本文關(guān)鍵詞：磷脂酰肌醇3激酶信號(hào)通路在天麻素抑制脂多糖誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的保護(hù)性機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《昆明醫(yī)科大學(xué)》 2013年

磷脂酰肌醇3激酶信號(hào)通路在天麻素抑制脂多糖誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的保護(hù)性機(jī)制研究

楊萍  

【摘要】：[目的]通過構(gòu)建脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞為炎癥模型,從細(xì)胞和分子層面探討天麻素對(duì)H9c2心肌細(xì)胞炎癥的抑制作用及其信號(hào)機(jī)制。 [方法]體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、LPS (1μg/ml,30min-12h)處理組、不同濃度的天麻素(5、10和20μM,1h)+LPS處理組、不同濃度的天麻素+LPS+wortmannin (1μM)共同處理組和陽性對(duì)照組。采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)檢測天麻素、LPS以及wortmannin對(duì)H9C2心肌細(xì)胞的活力影響；采用免疫熒光雙標(biāo)記檢測方法(double-immunofluorescence labeling assay)在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)蛋白水平的變化；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的mRNA水平的變化；采用蛋白質(zhì)印跡分析方法(western blotting)檢測蛋白激酶B (protein kinase B, Akt)、抑制劑κB (inhibitor κB,IκB)、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)家族的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2, ERK1/2)、 c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinases, JNK)和p38促分裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinases, p38MAPK)等細(xì)胞信號(hào)通路蛋白的表達(dá)及其變化規(guī)律：采用凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)檢測核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表達(dá)水平。 [結(jié)果]H9c2心肌細(xì)胞以1×106個(gè)/ml濃度接種于6孔板中,當(dāng)密度均勻生長至80%時(shí),使用MTT檢測H9c2心肌細(xì)胞活力影響,結(jié)果顯示：經(jīng)天麻素(5、10和20μM)、 LPS (1μg/ml)和wortmannin (1μM)分別處理或共同處理12h后該細(xì)胞活性均無明顯影響；加入P13-K抑制劑wortmannin (1μM)1h后,再加入天麻素和LPS處理細(xì)胞30min-3h,采用免疫熒光雙標(biāo)記檢測方法、RT-PCR、 EMSA以及western blotting分析,得到結(jié)果：①不同濃度的天麻素明顯激活H9c2心肌細(xì)胞PI3-K/Akt的磷酸化表達(dá)；②不同濃度的天麻素通過PI3-K/Akt信號(hào)通路在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平明顯抑制LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞促炎性蛋白酶iNOS和COX-2的表達(dá)；③不同濃度的天麻素激活PI3-K/Akt信號(hào)通路下調(diào)LPS誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞促炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-6在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)；④天麻素通過PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞NF-κB的激活；⑤天麻素激活PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞IκB、 ERK1/2、 JNK和p38MAPK的磷酸化。 [結(jié)論]①5-20gM的天麻素、1μg/ml的LPS和1μM wortmannin的對(duì)細(xì)胞活性沒有影響；②天麻素通過PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制MAPKs的磷酸化來調(diào)控LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)促炎性蛋白酶以及促炎性細(xì)胞因子的釋放;③天麻素激活PI3-K/Akt信號(hào)通路抑制IκB的磷酸化和NF-κB的活化,從而發(fā)揮天麻素下調(diào)LPS誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的抗炎作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

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【共引文獻(xiàn)】

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