發(fā)布時間：2018-02-26 02:12

  本文關(guān)鍵詞： 宮血干細(xì)胞 外泌體 急性肝衰竭 誘導(dǎo)分化　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：宮血干細(xì)胞(Menstrual blood derived mesenchymal stem cell,MenSCs)是一種新型來源的成體間充質(zhì)干細(xì)胞,它來源于女性的月宮血,擁有獲得方便,安全無倫理問題等優(yōu)點。外泌體(exosomes)是一類可由不同細(xì)胞產(chǎn)生的直徑在30-100nm之間的雙層脂質(zhì)的囊胞,其中包含有蛋白質(zhì)和RNA等物質(zhì)。本研究重點闡述MenSCs來源的exosomes在體內(nèi)和體外對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的急性肝衰竭的治療效果,以及小鼠肝臟細(xì)胞AML12條件培養(yǎng)上清(AML12-CM)體外誘導(dǎo)MenSCs分化為肝臟樣細(xì)胞的研究。首先,我們在體內(nèi)和體外證實了 MenSCs來源的exosomes對D-GalN/LP誘導(dǎo)的急性肝衰竭的治療效果。在成功提取MenSCs來源的exosomes后,鑒定其表達(dá)exosomes相關(guān)標(biāo)記蛋白如CD63和TSG101。在體內(nèi)和體外示蹤實驗中,exosomes經(jīng)染色后,可以在小鼠模型肝臟內(nèi)或共培養(yǎng)的肝臟細(xì)胞中觀察到。MenSCs和MenSCs來源的exosomes的抗體芯片結(jié)果顯示:exosomes含有較高含量的ICAM-1,angiopoietin-2,Axl,angiogenin,IGFBP-6,osteoprotegerin,IL-6 和 IL-8 等蛋白。在細(xì)胞實驗中,MenSCs來源的exosomes可以抑制由D-GalN/LPS誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞系A(chǔ)ML12的凋亡。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示MenSCs來源的exosomes注射到D-GalN/LPS誘導(dǎo)的急性肝衰竭小鼠模型體內(nèi)后,可以顯著抑制小鼠血清中ALT和AST的升高、抑制炎癥因子(IL-6,IL-1β和TNF-a)的升高,并抑制肝臟細(xì)胞的凋亡。我們推測并證實其機(jī)制是通過抑制凋亡因子(caspase-3)的表達(dá),以及阻止小鼠肝臟中炎癥細(xì)胞(NK細(xì)胞和CD11b+細(xì)胞)在肝臟中聚集而發(fā)揮作用。其次,我們研究了肝細(xì)胞系A(chǔ)ML12細(xì)胞培養(yǎng)上清體外誘導(dǎo)MenSCs分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞。誘導(dǎo)分化21天后,細(xì)胞逐漸發(fā)生胞質(zhì)濃縮形成上皮樣細(xì)胞,表達(dá)ALB、AFP、CK-18、CK-19、HNF-4a和CAT-1等肝細(xì)胞的特異性基因,以及表達(dá)ALB和AFP肝細(xì)胞特異性蛋白。功能實驗顯示誘導(dǎo)分化后的肝細(xì)胞樣細(xì)胞具有糖原儲存,ICG攝取和分泌以及尿素合成能力。綜上,我們通過D-GalN/LPS誘導(dǎo)的急性肝衰竭小鼠模型和體外共培養(yǎng)實驗初步證實了 MenSCs來源的exosomes可以用于治療急性肝衰竭。此外,MenSCs在條件培養(yǎng)誘導(dǎo)下可以分化為具有成熟肝細(xì)胞功能的肝細(xì)胞樣細(xì)胞,可用于急性肝衰竭緩解期的后續(xù)治療�？偠灾�,MenSCs和其來源的exosomes可以作為一種治療急性肝衰竭的可選性方案,為臨床應(yīng)用提高理論依據(jù)。
[Abstract]:In vivo and in vitro tracer experiments , exosomes derived from MenSCs were cultured in vivo and in vitro . The results showed that exosomes derived from MenSCs were induced by D - GalN / LPS . The results showed that exosomes derived from MenSCs could inhibit the proliferation of human liver cells induced by D - GalN / LPS . and the theoretical basis is improved for clinical application .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R575.3

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本文編號：1536092