本文選題：膿毒癥　切入點(diǎn)：組蛋白甲基化修飾　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：膿毒癥是感染因素引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征,如得不到及時(shí)控制,可引起多個(gè)臟器功能障礙。膿毒癥的發(fā)生率高,且逐年上升,已經(jīng)成為導(dǎo)致危重患者死亡的主要原因。膿毒癥的發(fā)病涉及白細(xì)胞為主的多種炎癥細(xì)胞所致的過度炎癥反應(yīng),但具體調(diào)控機(jī)制未明。組蛋白甲基化是重要的表觀遺傳修飾方式,參與基因表達(dá)調(diào)控等重要的細(xì)胞功能,與胚胎發(fā)育與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。一般情況下,組蛋白H3第4位賴氨酸(H3K4)、H3K36和H3K79的甲基化調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄激活,而H3K9、H3K27與H4K20的甲基化則調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄抑制。新近細(xì)胞學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：組蛋白H3K4、H3K9、H3K27的甲基化與炎癥／感染也密切相關(guān)。為了探索這些組蛋白甲基化修飾在臨床患者膿毒癥進(jìn)程中的作用,我們抽取患者的外周血,分離獲取白細(xì)胞；首先建立并優(yōu)化外周血白細(xì)胞免疫熒光染色方法,從而能夠觀察不同白細(xì)胞中組蛋白甲基化水平。然后分別選擇創(chuàng)傷與食管癌術(shù)后患者為研究對(duì)象,分析膿毒癥對(duì)兩類患者外周血不同白細(xì)胞中組蛋白甲基化修飾的影響,以期獲得組蛋白甲基化參與調(diào)控膿毒癥的臨床證據(jù),為臨床患者尋找早期預(yù)測(cè)與判斷炎癥／感染進(jìn)程的表觀遺傳學(xué)新指標(biāo)。 本研究包括兩部分內(nèi)容： 第一部分：人外周血白細(xì)胞免疫熒光染色方法的建立與優(yōu)化。外周血細(xì)胞中白細(xì)胞數(shù)量最少,其中包括中性粒細(xì)胞(Neu)、淋巴細(xì)胞(Lym)、單核細(xì)胞(Mon)等多種含量各異的白細(xì)胞,參與機(jī)體抗感染、炎癥以及免疫反應(yīng)等重要功能。體外白細(xì)胞生存期短,又呈懸浮狀態(tài)存在而難于固定,因而極大限制了各種特異性抗體依賴的免疫檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用。針對(duì)這個(gè)難點(diǎn)問題,我們通過采血后盡早快速分離白細(xì)胞,摸索最佳的白細(xì)胞凍存與復(fù)蘇條件,以獲得盡可能多的存活白細(xì)胞；再通過懸浮液與固定玻片的選擇,觀察比較懸浮法、血涂片法以及滴片法處理白細(xì)胞,對(duì)最終免疫熒光染色效果的影響,尋找最佳的白細(xì)胞固定條件,建立和優(yōu)化外周血白細(xì)胞的免疫熒光染色技術(shù)。 第二部分：膿毒癥患者外周血白細(xì)胞組蛋白甲基化修飾的研究。我們分別選擇創(chuàng)傷與食管癌術(shù)后患者為研究對(duì)象,用已經(jīng)建立優(yōu)化的外周血白細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù),以共染色293T細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為基準(zhǔn),對(duì)Neu、Lym及Mon三種白細(xì)胞中組蛋白甲基化修飾的染色進(jìn)行相對(duì)定量分析。初步結(jié)果表明：雖然膿毒癥可使創(chuàng)傷患者外周血三種白細(xì)胞中H3K9二甲基化修飾均升高,但與單純創(chuàng)傷患者相比差異并無(wú)顯著性；而并發(fā)膿毒癥卻可使食管癌術(shù)后患者三種白細(xì)胞中已經(jīng)升高的H3K9二甲基化水平降低�？梢�,膿毒癥對(duì)于創(chuàng)傷與食管癌術(shù)后患者的影響不同,這可能與腫瘤患者已經(jīng)存在的組蛋白甲基化修飾異常有關(guān),提示對(duì)于不同基礎(chǔ)疾病的患者,感染／炎癥反應(yīng)進(jìn)程相關(guān)的組蛋白甲基化修飾存在不同的變化趨勢(shì)；通過外周血白細(xì)胞中多種組蛋白甲基化修飾的免疫熒光分析,有望構(gòu)建不同膿毒癥患者白細(xì)胞特征性組蛋白甲基化修飾譜,為膿毒癥個(gè)性化診斷與治療探尋新靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Anjana Munshi;Gowhar Shafi;Nishat Aliya;Akka Jyothy;;Histone modifications dictate specific biological readouts[J];遺傳學(xué)報(bào);2009年02期

2 ;炎癥(1)[J];醫(yī)學(xué)綜述;2005年01期

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本文編號(hào)：1603769