本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者外周血miRNAs的表達(dá)譜及其與疾病預(yù)后關(guān)系的研究

  更多相關(guān)文章： 微小RNA 乙型肝炎慢加急性肝衰竭 miR-142 IL-17

【摘要】：目的1）研究乙型肝炎慢加急性肝衰竭（ACLF）患者血清miRNAs的表達(dá)譜變化；2）研究免疫相關(guān)miRNAs與ACLF疾病預(yù)后的關(guān)系；3）研究預(yù)測ACLF患者血清has-miR-142的靶基因及其相關(guān)性研究。方法收集瑞金醫(yī)院感染科6例ACLF患者及6例健康志愿者（HC）的血清，抽提血清miRNAs進(jìn)行鎖核酸(LNA)-miRNA微陣列分析，根據(jù)miRNA微陣列分析篩選出ACLF患者血清中顯著改變的miRNAs。進(jìn)一步擴大樣本，共收集50例ACLF患者、20例慢性乙型肝炎患者（CHB）、20例乙型肝炎后肝硬化患者（LC）和40例HC的血清，通過實時定量PCR（RT-PCR）法檢測和驗證上述表達(dá)異常的多個血清miRNAs，并分析這些miRNAs與臨床疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后的相關(guān)性。通過GO和KEGG網(wǎng)站對miRNA的靶基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，確定相關(guān)調(diào)控靶基因，同時通過流式細(xì)胞儀和ELISA檢測外周血Th17細(xì)胞的頻數(shù)和血清IL-17的表達(dá)水平，并分析血清miRNA與靶基因的相關(guān)性。結(jié)果LNA-miRNA微陣列分析顯示，，ACLF患者血清中有92個miRNAs發(fā)生顯著變化，其中10個明顯上調(diào)，82個明顯下調(diào)。RT-PCR驗證發(fā)現(xiàn)，與HC組相比，ACLF組、CHB組、LC組血清中hsa-miR-595、hsa-miR-300、hsa-miR-491-5p相對表達(dá)量均有不同程度的上升，其中ACLF組升高更明顯，分別升高5.63倍（p 0.01）、2.14倍（p 0.01）、3.23倍（p 0.01)；血清hsa-miR-130a、hsa-miR-200b、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p的相對表達(dá)量在ACLF組、CHB組、LC組中均有不同程度的下降，在ACLF組中下降更明顯，分別下降了0.25倍（p0.01)、0.24倍（p0.01)、0.28倍（p0.001)和0.3倍（p0.001）。血清中hsa-miR-595、hsa-miR-491-5p的表達(dá)與ACLF患者的MELD評分呈正相關(guān)（r=0.8449，p0.05；r=0.5006，p0.05）；而hsa-miR-130a、hsa-miR-200b、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p的表達(dá)與ACLF患者的MELD評分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.4470，p0.05；r=-0.5371，p0.05；r=-0.4973，p0.05；r=-0.3539，p0.05）。動態(tài)隨訪ACLF組患者，根據(jù)預(yù)后分為存活組和未存活組，在存活組患者血清中，hsa-miR-595和hsa-miR-300的表達(dá)量隨著病情的好轉(zhuǎn)有明顯下降（p值均小于0.05）；而血清hsa-miR-130a和hsa-miR-142-5p的表達(dá)量與基線相比有明顯上升（p值均小于0.05）。但在未存活組，上述4個miRNAs在血清中的表達(dá)與基線值相比，沒有明顯變化。通過生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)hsa-miR-142可能對靶基因IL-17的表達(dá)發(fā)揮一定的調(diào)控作用。通過流式細(xì)胞儀和ELISA檢測發(fā)現(xiàn)ACLF組患者外周血中Th17細(xì)胞的頻數(shù)和IL-17表達(dá)量較HC組明顯升高((2.88±1.28)%Vs (2.04±0.92)%,P0.01;(69.89±31.93pg/ml) Vs (49.11±23.72pg/ml), P=0.01). ACLF患者血清中has-miR-142-3p和has-miR-142-5p的表達(dá)與血清IL-17的水平呈負(fù)性相關(guān)（r=-0.5859,p=0.006; r=-0.4827, p=0.014）。結(jié)論ACLF患者中血清hsa-miR-595、hsa-miR-300、hsa-miR-491-5p表達(dá)上調(diào)， hsa-miR-130a、 hsa-miR-200b、 hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5表達(dá)下調(diào)，并且與ACLF疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)，miRNAs表達(dá)譜的變化可能在ACLF的病程和預(yù)后中發(fā)揮一定作用；其中，has-miR-142-3p和has-miR-142-5p可能通過負(fù)性調(diào)控IL-17的表達(dá)在ACLF的病程中發(fā)揮重要作用，其確切的調(diào)控機制尚需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62;R575.3

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 林芳;Th17在乙型慢加急性肝衰竭患者中的特點及與預(yù)后相關(guān)性研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

本文編號：1190313