本文關(guān)鍵詞：膿毒癥大鼠創(chuàng)面愈合過程中MCP-1和MIP-1α變化的研究　出處：《暨南大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分膿毒癥動物模型的建立 目的探索建立膿毒癥大鼠模型的可行方法。 方法體重200-250g雄性SD大鼠40只，隨機分成兩組，分別為膿毒癥組（CLP組）和假手術(shù)組（Sham組），每組20只。CLP組大鼠盲腸遠端1/3行結(jié)扎手術(shù)，并用12號穿刺針在結(jié)扎段的中點垂直腸系膜方向?qū)Υ┮淮�，擠出少量糞便入腹腔。術(shù)后按5ml/100g立即給予皮下注入生理鹽水進行液體復(fù)蘇。Sham組除不行盲腸結(jié)扎并穿刺以外，其余手術(shù)步驟均一致。術(shù)后6h、12h、24h及48h各組分別隨機取5只大鼠觀察其一般情況、死亡率、內(nèi)臟病理學(xué)變化、內(nèi)毒素水平；術(shù)后12h行血培養(yǎng)檢查。實驗結(jié)果用Levene test行方差齊性檢驗，用兩個獨立樣本比較的T檢驗進行分析。 結(jié)果CLP組大鼠術(shù)后12h均出現(xiàn)了煩躁、寒戰(zhàn)豎毛、進食飲水減少等癥狀。而Sham組無異常變化。CLP組大鼠術(shù)后12h-24h間死亡4只，24h后死亡1只，共死亡5只，死亡率為25%。而Sham組大鼠未出現(xiàn)死亡。CLP組大鼠各臟器淤血明顯，部分臟器與腹壁粘連，腹腔有膿性滲液，伴惡臭味。胃與小腸積氣擴張。盲腸末端腫脹明顯，呈紫黑色樣缺血性壞死。而Sham組未見明顯的異常變化。CLP組大鼠肺基本紋理結(jié)構(gòu)可見，但是肺泡壁明顯增厚，部分肺泡塌陷，肺間質(zhì)中見大量炎性細胞浸潤；肝細胞腫脹、壞死明顯，肝細胞索解離，肝竇內(nèi)廣泛炎癥細胞浸潤，均以術(shù)后12h-24h炎性改變最為明顯。CLP組大鼠血漿內(nèi)毒素水平在各時間點均高于假手術(shù)組(p0.01)，在12h達到峰值（4.839±0.050Eu/ml）之后逐漸下降。CLP組術(shù)后12h血培養(yǎng)檢測到有糞腸球菌、大腸埃希菌及其他腸桿菌屬，而Sham組均未發(fā)現(xiàn)異常病原菌。 結(jié)論采用盲腸遠端1/3結(jié)扎并用12號穿刺針在結(jié)扎段的中點對穿一次的方法,可以在動物中觀察到符合臨床膿毒癥患者的病理生理變化，因此是建立膿毒癥動物模型的可行方法。 第二部分膿毒癥對大鼠創(chuàng)面愈合過程的影響 目的觀察膿毒癥模型大鼠的創(chuàng)面愈合過程，研究膿毒癥對創(chuàng)面愈合的影響。 方法大鼠背部制作2個1.5cm×1.5cm大小的全層皮膚缺損創(chuàng)面，2天以后（相當(dāng)于燒傷休克期），分成三組，分別為空白對照組（N組）、假手術(shù)組（Sham組）以及盲腸結(jié)扎穿刺的膿毒癥組（CLP組），每組25只。于制創(chuàng)后3d、5d、7d、10d及14d各組隨機取大鼠5只，觀察創(chuàng)面愈合時間、記錄創(chuàng)面面積的大小，用創(chuàng)面評分標(biāo)準對創(chuàng)面愈合情況進行評分，檢測創(chuàng)面組織學(xué)形態(tài)、膠原形成及血管生成情況。采用SNK test行方差齊性檢驗，若方差齊，行完全隨機設(shè)計資料的方差分析；若方差不齊則采用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗。 結(jié)果CLP組創(chuàng)面愈合時間（13±1.87d）較Sham組及N組明顯延長（P0.05）。在制創(chuàng)后3d和5d，CLP組創(chuàng)面愈合率明顯低于N組（P0.05），但與Sham組比較無差異；但在制創(chuàng)后7d和10d，CLP組創(chuàng)面愈合率（52±8%，76±10%）明顯低于Sham組（71±10%，94±2%）（P0.05），14d時三組比較無差異。在制創(chuàng)后3d，CLP組創(chuàng)面評分與Sham組和N組比較無差異（P0.05），而其余時間點均低于兩組對照組。除制創(chuàng)后3d外，其余各時間點CLP組創(chuàng)面膠原形成面積和新生血管生成較Sham組及N組明顯減少（P0.05）。 結(jié)論膿毒癥使其模型大鼠的創(chuàng)面愈合明顯延遲。 第三部分膿毒癥大鼠創(chuàng)面愈合過程中MCP-1和MIP-1α的變化 目的通過檢測膿毒癥大鼠創(chuàng)面組織中趨化因子MCP-1和MIP-1α蛋白及其mRNA的表達，分析其與膿毒癥創(chuàng)面愈合是否存在相關(guān)性。 方法大鼠創(chuàng)面及膿毒癥的制作方法如第二部分。于各時間點取材，用Elisa試劑盒檢測創(chuàng)面組織MCP-1和MIP-1α蛋白的表達，，并用RT-PCR檢測其mRNA的表達。采用SNK test行方差齊性檢驗，若方差齊，行完全隨機設(shè)計資料的方差分析；若方差不齊則采用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗。 結(jié)果各組MCP-1表達的水平均在制創(chuàng)后3d達到最大值，之后呈逐漸下降的趨勢，10d以后處于相對恒定狀態(tài),制創(chuàng)后3d和5d，CLP組MCP-1水平與Sham組比較無差異，而明顯高于N組（P0.05），其余時間點均高于Sham組和N組。各組MIP-1α表達水平也在制創(chuàng)后3d達到最高水平，且CLP組明顯高于N組，但與Sham組比較無差別（P0.05），制創(chuàng)后5d時，CLP組MIP-1α水平低于Sham組和N組（P0.05），而7d時三組之間進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。但制創(chuàng)后10d，CLP組出現(xiàn)反跳性升高（208.94±65.33pg/ml），且明顯高于Sham組及N組（P0.05），而之后急劇下降，至14d時明顯低于Sham組和N組。MCP-1mRNA與MIP-1α mRNA表達水平與其相應(yīng)的蛋白表達一致。 結(jié)論膿毒癥大鼠創(chuàng)面愈合過程中MCP-1呈早期高表達和后期表達下降的表達紊亂是影響膿毒癥創(chuàng)面愈合的原因；而MIP-1α可能不是影響膿毒癥大鼠創(chuàng)面愈合的關(guān)鍵因素。
[Abstract]:Establishment of animal model of first partial sepsis Objective To explore a feasible method to establish a rat model of sepsis . Methods Forty - four male SD rats weighing 200 - 250 g were randomly divided into two groups : sepsis group ( CLP group ) and sham operation group ( Sham group ) . Results There were no abnormal changes in the lungs of CLP group . There were no obvious abnormal changes in the lungs of CLP group . Conclusion It is feasible to establish an animal model of sepsis by using 1 / 3 ligation of the distal end of the cecum and the puncture needle in the middle point of the ligation section . Effect of second partial sepsis on wound healing process in rats Objective To observe the wound healing process of sepsis model rats and study the effect of sepsis on wound healing . Methods The rats were divided into three groups : blank control group ( N group ) , sham operation group ( Sham group ) and cecal ligation puncture group ( CLP group ) after 2 days ( equivalent to burn shock stage ) . Results Compared with Sham group ( P 0.05 ) , the wound healing rate of CLP group was significantly lower than that in Sham group ( P 0.05 ) , but the wound healing rate of CLP group ( 52 鹵 8 % , 76 鹵 10 % ) was significantly lower than that in Sham group ( 71 鹵 10 % , 94 鹵 2 % ) ( P0.05 ) . Conclusion The sepsis leads to a significant delayed wound healing in the model rats . Changes of MCP - 1 and MIP - 1偽 during wound healing in third partial sepsis rats Objective To investigate the expression of MCP - 1 and MIP - 1偽 protein in wound tissue of septic rats and their mRNA expression . Methods The expression of MCP - 1 and MIP - 1偽 in wound tissue was determined by ELISA kit . The expression of MCP - 1 and MIP - 1偽 protein was detected by ELISA kit . Results The levels of MCP - 1 in each group reached the maximum at 3 d and then decreased gradually . After 10d , the level of MCP - 1 in CLP group was higher than Sham group and N group ( P0.05 ) . However , the level of MIP - 1偽 in CLP group was significantly higher than Sham group and N group ( P0.05 ) . Conclusion The early and late expression of MCP - 1 during wound healing of sepsis is the cause of wound healing in sepsis . MIP - 1偽 may not be a key factor affecting wound healing in sepsis rats .

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【參考文獻】

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本文編號：1391777