本文關(guān)鍵詞：外源性一氧化碳釋放分子CORM-2通過Nrf2通路抑制LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)　出處：《南京大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 一氧化碳 炎癥 膿毒癥 Nrf2 促炎癥因子

【摘要】：一氧化碳釋放分子CORM-2可釋放一氧化碳并被證明具有抗炎作用,但其具體的抗炎機制并未明確。有研究發(fā)現(xiàn)CORM-2可以激活Nrf2信號通路,而Nrf2信號通路與機體抗炎具有密切關(guān)系,所以我們設(shè)想CORM-2抑制炎癥是否通過激活Nrf2信號通路。在體外實驗中,我們分離了野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠的腹腔巨噬細胞,比較這兩種小鼠的腹腔巨噬細胞在LPS的誘導(dǎo)下CORM-2對其促炎癥因子表達抑制作用的差別；在體內(nèi)實驗中,給予野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠非致死劑量的LPS,檢測肝臟組織及腦組織中,CORM-2對這兩種小鼠促炎癥因子表達抑制作用的差別,及通過HE染色檢測肝臟組織及腦組織中炎癥細胞表達數(shù)量的差別；另外,給予野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠致死劑量的LPS,比較CORM-2對這兩種小鼠生存時間的影響。實驗結(jié)果顯示,在體內(nèi)和體外實驗中CORM-2均明顯抑制了野生型小鼠促炎癥因子的表達,但并未明顯抑制Nrf2基因敲除小鼠的,并且在小鼠生存率實驗中,CORM-2大大改善了野生型小鼠的生存時間,但并未改善Nrf2基因敲除小鼠的。從這些實驗結(jié)果可以推論,一氧化碳釋放分子CORM-2通過Nrf2通路抑制LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)。第一部分一氧化碳釋放分子CORM-2通過激活Nrf2通路抑制LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)(體外實驗部分)目的：一氧化碳的抗炎作用雖已被越來越多的研究證實,但其確切的作用機制目前并不清楚。我們采用LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬細胞建立炎癥反應(yīng)模型,在體外研究CORM-2抑制炎癥與Nrf2通路的關(guān)系。方法：確立CORM-2發(fā)揮抗炎作用的最佳濃度及確定其對Nrf2通路的激活；檢測CORM-2抑制炎癥與Nrf2通路的關(guān)系：分離野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠腹腔巨噬細胞進行原代培養(yǎng),野生型小鼠所提取細胞分為以下四組：空白對照組、CORM-2組(CORM-250 μM)、LPS組(LPS, 1μg/ml)、CORM-2干預(yù)組(LPS 1μg/ml+CORM-2 50μM), Nrf2基因敲除小鼠細胞分組同前,RT-PCR法檢測野生型小鼠與Nrf2基因敲除小鼠各組促炎癥因子如TNF--α、IL-1β、IL-6及炎癥標志蛋白iNOS的表達情況。結(jié)果：CORM-2的最佳作用濃度為50 μM; CORM-2促進了Nrf2的轉(zhuǎn)核及其下游靶基因HO-1、NQO1和γ-GCSm的表達；野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠空白對照組及CORM-2組中促炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6及iNOS的呈低表達；野生型小鼠LPS組中TNF-α、IL-1β、IL-6及iNOS的表達量相對于空白對照組顯著增高,而LPS+CORM-2組TNF-α、IL-1β、IL-6及iNOS的表達量則較LPS組顯著下降(P0.05);Nrf2基因敲除小鼠LPS組中TNF-α、 IL-1 β、IL-6及iNOS的表達量相對于空白對照組亦顯著升高,但LPS+CORM-2組中這些促炎癥因子及iNOS的表達量并未顯著下降。結(jié)論：一氧化碳發(fā)揮抗炎作用的機理一直未被闡明,而Nrf2-ARE通路與機體氧化應(yīng)激及炎癥密切相關(guān),那么一氧化碳的抗炎作用與Nrf2-ARE通路的關(guān)系則值得我們?nèi)ヌ骄俊Ｎ覀兊捏w外實驗證明,一氧化碳釋放分子CORM-2明顯抑制了野生型小鼠LPS誘導(dǎo)的促炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6及iNOS的表達,但CORM-2并未顯著抑制Nrf2基因敲除小鼠以上促炎癥因子的表達。由此可以推測,Nrf2是一氧化碳發(fā)揮其抗炎作用所必需的。第二部分一氧化碳釋放分子CORM-2通過激活Nrf2通路抑制LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)(體內(nèi)實驗部分)目的：在體外實驗部分,我們的實驗結(jié)果已經(jīng)證實了CORM-2必需通過Nrf2通路才能發(fā)揮其抗炎作用。為了驗證體內(nèi)實驗結(jié)果是否與體外實驗相似,我們分別給予野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠LPS處理建立小鼠膿毒癥模型,比較在給予CORM-2后野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠體內(nèi)促炎癥因子表達的情況。另外,我們還給予野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠致死劑量的LPS,比較CORM-2對這兩種小鼠生存時間的影響。方法：采用腹膜下注射LPS建立膿毒癥模型,野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠各24只,其中野生型小鼠隨機分為四組：空白對照組、CORM-2組(CORM-2 30mg/kg)、LPS組(LPS,10mg/kg)、CORM-2干預(yù)組(LPS 10mg/kg+CORM-2 30mg/kg), Nrf2基因敲除小鼠分組同前。分別于LPS注射4h,16h后處死小鼠,取肝臟及腦組織,RT-PCR法檢測肝臟及腦組織中促炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6和iNOS的表達水平；western blot法檢測肝臟組織中炎癥標志蛋白iNOS和ICAM-1的表達水平；HE染色觀察肝臟及腦組織的病理變化。死亡率實驗中,野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠各20只,每組10只,分組如下：LPS組(LPS,10mg/kg)、CORM-2干預(yù)組(LPS 10mg/kg+CORM-2 30mg/kg),注射LPS后,每6h記錄小鼠存活數(shù),共觀察48h。結(jié)果：野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠肝臟組織中空白對照組及CORM-2組中促炎癥因子IL-1β、IL-6及iNOS呈低表達；CORM-2干預(yù)后明顯降低了野生型小鼠組促炎癥因子IL-1β、IL-6及iNOS mRNA水平的表達(P0.05)；降低了iNOS和ICAM-1蛋白水平的表達(P0.05)；亦減少了肝臟組織中中性粒細胞的浸潤,但以上實驗結(jié)果在Nrf2基因敲除小鼠中并未出現(xiàn)。與肝臟組織結(jié)果類似,野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠腦組織中空白對照組及CORM-2組中促炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6呈低表達；CORM-2干預(yù)后明顯降低了野生型小鼠組促炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表達(P0.05)；亦減少了腦組織中中性粒細胞的浸潤,但以上實驗結(jié)果也未出現(xiàn)在Nrf2基因敲除小鼠中。在死亡率實驗中,野生型小鼠LPS組在36h內(nèi)全部死亡,而CORM-2干預(yù)組則明顯降低了死亡率(P0.05),但是CORM-2預(yù)處理未明顯改善Nrf2基因敲除小鼠的死亡率。結(jié)論：一氧化碳釋放分子CORM-2可以顯著抑制膿毒癥所致肝臟及腦組織中促炎癥因子的表達及炎癥細胞的浸潤,但卻不能改善Nrf2基因敲除小鼠的炎癥反應(yīng)；并且在小鼠生存率實驗中,CORM-2大大改善了野生型小鼠的生存時間,但并未改善Nrf2基因敲除小鼠的,由此可見Nrf2信號通路在一氧化碳抑制炎癥的機制中起到重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 肖奎;王桂芳;董春玲;陳智鴻;胡成平;白春學(xué);;水通道蛋白1基因敲除小鼠的飼養(yǎng)繁殖與基因型鑒定[J];湘南學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年01期

2 陳通克;陳錫文;管敏強;趙慧玲;王麗花;林孝坤;李安樂;;PAX-8基因敲除小鼠的飼養(yǎng)繁殖及基因型鑒定[J];實驗動物科學(xué);2009年02期

3 劉忠華,張開鎬;基因敲除小鼠在藥物依賴性研究中的應(yīng)用[J];中國藥物依賴性雜志;2001年02期

4 杜智勇,粟永萍;SRC-3基因敲除小鼠的飼養(yǎng)繁殖及鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2005年05期

5 景志杰;郭民;;載脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及病理組織學(xué)觀察[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2011年06期

6 杜靜;葉亮;林欣乾;吳志成;夏勇;楊超;;白細胞介素-10基因敲除小鼠血液生理生化指標分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年14期

7 武磊;趙博;張志清;杲修杰;冷雪;劉曉華;;UCH-L1基因敲除小鼠的飼養(yǎng)、繁殖及鑒定[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2013年05期

8 朱加銀;陳錫文;趙惠玲;姚蘇琴;;腺苷A2a受體基因敲除小鼠不同繁育方法比較[J];實驗動物與比較醫(yī)學(xué);2008年03期

9 趙立玲;王敏;袁凌青;謝輝;李輝;羅湘杭;廖二元;;脂聯(lián)素基因敲除小鼠血管鈣化的研究[J];實用預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年05期

10 桑景葒;劉欣;;基因敲除小鼠在疾病研究中的應(yīng)用[J];生物學(xué)通報;2009年12期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張文高;鄭廣娟;張靜;王顯剛;劉龍濤;吳敏;張亞同;馬學(xué)盛;孟憲忠;;脂欣康膠囊對載脂蛋白E基因敲除小鼠動脈粥樣硬化及斑塊穩(wěn)定性干預(yù)作用研究[A];第七次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

2 張文高;鄭廣娟;王顯剛;劉龍濤;吳敏;張亞同;馬學(xué)盛;;載脂蛋白E基因敲除小鼠及其在心血管病中西醫(yī)結(jié)合研究中的應(yīng)用[A];全國中西醫(yī)結(jié)合治療心血管病及血瘀證高級論壇和研修班論文匯編[C];2004年

3 張文高;楊秀麗;;載脂蛋白E基因敲除小鼠在老年神經(jīng)功能障礙疾病中西醫(yī)結(jié)合研究中的應(yīng)用[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

4 張文高;鄭廣娟;孟憲忠;朱慶軍;張丹;王顯剛;楊勇;劉龍濤;吳敏;張亞同;馬學(xué)盛;;脂欣康等三種調(diào)脂中藥對載脂蛋白E基因敲除小鼠動脈粥樣硬化及斑塊穩(wěn)定性干預(yù)作用研究[A];第四次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

5 張文高;鄭廣娟;朱慶軍;張丹;張靜;王顯剛;楊勇;劉龍濤;吳敏;張亞同;馬學(xué)盛;孟憲忠;;脈心康與血脂康對載脂蛋白E基因敲除小鼠動脈粥樣硬化及易損斑塊干預(yù)作用與機理研究[A];第七次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 張文高;鄭廣娟;朱慶均;宋潔;楊秀麗;張丹;張靜;劉龍濤;王顯剛;;載脂蛋白E基因敲除小鼠及其在老年病中西醫(yī)結(jié)合研究中的應(yīng)用[A];第八次全國中西醫(yī)結(jié)合虛證與老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

7 張文高;;載脂蛋白E基因敲除小鼠在心血管病與老年病中西醫(yī)結(jié)合研究中的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師分會成立大會暨第一屆年會會議資料[C];2007年

8 劉樹強;羅昊澍;劉佳利;崔勝;;Sp1可通過與GC框結(jié)合直接調(diào)控Lhx4基因的表達[A];全國動物生理生化第十次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

9 左寶芬;杜小燕;陳振文;;近交系基因敲除小鼠微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析[A];第十屆中國實驗動物科學(xué)年會論文集[C];2012年

10 劉學(xué);李霄鶴;鄭小紅;寧文;;Fstl1基因敲除小鼠的表型分析[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 夏洪平;利用RNAi對肥胖和糖尿病進行治療[N];健康報;2005年

2 香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版公司 提供;抗哮喘基因位點找到[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張學(xué)新;尿素通道蛋白B基因敲除小鼠心臟電生理特性的改變及其機制研究[D];吉林大學(xué);2007年

2 只向成;CD36基因敲除小鼠的皮膚傷口愈合[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

3 徐康;OPG基因敲除小鼠骨、糖和脂的代謝變化[D];中南大學(xué);2008年

4 孟博;REGγ基因敲除小鼠類精神分裂癥行為學(xué)及分子機制初探[D];華東師范大學(xué);2010年

5 趙立玲;脂聯(lián)素基因敲除小鼠血管鈣化及其鈣化機制的研究[D];中南大學(xué);2009年

6 崔勇志;小鼠Stat3/5基因座的克隆及Stat5a/b條件性基因敲除小鼠的制備[D];中國醫(yī)科大學(xué);2002年

7 杜艷偉;代謝重構(gòu)在UT-B基因敲除小鼠心肌肥大發(fā)病機制中的作用[D];吉林大學(xué);2015年

8 孫東云;化瘀滌痰通路中藥調(diào)控腎上腺髓質(zhì)素抑制腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

9 翁土軍;利用成骨細胞特異性基因敲除小鼠模型研究Pten和Gab1在骨穩(wěn)態(tài)過程中的功能[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

10 耿燕;Fstll對于出生時肺的成熟起至關(guān)重要的作用[D];南京大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 唐賀;利用FGF13心肌條件性基因敲除小鼠研究FGF13在心律失常中的作用及其機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張曼;FKBP51在抵制高脂誘導(dǎo)肥胖中的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 張亞平;1α羥化酶基因敲除小鼠和維生素D3受體基因敲除小鼠生物學(xué)特性的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

4 楊俊;端粒酶RNA基因Terc在非酒精性脂肪性肝病中的作用機制研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 ACHIM CCHITVSANZWHOH SATHEKA;[D];東北師范大學(xué);2014年

6 滕麗萍;FMR-1基因敲除小鼠的焦慮及探索行為分析[D];浙江大學(xué);2010年

7 程文君;FAAP基因敲除小鼠模型的構(gòu)建和表型初步分析[D];山東師范大學(xué);2015年

8 李珊珊;Wnt5a基因敲除小鼠腭裂發(fā)生的機制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 楊李果;NR1基因敲除小鼠前額葉腦區(qū)突觸可塑性及學(xué)習(xí)記憶的研究[D];華東師范大學(xué);2011年

10 張毅敏;Perilipin 1基因敲除小鼠脂肪組織纖維化研究[D];鄭州大學(xué);2013年

，

本文編號：1353555