本文選題：骨髓間充質干細胞　切入點：燒傷　出處：《吉林大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：在我國，燒傷年發(fā)病率約達人群的2％左右，嚴重燒傷甚至可危及生命，一直為社會和醫(yī)學界所重視。嚴重燒傷發(fā)生后，機體的腸道屏障遭到嚴重破壞，腸道細菌移位，，導致內毒素血癥的發(fā)生，如果治療不及時，進一步可引發(fā)全身多器官功能的損傷。隨著對燒傷認識水平的提高，因休克死亡的患者明顯減少，多器官功能衰竭已成為當前臨床上燒傷患者死亡的主要原因。目前臨床處理多以補充血容量和抗感染為主，但是效果并不理想。如何減輕嚴重燒傷后引起的臟器損傷及促進損傷后再修復已經成為一個十分重要的課題。其中肝臟是人體最重要的代謝器官，能夠保護其他臟器免受損傷，因此修復嚴重燒傷后肝損傷，對多器官功能衰竭的防治尤其重要。骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stemcells，BMSCs）是一類具有強大增殖能力的多能干細胞，其具有多向分化潛能、來源方便、易于分離培養(yǎng)、免疫原性弱、進入體內后可定植于受損部位并修復其損傷等特性，因此，在修復病變組織損傷方面具有十分廣闊的前景。已有研究表明：BMSCs局部應用能夠修復局部燒傷創(chuàng)面，靜脈移植可修復各種肝臟疾病，但關于BMSCs靜脈移植能否治療嚴重燒傷引起的肝損傷還未見報道。因此本課題將BMSCs移植到嚴重燒傷的大鼠體內，探討其對嚴重燒傷引起的肝損傷的修復作用及其作用機制，希望為臨床治療嚴重燒傷提供新的思路。 本研究采用貼壁培養(yǎng)法分離、純化BMSCs，擴增后應用流式細胞儀檢測細胞周期及細胞表面標志，并誘導其向成骨細胞分化。選用成年雄性Wistar大鼠，分為正常對照組、模型組（經球后靜脈注入生理鹽水0.1mL）和細胞治療組（經球后靜脈注入BMSCs0.1mL，1×107個），每組10只。制備大鼠燒傷模型，將氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）標記的BMSCs經球后靜脈移植到細胞治療組的大鼠體內，模型組大鼠注射等體積生理鹽水。每日觀察各組大鼠一般狀態(tài)，分別在細胞移植后1和2周稱量大鼠體重，計算創(chuàng)面愈合率。細胞移植后2周取血及大鼠肝組織，通過檢測血清中ALT、AST和LDH的含量，HE染色進行病理組織學觀察并評分，免疫組織化學法檢測PCNA的表達，TUNEL法檢測肝細胞凋亡，Western blot法檢測Bax、Bcl-2、Caspase-3和P-ASK1的表達，觀察各組大鼠肝功能、肝組織病理、肝細胞增殖、肝細胞凋亡情況及凋亡相關蛋白的表達。細胞移植后2周利用激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs在細胞治療組大鼠肝組織內的定植情況。 本研究結果顯示：貼壁培養(yǎng)法得到的BMSCs生長狀態(tài)良好。流式細胞術檢測得到的BMSCs CD44和CD90呈陽性，基本不表達CD45，大部分細胞處于相對不活躍的靜止期。BMSCs被誘導分化為成骨細胞，茜素紅染色呈陽性。細胞移植后2周，模型組大鼠明顯萎靡少動；細胞治療組大鼠行為狀態(tài)明顯較好，細胞治療組大鼠體重及創(chuàng)面愈合率顯著大于模型組（P0.05）。ALT、AST和LDH結果表明細胞治療組大鼠肝功能顯著優(yōu)于模型組（P0.05）。HE染色及病理評分表明細胞治療組大鼠肝組織病理形態(tài)改變顯著優(yōu)于模型組。免疫組化結果顯示，與模型組比較，細胞治療組PCNA表達顯著增加（P0.05）。TUNEL結果表明細胞治療組肝細胞凋亡率顯著低于模型組（P0.05）。Western blot結果顯示，與正常對照組比較，模型組Bax、Caspase-3和P-ASK1蛋白表達顯著增加（P0.05），而Bcl-2表達顯著減少（P0.05），Bcl-2與Bax比值（Bcl-2/Bax）顯著降低（P0.05）；與模型組比較，細胞治療組Bax、Caspase-3和P-ASK1蛋白表達顯著減少（P0.05），而Bcl-2表達顯著增加（P0.05），Bcl-2/Bax顯著增高（P0.05）。激光共聚焦顯微鏡觀察結果顯示，在細胞治療組大鼠肝組織中存在CM-Dil標記的BMSCs。結論： BMSCs靜脈移植后能夠向受損肝組織定植，對嚴重燒傷引起的肝損傷有明顯的修復作用，其修復機制可能與促進肝細胞增殖和抑制細胞凋亡有關。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R644

【參考文獻】

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1 郭麗,尹飛,王曉麗,孟洪琪,凌翎,呼合塔娜,范洪學;骨髓間充質干細胞向神經元的誘導分化[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2003年01期

2 張堅;朱維銘;龔劍峰;張偉;李寧;黎介壽;;基因修飾骨髓間充質干細胞移植對放射性腸損傷的修復作用[J];腸外與腸內營養(yǎng);2008年03期

3 張紅菊;張杰文;;腦心通抑制腦缺血誘導的內質網凋亡通路[J];醫(yī)藥論壇雜志;2010年15期

4 楊錯;劉玉蘭;張紅梅;;肝細胞損傷機制及防治藥物研究進展[J];實用藥物與臨床;2005年06期

5 何劍戈;任愛紅;施懿誠;侯小漫;趙義鴿;;肝缺血再灌注損傷的機制及其預防[J];河南科技大學學報(醫(yī)學版);2012年03期

6 丁國永;傅強;盧日峰;陳強;凌玲;范洪學;郭麗;;骨髓間充質干細胞移植促腎缺血-再灌注損傷修復的機制初探[J];細胞與分子免疫學雜志;2009年08期

7 胡資兵;曾榮;郭偉韜;林顥;;骨髓間充質干細胞誘導分化特征[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年43期

8 阮智;黃慧;孫建華;史晨輝;董金波;王永明;;異體骨髓間充質干細胞移植治療大鼠脊髓損傷[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年36期

9 覃基政;韓曉冬;;骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)及其歸巢機制[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年40期

10 李曉峰;趙勁民;蘇偉;崔向榮;羅世興;馬愛國;;大鼠骨髓間充質干細胞的培養(yǎng)與鑒定[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年10期

本文編號：1596750