胞亞群及表型的變化50-55

3 外周血NK細(xì)胞分泌IFN-γ的能力55-56

4 外周血NK細(xì)胞CD107a的表達(dá)56-58

5 體外阻斷NKP46識別后NK細(xì)胞對K562的殺傷能力58-59

6 體外阻斷NKP46識別NK細(xì)胞對肝細(xì)胞系HepG2和HepG2.215的殺傷能力59-61

第3節(jié) 討論61-64

第2章 IL-28B基因多態(tài)性與中國HBV感染的相關(guān)性64-78

第1節(jié) 材料和方法65-71

1 資料和儀器65-66

2 主要試劑及溶液66

3 主要儀器66-67

4 實(shí)驗(yàn)方法67-71

第2節(jié) 結(jié)果71-76

1 研究對象的一般信息和臨床特點(diǎn)71

2 IL28B位點(diǎn)的變異71-73

3 IL-28B位點(diǎn)變異與慢性HBV感染者臨床參數(shù)的相關(guān)性研究73-74

4 不同研究組間IL-28B變異位點(diǎn)基因型和等位基因頻率74

5 不同研究組間血清IL-28B水平74-76

第3節(jié) 討論76-78

第3章 乙肝及丙肝后肝硬化患者外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)和細(xì)胞因子的變化78-90

第1節(jié) 材料和方法79-84

1 資料和儀器79-80

2 主要試劑及溶液80-81

3 主要儀器81

4 方法81-84

第2節(jié) 結(jié)果84-88

1 研究對象的一般信息和臨床特點(diǎn)84

2 外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)的變化84-86

3 外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)和臨床指標(biāo)的相關(guān)性86-87

4 Th1和Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生87

5 細(xì)胞因子水平與臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性87-88

第3節(jié) 討論88-90

第3篇 結(jié)論90-91

本研究的創(chuàng)新點(diǎn)和意義91-92

參考文獻(xiàn)92-106

作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果106-108

作者簡介106

攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文106-108

致謝108

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【引證文獻(xiàn)】

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相關(guān)機(jī)構(gòu)

>吉林大學(xué)

>昆明醫(yī)學(xué)院

>北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院

>天津醫(yī)科大學(xué)

相關(guān)作者

>楊浦娟 >程敏

>王眭 >米寅

>李婉玉 >焦曉磊

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本文編號：234906