本文選題：hAMSCs　切入點(diǎn)：IL-10　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過對小鼠皮膚創(chuàng)面組織炎性因子IL-10、TNF-α、IL-6含量變化的檢測,探討IL-10基因修飾的hAMSCs(IL-10-hAMSCs)局部注射移植于小鼠皮膚全層缺損模型后炎癥調(diào)節(jié)的能力及臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用價值。方法:采用含小鼠IL-10基因的慢病毒載體LV5-IL-10及空質(zhì)粒載體LV5分別轉(zhuǎn)染hAMSCs,72 h后采用ELISA法分別檢測上述2種轉(zhuǎn)染細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染hAMSCs細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中IL-10的含量。采用40只8周齡C57BL/6小鼠制備全層皮膚缺損模型,隨機(jī)分為空白組(不制模且不作任何干預(yù)的正常小鼠)、PBS移植組(模型組)、hAMSCs移植組(hAMSCs組)、IL-10-hAMSCs移植組(IL-10-hAMSCs組)、空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的hAMSCs移植組(空質(zhì)粒-hAMSCs組),每組8只。模型制備采用背部中線2側(cè)各剪取1cm×1cm大小皮膚全層創(chuàng)面的方式進(jìn)行,隨即根據(jù)分組不同,于每個創(chuàng)面各邊中點(diǎn)距創(chuàng)緣1mm處注射總量100μL PBS懸浮的各組細(xì)胞(細(xì)胞數(shù)為1×106個),模型組注射等量的PBS。分別于移植后1、3、7、14 d收集創(chuàng)面組織樣本,并分別采用組織HE染色觀察組織炎癥細(xì)胞浸潤情況;ELISA檢測IL-10、TNF-α、IL-6因子的含量;實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Q-PCR)檢測IL-10、TNF-α、IL-6因子的mRNA相對含量變化情況。實驗同時采用CM-Dil標(biāo)記hAMSCs移植,連同IL-10-hAMSCs移植和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的hAMSCs移植,分別對不同組別的移植細(xì)胞的體內(nèi)定植、存活情況進(jìn)行示蹤分析。結(jié)果:IL-10慢病毒及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的hAMSCs72h后于倒置顯微鏡下觀察可見視野中均高表達(dá)綠色熒光,表明感染后轉(zhuǎn)染率高,ELISA法檢測培養(yǎng)基、hAMSCs、IL-10-hAMSCs、空質(zhì)粒-hAMSCs第72h細(xì)胞上清液,結(jié)果顯示hAMSCs、IL-10-hAMSCs、空質(zhì)粒-hAMSCs組均有分泌IL-10,IL-10-hAMSCs較hAMSCs組與空質(zhì)粒-hamscs組分泌多,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。he結(jié)果顯示:在顯微鏡下觀察正常小鼠皮膚組織可見上皮完整,無炎性細(xì)胞,伴有毛囊且膠原排列有序呈網(wǎng)狀;1d時觀察模型組、hamscs組、空質(zhì)粒-hamscs組、il-10-hamscs組創(chuàng)面創(chuàng)緣均可見大量炎性細(xì)胞集中浸潤,模型組炎癥反應(yīng)最重,壞死組織最多,其次為hamscs組和空質(zhì)粒-hamscs組,il-10-hamscs組炎癥反應(yīng)程度最輕,壞死組織最少。3d時觀察模型組、hamscs組、空質(zhì)粒-hamscs組、il-10-hamscs組創(chuàng)面創(chuàng)緣均可見大量炎性細(xì)胞彌散浸潤,對各組進(jìn)行炎性細(xì)胞計數(shù)可知,模型組炎性細(xì)胞浸潤最多,il-10-hamscs組炎性細(xì)胞浸潤最少,相對其他三組炎性細(xì)胞計數(shù)具有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05);7d時各組炎性細(xì)胞均有所減少,模型組炎性細(xì)胞浸潤最多,il-10-hamscs組炎性細(xì)胞浸潤最少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);14d時hamscs組、空質(zhì)粒-10-hamscs組及il-10-hamscs組未見明顯炎性細(xì)胞浸潤,模型組仍有少量炎性細(xì)胞浸潤,差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。elisa法和qpcr檢測小鼠背部創(chuàng)面及創(chuàng)緣組織結(jié)果顯示il-10含量及mrna相對表達(dá)量:結(jié)果可見空白組正常小鼠皮膚組織il-10極低,1d、3d模型組、hamscs組、空質(zhì)粒-hamscs組、il-10-hamscs組含量逐漸增高,3d達(dá)到峰值后逐漸下降;1d、3d、7d、14d,il-10-hamscs組il-10含量及mrna相對表達(dá)量均高于其他組,差異具有統(tǒng)計學(xué)有意義(p0.05),結(jié)果提示:il-10-hamscs可以上調(diào)il-10的表達(dá);tnf-α含量及mrna相對表達(dá)量:1d、3d模型組、hamscs組、空質(zhì)粒-hamscs組、il-10-hamscs組含量逐漸增高,3d達(dá)到峰值后逐漸下降;1d、3d、7d、14d,模型組tnf-α含量及mrna相對表達(dá)量均高于其他幾組,與其他組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),il-10-hamscs組tnf-α含量及mrna相對表達(dá)量均低于其他幾組,比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。il-6含量及mrna相對表達(dá)量:1d、3d、7d、14d,模型組il-6含量及mrna相對表達(dá)量均高于其他組,比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),而il-10-hamscs組il-6含量及mrna相對表達(dá)量在各時相點(diǎn)均低于其他組,比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。結(jié)果表明il-10-hamscs可下調(diào)tnf-α及il-6的表達(dá)。以上細(xì)胞因子的表達(dá)規(guī)律及形式均與he染色病理結(jié)果基本相呼應(yīng)。于移植14天后,熒光示蹤顯示未轉(zhuǎn)染的hamscs、il-10轉(zhuǎn)染的hamscs及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的hamscs仍然存活。結(jié)論:1.IL-10-hAMSCs體外培養(yǎng)能夠高表達(dá)和分泌IL-10。2.創(chuàng)面局部移植IL-10-hAMSCs能夠通過上調(diào)IL-10含量的表達(dá)及下調(diào)TNF-α及IL-6含量的表達(dá),減輕創(chuàng)面炎癥反應(yīng)程度,有可能對創(chuàng)面的再生愈合具有促進(jìn)作用
[Abstract]:Objective : To investigate the changes of IL - 10 , TNF - 偽 and IL - 6 in mouse skin wound , and to investigate the effects of IL - 10 gene modified hAMSCs on the changes of IL - 10 , IL - 10 , TNF - 偽 and IL - 6 . IL - 10 - hamstrings group and il - 10 - hamlet group showed significant difference in inflammatory cell infiltration ( p < 0.05 ) . The results suggested that IL - 10 - hamstrings group had minimal inflammatory cell infiltration , and the contents of il - 10 - hamstrings group were significantly higher than those in other groups . The results showed that IL - 10 - hAMSCs could downregulate the expression of IL - 10 and IL - 6 , and reduce the expression of IL - 6 and IL - 6 . Conclusion : IL - 10 - hAMSCs can downregulate the expression of IL - 10 and the expression of IL - 6 .

【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R641

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本文編號：1672758