本文關(guān)鍵詞：胸腺素β4促進肝前體細胞分化為肝細胞的體外研究

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【摘要】：目的 探索胸腺素p4(Tβ4)對肝前體細胞(WB-F344細胞)增殖及分化的影響,研究Tβ4誘導分化細胞的功能,為Tβ4在促進肝前體細胞分化,促進肝再生方面提供理論依據(jù)。方法 1.用含不同濃度Tβ4的等量培養(yǎng)液體外培養(yǎng)WB-F344細胞,培養(yǎng)液中Tβ4濃度分別為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml,相應命名為1ng/ml組、10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組,以無Tβ4培養(yǎng)液培養(yǎng)的細胞為空白對照組。在加入處理因素培養(yǎng)細胞1天、2天及3天后,采用CCK-8方法檢測各組Tβ4對F344細胞增殖的影響,同時觀察Tβ4對WB-F344細胞形態(tài)的影響。 2.選擇對WB-F344細胞增殖影響有統(tǒng)計學意義的組(10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組),同時設立空白對照組,采用qRT-PCR方法檢測肝細胞標志物(白蛋白)、肝干細胞標志物(甲胎蛋白)及膽管細胞標志物(細胞角蛋白-19)基因的表達,采用Western blot方法檢測白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)及細胞角蛋白-19(CK-19)蛋白的表達,確定Tβ4可誘導WB-F344細胞分化為何種細胞。在加入處理因素5天后,觀察Tβ4誘導細胞的糖原合成功能,吲哚靛青綠攝取情況,研究Tβ4誘導細胞可發(fā)揮的功能。 結(jié)果 1.細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn)：加入處理因素1天及2天后,實驗組細胞增殖與對照組相比無明顯差異,而在加入處理因素3天后,10ng/ml組.、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,細胞增殖速度減緩(P0.05)。同時,Tβ4誘導培養(yǎng)細胞的細胞核由肝前體細胞的單核細胞向肝細胞樣細胞的雙核或多核細胞轉(zhuǎn)變。 2.在加入處理因素后3天后,qRT-PCR結(jié)果顯示：100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,ALB基因表達量明顯增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P均0.05),Western blot結(jié)果顯示：10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,CK-19蛋白表達量下降,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。在加入處理因素5天后,Western blot結(jié)果顯示：10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,AFP蛋白表達量下降(P均0.05),在100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,ALB蛋白表達量增加(P均0.05),呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。 3.在細胞功能方面：在加入處理因素后5天后,糖原染色結(jié)果及ICG攝取實驗結(jié)果顯示Tβ4誘導細胞較對照組相比,糖原合成及ICG攝取增多,且在1μg/ml組最明顯。 結(jié)論 Tβ4可誘導WB-F344細胞向成熟肝細胞方向分化,且誘導分化的細胞具備一定的成熟肝細胞的功能,為Tβ4應用于肝再生提供一定的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：胸腺素β4 肝臟前體細胞 分化 肝細胞 肝再生
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 1.1 對象與方法16-34
• 1.1.1 研究對象16
• 1.1.2 主要試劑16-18
• 1.1.3 主要儀器設備18-19
• 1.1.4 主要溶液及其配制19-23
• 1.1.5 WB-F344細胞培養(yǎng)方法23-26
• 1.1.6 應用CCK-8方法測定Tβ4對細胞增殖的影響26-27
• 1.1.7 Tβ4誘導WB-F344細胞的處理27
• 1.1.8 qRT-PCR方法檢測AFP、ALB、CK-19的mRNA表達27-30
• 1.1.9 Western Blot方法檢測AFP、ALB、CK-19的蛋白表達30-33
• 1.1.10 細胞的過碘酸雪夫染色33
• 1.1.11 細胞的吲哚靛青綠攝取實驗33-34
• 1.1.12 統(tǒng)計學處理34
• 1.2 結(jié)果34-42
• 1.2.1 不同濃度Tβ4對WB-F344細胞增殖的影響34-35
• 1.2.2 不同濃度Tβ4對WB-F344細胞形態(tài)的影響35-36
• 1.2.3 Tβ4對WB-F344細胞AFP、ALB、CK-19基因表達的影響36-37
• 1.2.4 Tβ4對WB-F344細胞AFP、ALB、CK-19蛋白表達的影響37-39
• 1.2.5 Tβ4對WB-F344細胞糖原合成功能的影響39-40
• 1.2.6 Tβ4對WB-F344細胞ICG攝取能力的影響40-42
• 1.3 討論42-48
• 1.3.1 Tβ4結(jié)構(gòu)及生物學特點42-43
• 1.3.2 Tβ4與細胞再生43-44
• 1.3.3 肝細胞再生方式44-45
• 1.3.4 WB-F344細胞是一種雙向分化潛能的肝前體細胞45-46
• 1.3.5 肝前體細胞分化過程中細胞標志物的變化46
• 1.3.6 Tβ4在肝衰竭中的應用前景46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述57-66
• 綜述參考文獻62-66
• 致謝66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 李軒;姜志昕;郝朋;湯欣;;胸腺素β4對體外培養(yǎng)的兔角膜上皮細胞氧化損傷的保護作用[J];中華眼科雜志;2013年08期

2 中華醫(yī)學會感染病學分會肝衰竭與人工肝學組;中華醫(yī)學會肝病學分會重型肝病與人工肝學組;;肝衰竭診治指南(2012年版)[J];實用肝臟病雜志;2013年03期

3 董娟娟;曾珊;歐陽淼;黃增輝;申z，

本文編號：1092506