本文關(guān)鍵詞：2種干細(xì)胞微創(chuàng)移植調(diào)控顱腦創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)的研究

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【摘要】：第一部分2種移植方法對宿主和移植物的影響目的觀察NSCs兩種移植方法對宿主和移植物的影響。方法分離培養(yǎng)C57BL/6胎鼠NSCs,用Brd U標(biāo)記后將等量NSCs用兩種方式移植到同品系成年小鼠兩側(cè)大腦內(nèi),左側(cè)用磨鉆鉆孔顱骨,右側(cè)用微量進(jìn)樣器穿刺顱骨。移植后用隨機(jī)數(shù)字表法在各時間點(diǎn)處死動物(n=6),觀察大體形態(tài)和病理染色,對比兩側(cè)移植后腦損傷。用免疫熒光抗體CD11b、CD3和CD19標(biāo)記小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞,觀察炎性細(xì)胞浸潤,對比兩側(cè)炎癥反應(yīng)。用免疫熒光抗體BrdU、NeuN、GFAP標(biāo)記移植物、神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞,對比兩側(cè)細(xì)胞分布。結(jié)果1.左側(cè)大腦破壞程度較右側(cè)嚴(yán)重。移植后1~3 d,左側(cè)大腦內(nèi)神經(jīng)元壞死明顯,可見大量紅細(xì)胞外溢和炎性細(xì)胞浸潤;7 d后該側(cè)瘢痕組織明顯增多并超過對側(cè)。2.左側(cè)大腦內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤較右側(cè)明顯,小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞百分率在早期明顯升高,隨后T細(xì)胞也逐漸增多,B細(xì)胞在移植21 d后浸潤較明顯。3.在各時間點(diǎn),右側(cè)大腦移植區(qū)內(nèi)BrdU陽性細(xì)胞百分率較左側(cè)高(P0.05)。4.在各時間點(diǎn),左側(cè)大腦移植區(qū)內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞百分率較右側(cè)高,神經(jīng)元百分率較右側(cè)低(P0.05)。結(jié)論用微量進(jìn)樣器穿刺顱骨移植NSCs能從以下幾方面改善移植物功能:減小移植操作造成的機(jī)械性損傷、炎癥介導(dǎo)的繼發(fā)性損傷,減少移植細(xì)胞外溢,提高移植效率。第二部分2種干細(xì)胞微創(chuàng)移植調(diào)控顱腦創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)的研究目的觀察NSCs、MSCs微創(chuàng)移植調(diào)控TBI后炎癥反應(yīng)的異同。方法按隨機(jī)數(shù)字表將成年雄性C57BL/6小鼠分為:假手術(shù)組(n=54)和TBI組(n=210)。用自由落體裝置制備TBI小鼠模型,在造模后12 h行NSS評分,按隨機(jī)數(shù)字表將評分為3~7者,分為3組(n=54)。造模后24 h將C57BL/6小鼠成體NSCs、MSCs微創(chuàng)移植到小鼠TBI模型腦內(nèi),以注射等量PBS為對照組。移植后1 d、3 d和7 d處死動物,用病理染色觀察腦損傷,用免疫熒光抗體CD11b、CD3和CD19染色觀察炎性細(xì)胞浸潤,提取腦內(nèi)m RNA、蛋白質(zhì)檢測細(xì)胞因子表達(dá),分析2種干細(xì)胞調(diào)控作用的異同。結(jié)果1.NSCs、MSCs移植后7 d腦損傷情況較PBS組局限,組織滲出、水腫減少。2.NSCs、MSCs移植后3 d、7 d,腦內(nèi)小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯少于PBS組(P0.05);NSCs移植后7 d,腦組織內(nèi)T細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯少于PBS組(P0.05)。3.MSCs移植后IL-6、TNF-α的mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)水平在各時間點(diǎn)均低于PBS組(P0.05);NSCs移植后IL-10的mRNA表達(dá)水平在1 d、3 d明顯高于PBS組(P0.05),其蛋白表達(dá)水平在3 d、7 d較PBS組、MSCs組高(P0.05)。結(jié)論NSCs與MSCs影響了TBI后免疫細(xì)胞浸潤和細(xì)胞因子表達(dá)。二者調(diào)控作用相似處為均能抑制小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞浸潤;不同之處為NSCs還可抑制T細(xì)胞浸潤并上調(diào)了IL-10的水平,而MSCs下調(diào)了促炎因子IL-6、TNF-α的水平。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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1 馮挺眉;吳聰;顧永耀;;自然殺傷性T細(xì)胞在惡性胸腔積液疾病中的分布及其趨化因子受體的表達(dá)和意義[J];免疫學(xué)雜志;2011年01期

2 周憲賓;姚成芳;;巨噬細(xì)胞M1/M2極化分型的研究進(jìn)展[J];中國免疫學(xué)雜志;2012年10期

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本文編號：1291522