本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞　切入點(diǎn)：燒傷　出處：《吉林大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：在我國(guó)，燒傷年發(fā)病率約達(dá)人群的2％左右，嚴(yán)重?zé)齻踔量晌＜吧�，一直為社�?huì)和醫(yī)學(xué)界所重視。嚴(yán)重?zé)齻l(fā)生后，機(jī)體的腸道屏障遭到嚴(yán)重破壞，腸道細(xì)菌移位，，導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥的發(fā)生，如果治療不及時(shí)，進(jìn)一步可引發(fā)全身多器官功能的損傷。隨著對(duì)燒傷認(rèn)識(shí)水平的提高，因休克死亡的患者明顯減少，多器官功能衰竭已成為當(dāng)前臨床上燒傷患者死亡的主要原因。目前臨床處理多以補(bǔ)充血容量和抗感染為主，但是效果并不理想。如何減輕嚴(yán)重?zé)齻笠鸬呐K器損傷及促進(jìn)損傷后再修復(fù)已經(jīng)成為一個(gè)十分重要的課題。其中肝臟是人體最重要的代謝器官，能夠保護(hù)其他臟器免受損傷，因此修復(fù)嚴(yán)重?zé)齻蟾螕p傷，對(duì)多器官功能衰竭的防治尤其重要。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stemcells，BMSCs）是一類具有強(qiáng)大增殖能力的多能干細(xì)胞，其具有多向分化潛能、來(lái)源方便、易于分離培養(yǎng)、免疫原性弱、進(jìn)入體內(nèi)后可定植于受損部位并修復(fù)其損傷等特性，因此，在修復(fù)病變組織損傷方面具有十分廣闊的前景。已有研究表明：BMSCs局部應(yīng)用能夠修復(fù)局部燒傷創(chuàng)面，靜脈移植可修復(fù)各種肝臟疾病，但關(guān)于BMSCs靜脈移植能否治療嚴(yán)重?zé)齻鸬母螕p傷還未見報(bào)道。因此本課題將BMSCs移植到嚴(yán)重?zé)齻拇笫篌w內(nèi)，探討其對(duì)嚴(yán)重?zé)齻鸬母螕p傷的修復(fù)作用及其作用機(jī)制，希望為臨床治療嚴(yán)重?zé)齻峁┬碌乃悸贰?本研究采用貼壁培養(yǎng)法分離、純化BMSCs，擴(kuò)增后應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞表面標(biāo)志，并誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞分化。選用成年雄性Wistar大鼠，分為正常對(duì)照組、模型組（經(jīng)球后靜脈注入生理鹽水0.1mL）和細(xì)胞治療組（經(jīng)球后靜脈注入BMSCs0.1mL，1×107個(gè)），每組10只。制備大鼠燒傷模型，將氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）標(biāo)記的BMSCs經(jīng)球后靜脈移植到細(xì)胞治療組的大鼠體內(nèi)，模型組大鼠注射等體積生理鹽水。每日觀察各組大鼠一般狀態(tài)，分別在細(xì)胞移植后1和2周稱量大鼠體重，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。細(xì)胞移植后2周取血及大鼠肝組織，通過(guò)檢測(cè)血清中ALT、AST和LDH的含量，HE染色進(jìn)行病理組織學(xué)觀察并評(píng)分，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PCNA的表達(dá)，TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡，Western blot法檢測(cè)Bax、Bcl-2、Caspase-3和P-ASK1的表達(dá)，觀察各組大鼠肝功能、肝組織病理、肝細(xì)胞增殖、肝細(xì)胞凋亡情況及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。細(xì)胞移植后2周利用激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs在細(xì)胞治療組大鼠肝組織內(nèi)的定植情況。 本研究結(jié)果顯示：貼壁培養(yǎng)法得到的BMSCs生長(zhǎng)狀態(tài)良好。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)得到的BMSCs CD44和CD90呈陽(yáng)性，基本不表達(dá)CD45，大部分細(xì)胞處于相對(duì)不活躍的靜止期。BMSCs被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞，茜素紅染色呈陽(yáng)性。細(xì)胞移植后2周，模型組大鼠明顯萎靡少動(dòng)；細(xì)胞治療組大鼠行為狀態(tài)明顯較好，細(xì)胞治療組大鼠體重及創(chuàng)面愈合率顯著大于模型組（P0.05）。ALT、AST和LDH結(jié)果表明細(xì)胞治療組大鼠肝功能顯著優(yōu)于模型組（P0.05）。HE染色及病理評(píng)分表明細(xì)胞治療組大鼠肝組織病理形態(tài)改變顯著優(yōu)于模型組。免疫組化結(jié)果顯示，與模型組比較，細(xì)胞治療組PCNA表達(dá)顯著增加（P0.05）。TUNEL結(jié)果表明細(xì)胞治療組肝細(xì)胞凋亡率顯著低于模型組（P0.05）。Western blot結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組Bax、Caspase-3和P-ASK1蛋白表達(dá)顯著增加（P0.05），而Bcl-2表達(dá)顯著減少（P0.05），Bcl-2與Bax比值（Bcl-2/Bax）顯著降低（P0.05）；與模型組比較，細(xì)胞治療組Bax、Caspase-3和P-ASK1蛋白表達(dá)顯著減少（P0.05），而Bcl-2表達(dá)顯著增加（P0.05），Bcl-2/Bax顯著增高（P0.05）。激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示，在細(xì)胞治療組大鼠肝組織中存在CM-Dil標(biāo)記的BMSCs。結(jié)論： BMSCs靜脈移植后能夠向受損肝組織定植，對(duì)嚴(yán)重?zé)齻鸬母螕p傷有明顯的修復(fù)作用，其修復(fù)機(jī)制可能與促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R644

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1596750