本文關(guān)鍵詞：硫化氫對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷的保護(hù)作用

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【摘要】：研究目的： 建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）模型，通過檢測(cè)腦組織中的GFAP、MMP-9、c-fos、caspase-3及Bcl-2的表達(dá)變化，探討外源性硫化氫供體硫氫化鈉(sodium hydrosulfide, NaHS)對(duì)SAH早期腦損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制。 方法： 1.大鼠SAH模型的建立，參照Ayer RE等的方法進(jìn)行并加以改良。 2.實(shí)驗(yàn)分組： 假手術(shù)組：大鼠10只，線栓進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈后不刺破分叉處，腹腔注射0.5mL生理鹽水，24h神經(jīng)學(xué)評(píng)分觀察。 SAH組：大鼠10只，如模型建立方法，腹腔注射0.5mL生理鹽水，24h神經(jīng)學(xué)評(píng)分觀察。 H2S組：大鼠48只，建立SAH后，腹腔注入NaHS，濃度分別為0μmol/kg、6.25μmol/kg、12.5μmol/kg、25μmol/kg、50μmol/kg，根據(jù)濃度和大鼠重量計(jì)算NaHS的量，，溶于0.5mL生理鹽水中。其中NaHS50μmol/kg組大鼠按12h、24h、48h各6只大鼠，多聚甲醛灌注、取腦、冰凍切片，備用；NaHS各濃度組6只大鼠用于Western-blot檢測(cè)。 3.用免疫熒光和Western-blot檢測(cè)海馬皮質(zhì)和額頂葉皮質(zhì)GFAP、MMP-9、c-fos、Bcl-2和caspase-3表達(dá)的影響。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：各組數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組之間的比較采用單因素方差分析，0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot結(jié)果應(yīng)用Imagej和GraphPad Prism5軟件進(jìn)行分析，其值用灰度比值表示。 結(jié)果： 1．硫化氫對(duì)SAH早期腦損傷的保護(hù)作用：模型建立后，用神經(jīng)評(píng)分法進(jìn)行評(píng)分，結(jié)果表明，H2S有明顯改善腦功能的作用，死亡率從50%降到10%。 2.硫化氫對(duì)GFAP表達(dá)的影響：我們用免疫熒光和Western-blot檢測(cè)了海馬和額頂葉皮質(zhì)GFAP的表達(dá)，結(jié)果表明，假手術(shù)組星形膠質(zhì)細(xì)胞的GFAP呈低表達(dá)，SAH模型組表達(dá)明顯增多（P＜0.05），相較于模型組，硫化氫組則表達(dá)明顯減少（P＜0.01）。 3.硫化氫對(duì)腦損傷因子MMP-9和c-fos表達(dá)的影響：Western-blot檢測(cè)分析結(jié)果顯示， SAH模型組與假手術(shù)組相比MMP-9和c-fos蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.01），而硫化氫組表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。 4.硫化氫對(duì)凋亡因子Bcl-2和caspase-3表達(dá)的影響：免疫熒光和Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，海馬皮質(zhì)Bcl-2的陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在C2和C3區(qū)，假手術(shù)組和SAH組都呈陽(yáng)性表達(dá)，但硫化氫組Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞明顯增加（P＜0.05）；caspase-3免疫熒光和Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示， SAH模型組與假手術(shù)組相比表達(dá)增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，而硫化氫組陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少（P＜0.001）。 結(jié)論： 1、SAH后可誘發(fā)大腦海馬皮質(zhì)和額頂葉皮質(zhì)GFAP表達(dá)增多。H2S干預(yù)SAH后，GFAP表達(dá)有明顯下調(diào)，H2S對(duì)腦損傷的保護(hù)作用可能與改善膠質(zhì)細(xì)胞功能有關(guān)。 2、SAH后海馬皮質(zhì)和額頂葉皮質(zhì)的MMP-9、c-fos因子表達(dá)增多。H2S處理后明顯降低兩個(gè)因子的表達(dá)，這表明H2S對(duì)神經(jīng)元的損傷有保護(hù)作用。 3、SAH后H2S有明顯改善凋亡因子caspase-3、Bcl-2的表達(dá)，表明H2S對(duì)腦損傷的保護(hù)作用可能與凋亡機(jī)制有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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本文編號(hào)：1277218