發(fā)布時間：2017-10-25 06:33

  本文關(guān)鍵詞：胸腺素β4促進(jìn)肝前體細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的體外研究

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【摘要】：目的 探索胸腺素p4(Tβ4)對肝前體細(xì)胞(WB-F344細(xì)胞)增殖及分化的影響,研究Tβ4誘導(dǎo)分化細(xì)胞的功能,為Tβ4在促進(jìn)肝前體細(xì)胞分化,促進(jìn)肝再生方面提供理論依據(jù)。方法 1.用含不同濃度Tβ4的等量培養(yǎng)液體外培養(yǎng)WB-F344細(xì)胞,培養(yǎng)液中Tβ4濃度分別為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml,相應(yīng)命名為1ng/ml組、10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組,以無Tβ4培養(yǎng)液培養(yǎng)的細(xì)胞為空白對照組。在加入處理因素培養(yǎng)細(xì)胞1天、2天及3天后,采用CCK-8方法檢測各組Tβ4對F344細(xì)胞增殖的影響,同時觀察Tβ4對WB-F344細(xì)胞形態(tài)的影響。 2.選擇對WB-F344細(xì)胞增殖影響有統(tǒng)計學(xué)意義的組(10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組),同時設(shè)立空白對照組,采用qRT-PCR方法檢測肝細(xì)胞標(biāo)志物(白蛋白)、肝干細(xì)胞標(biāo)志物(甲胎蛋白)及膽管細(xì)胞標(biāo)志物(細(xì)胞角蛋白-19)基因的表達(dá),采用Western blot方法檢測白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)及細(xì)胞角蛋白-19(CK-19)蛋白的表達(dá),確定Tβ4可誘導(dǎo)WB-F344細(xì)胞分化為何種細(xì)胞。在加入處理因素5天后,觀察Tβ4誘導(dǎo)細(xì)胞的糖原合成功能,吲哚靛青綠攝取情況,研究Tβ4誘導(dǎo)細(xì)胞可發(fā)揮的功能。 結(jié)果 1.細(xì)胞增殖實驗發(fā)現(xiàn)：加入處理因素1天及2天后,實驗組細(xì)胞增殖與對照組相比無明顯差異,而在加入處理因素3天后,10ng/ml組.、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,細(xì)胞增殖速度減緩(P0.05)。同時,Tβ4誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核由肝前體細(xì)胞的單核細(xì)胞向肝細(xì)胞樣細(xì)胞的雙核或多核細(xì)胞轉(zhuǎn)變。 2.在加入處理因素后3天后,qRT-PCR結(jié)果顯示：100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,ALB基因表達(dá)量明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),Western blot結(jié)果顯示：10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,CK-19蛋白表達(dá)量下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。在加入處理因素5天后,Western blot結(jié)果顯示：10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,AFP蛋白表達(dá)量下降(P均0.05),在100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比,ALB蛋白表達(dá)量增加(P均0.05),呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。 3.在細(xì)胞功能方面：在加入處理因素后5天后,糖原染色結(jié)果及ICG攝取實驗結(jié)果顯示Tβ4誘導(dǎo)細(xì)胞較對照組相比,糖原合成及ICG攝取增多,且在1μg/ml組最明顯。 結(jié)論 Tβ4可誘導(dǎo)WB-F344細(xì)胞向成熟肝細(xì)胞方向分化,且誘導(dǎo)分化的細(xì)胞具備一定的成熟肝細(xì)胞的功能,為Tβ4應(yīng)用于肝再生提供一定的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：胸腺素β4 肝臟前體細(xì)胞 分化 肝細(xì)胞 肝再生
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 1.1 對象與方法16-34
• 1.1.1 研究對象16
• 1.1.2 主要試劑16-18
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備18-19
• 1.1.4 主要溶液及其配制19-23
• 1.1.5 WB-F344細(xì)胞培養(yǎng)方法23-26
• 1.1.6 應(yīng)用CCK-8方法測定Tβ4對細(xì)胞增殖的影響26-27
• 1.1.7 Tβ4誘導(dǎo)WB-F344細(xì)胞的處理27
• 1.1.8 qRT-PCR方法檢測AFP、ALB、CK-19的mRNA表達(dá)27-30
• 1.1.9 Western Blot方法檢測AFP、ALB、CK-19的蛋白表達(dá)30-33
• 1.1.10 細(xì)胞的過碘酸雪夫染色33
• 1.1.11 細(xì)胞的吲哚靛青綠攝取實驗33-34
• 1.1.12 統(tǒng)計學(xué)處理34
• 1.2 結(jié)果34-42
• 1.2.1 不同濃度Tβ4對WB-F344細(xì)胞增殖的影響34-35
• 1.2.2 不同濃度Tβ4對WB-F344細(xì)胞形態(tài)的影響35-36
• 1.2.3 Tβ4對WB-F344細(xì)胞AFP、ALB、CK-19基因表達(dá)的影響36-37
• 1.2.4 Tβ4對WB-F344細(xì)胞AFP、ALB、CK-19蛋白表達(dá)的影響37-39
• 1.2.5 Tβ4對WB-F344細(xì)胞糖原合成功能的影響39-40
• 1.2.6 Tβ4對WB-F344細(xì)胞ICG攝取能力的影響40-42
• 1.3 討論42-48
• 1.3.1 Tβ4結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特點42-43
• 1.3.2 Tβ4與細(xì)胞再生43-44
• 1.3.3 肝細(xì)胞再生方式44-45
• 1.3.4 WB-F344細(xì)胞是一種雙向分化潛能的肝前體細(xì)胞45-46
• 1.3.5 肝前體細(xì)胞分化過程中細(xì)胞標(biāo)志物的變化46
• 1.3.6 Tβ4在肝衰竭中的應(yīng)用前景46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述57-66
• 綜述參考文獻(xiàn)62-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 李軒;姜志昕;郝朋;湯欣;;胸腺素β4對體外培養(yǎng)的兔角膜上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J];中華眼科雜志;2013年08期

2 中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會肝衰竭與人工肝學(xué)組;中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會重型肝病與人工肝學(xué)組;;肝衰竭診治指南(2012年版)[J];實用肝臟病雜志;2013年03期

3 董娟娟;曾珊;歐陽淼;黃增輝;申z，

本文編號：1092506