本文關(guān)鍵詞：組蛋白去乙酰化酶在膿毒癥相關(guān)性腦病中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：膿毒癥相關(guān)性腦病(sepsis-associated encephalopathy, SAE)是由非直接腦感染引起的、全身炎癥反應(yīng)所致的彌散性腦功能障礙,是膿毒癥發(fā)展過程中嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥。SAE在ICU患者中比較常見,高達(dá)70%的患者伴有全身性感染,且易引起認(rèn)知功能損害,目前尚缺乏有效治療措施。先前研究顯示：SAE引起的認(rèn)知功能損害與腦內(nèi)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、神經(jīng)元凋亡、神經(jīng)遞質(zhì)異常及微循環(huán)障礙等有關(guān),而其確切的發(fā)病機(jī)制并不清楚。盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture, CLP)模型可模擬臨床腹腔感染的形成、多重病原體感染導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合癥及多器官功能衰竭等,目前該動物模型已被廣泛用于SAE的基礎(chǔ)研究。組蛋白去乙�；�(histone deacetylase, HDAC)抑制劑丙戊酸(valproic acid,VPA)是一種易通過血腦屏障的抗癲癇藥物。近年來VPA的神經(jīng)保護(hù)作用日益受到關(guān)注,有研究顯示VPA具有抑制HDAC活性、抗凋亡和促神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)等作用,可明顯改善阿爾茲海默病等神經(jīng)退行性疾病中的認(rèn)知功能損害[6]。然而,仍然不清楚HDAC抑制劑VPA是否能夠逆轉(zhuǎn)SAE相關(guān)性認(rèn)知功能損害。本研究主要觀察HDAC抑制劑VPA對SAE小鼠認(rèn)知功能的影響并探討其可能機(jī)制。采用CLP建立SAE模型,觀察HDAC1、HDAC2、總H3、總H4、乙�；M蛋白H3賴氨酸9(H3K9)、乙�；M蛋白H4賴氨酸12(H4K12)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF).酪氨酸激酶B(tyrosine kinase B,TrkB)、磷酸化酪氨酸激酶B(phosphorylated tyrosine kinase B,pTrkB).活化的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(Activated cysteine-containing aspartate-specific,Activated caspase-3)和突觸后密度蛋白95(postsynaptic density 95,PSD95)等在CLP后經(jīng)過VPA處理或VPA+K252a(TrkB抑制劑)處理后海馬內(nèi)含量的變化,觀察VPA是否可逆轉(zhuǎn)SAE相關(guān)性認(rèn)知功能損害及可能機(jī)制,為SAE的治療提供新思路。目的：觀察HDAC抑制劑VPA對SAE小鼠認(rèn)知功能的影響并探討其可能機(jī)制。方法：采用CLP建立SAE模型。160只成年雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為五組：假手術(shù)(Sham)+生理鹽水(Saline)組(n=20)、Sham+VPA組(n=20)、CLP+Saline組(n=40)、CLP+VPA組(n=40)及CLP+VPA+K252a組(n=40)。術(shù)后15天起每日腹腔內(nèi)注射生理鹽水(10 ml/kg)、VPA(100 mg/kg)或VPA(100 mg/kg)+K252a(1 mg/kg),連續(xù)14天。術(shù)后第29天行曠場實(shí)驗(yàn)和水迷宮測試。行為學(xué)測試后取小鼠海馬組織, 采用Western Blotting法檢測HDAC1、HDAC2、總H3、總H4、乙�；疕3K9、乙�；疕4K12、BDNF、TrkB、 pTrkB、Activated caspase-3和PSD95的含量；ELISA法檢測白介素(IL)一1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量；硫代巴比妥酸法測定丙二醛(malondialdehyde,MDA)濃度；電鏡觀察突觸數(shù)量變化。結(jié)果：與Sham+Saline組相比,CLP+Saline組探索時間明顯縮短,HDAC2、Activated-caspase-3及IL-1β含量明顯增高,乙�；疕3K9、乙�；疕4K12、BDNF、 pTrkB/TrKB和PSD95含量及突觸數(shù)目明顯降低(P0.05)；與CLP+Saline組相比,CLP+VPA組小鼠探索時間明顯延長,HDAC2、Activated-caspase-3及IL-1β含量明顯降低,乙酰化H3K9、乙酰化H4K12.BDNF.pTrkB/TrKB和PSD95含量及突觸數(shù)目明顯增加(P0.05):CLP+Saline組與CLP+VPA+K252a組相比,各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；各組HDAC1含量及MDA濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：HDAC參與了SAE小鼠的發(fā)病,HDAC抑制劑VPA可明顯改善SAE小鼠的認(rèn)知功能損害,其機(jī)制可能與降低海馬中HDAC2和其下游的IL-1β、Activated caspase-3含量以及激活BDNF-TrkB信號通路有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R459.7;R747.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 王星明;董琳;紀(jì)木火;曾秋婷;管雙仙;李國民;楊建軍;;富氫液對膿毒血癥大鼠腸損傷的影響[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2013年02期

2 李新枝;聶政;;丙戊酸對大鼠急性脊髓損傷的保護(hù)作用[J];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

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本文編號：1171007